bcl-x基因及其对细胞凋亡的调节

ｂｃｌｘ 是ｂｃｌ２ 家族中的重要成员， 由于不同的剪接产生ＢｃｌＸＬ、ＢｃｌＸＳ、ＢｃｌＸγ三种同源蛋白． ＢｃｌＸＬ、ＢｃｌＸγ抑制凋亡， ＢｃｌＸＳ 促进凋亡． ｂｃｌｘ 在细胞发育、维持机体平衡、肿瘤发生和预后中起作用． ＢｃｌＸ 通过与Ｂｃｌ２ 、Ｂａｘ 、Ｂａｄ 等相互作用而实现对凋亡的调控．

儿童急性白血病mdrl,bcl-x_L/bcl-XS和bcl-2/bax基因表达水平改变及其临床意义

目的 通过检测儿童急性白血病多药耐药基因及细胞凋亡调控基因表达水平的改变 ,分析不同类型白血病的主要耐药机制。 方法 采用RT PCR检测 75例儿童急性白血病骨髓细胞mdr1、Bcl 2、Bax、bcl xL 和Bcl xs基因的mRNA表达水平 ,同时分析化疗效果。结果 ANLL耐药组mdrl基因和bcl 2基因表达率明显升高。其中7/14例mdrl阳性表达的未缓解患者同时具有Bcl 2基因的表达 ;ALL耐药组中Bcl 2 /Bax和bcl xL/bcl XS的比值升高明显高于药物敏感组。结论 儿童ALL和ANLL存在不同的耐药机制。

大鼠液压脑损伤后Bcl-2、Bcl-x和Bax蛋白表达的改变

目的 :探讨液压脑损伤后凋亡相关基因 bcl- 2、bcl- x和 bax在蛋白水平的表达变化规律及神经细胞凋亡的分子生物学机制。 方法 :应用免疫组化方法分别检测大鼠中型液压脑损伤后不同时程 Bcl- 2、Bcl- x和 Bax蛋白表达情况。 结果 :伤后 6 h,打击侧海马 CA3区 Bcl- 2和 Bcl- x蛋白表达显著下降 ,Bax的表达无明显变化 ,(Bcl- 2 + Bcl- x) / Bax比率下降主要由于前者下降所致。伤后 1～ 3 d,Bax蛋白表达显著增加 ,Bcl- 2和 Bcl- x的表达下降相对缓慢 ,(Bcl- 2 + Bcl- x) / Bax比率同样减小。 结论 :bcl- 2基因家族参与了液压脑损伤后神经细胞凋亡 。

高糖对人脐静脉内皮细胞凋亡及bcl-x、bax和eNOS表达的影响

目的:探讨高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响,及其与bcl-x、bax和eNOS表达的相关性。方法:将培养成功的HUVEC以不同浓度的葡萄糖孵育72h,提取细胞总RNA。采用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法检测内皮细胞bcl-x、bax以及eNOS表达。用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法进行内皮细胞凋亡定性。结果:高浓度葡萄糖(33.3mmol)可诱导HUVEC凋亡增加(P<0.01),eNOS及bcl-x表达减弱。HUVEC凋亡与eNOS表达呈负相关。结论:糖尿病状态下高血糖诱导内皮细胞凋亡,可能与bcl-x及eNOS表达减弱有关。

用显微注射法建立转bcl-x_l基因小鼠

建立转bcl xl基因小鼠 ,继而传代建系 ,用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法 ,将人bcl xl基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠 ,然后作PCR ,Southern blot ,mRNA ,Western blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵 16 5 4枚 ,移植卵数 14 4 8枚 ,受体鼠 4 9只 ,怀孕鼠 7只 ,子代鼠 13只 ,整合数 4只并均有表达 ,植入受精卵的存活率 83% ,受精卵的总存活率 0 .78% ,移植鼠的怀孕率 14 .3% ,整合效率 30 .7% ,总有效率为 0 .2 4 %。初步获得了转bcl

Bcl-x_l和Bcl-2在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中的表达

目的 探讨B细胞淋巴瘤 白血病 2 (B celllymphoma leukemia 2 ,Bcl 2 )基因及B细胞淋巴瘤 白血病 x基因长片段 (B celllymphoma leukemia xlong ,Bcl xl)在鼻息肉组织嗜酸性粒细胞中的蛋白表达及鼻腔应用二丙酸倍氯米松 (biclomethasonedipropionate,Bdp)对其表达的影响。方法 采用May Gr櫣ｎｗａｌｄ Giemsa(MGG)染色和免疫组织化学染色 ,观察比较经Bdp治疗 10～ 12周鼻息肉组织 (2 5例 )和未治疗鼻息肉组织 (2 7例 )中嗜酸粒细胞的浸润状态和对Bcl xl,Bcl 2蛋白的表达。结果 ①治疗组鼻息肉组织中嗜酸粒细胞的浸润程度弱于未治组 ,两者间差异有显著性意义 (P <0 .0 1) ;② 5 2例鼻息肉组织均无Bcl 2蛋白的表达 ;③治疗组Bcl xl 表达率为 2 0 .0 % ,未治组表达率为 48.1% ,2组的表达率差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 Bcl xl 可能在鼻息肉组织嗜酸粒细胞凋亡中发挥抗凋亡作用 ,糖皮质激素可能通过抑制Bcl

缺血后处理对大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-xl/s的影响

目的:从Bcl-xl/s基因和蛋白水平探讨缺血后处理抗大鼠心肌细胞凋亡的机制。方法:18只健康Wistar大鼠随机分为假手术(Sham)组、缺血再灌注损伤(I/R)组、缺血后处理(PostC)组,每组6只。采用原位缺口末端标记(TUNEL)检测大鼠心肌细胞凋亡指数;免疫组化法检测BcL-xl/s蛋白表达水平;荧光实时定量PCR法检测心肌组织Bcl-xl/s基因表达水平。结果:与I/R组相比,PostC组再灌注后心肌细胞凋亡指数明显降低,PostC组Bcl-xl蛋白及mRNA表达水平明显上调,Bcl-xs蛋白及mRNA表达水平明显下调。结论:PostC能显著减少缺血再灌注后心肌细胞凋亡,凋亡相关基因Bcl-xl、Bcl-xsmRNA及蛋白参与了由缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡。

bcl-x_S增加鼻咽癌细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 :利用bcl xS基因降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,促进化疗药物顺铂诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,探索提高顺铂疗效的新途径。方法 :利用脂质体LipofectAmine将含有人bcl xS基因的重组真核表达质粒pcDNA3xS导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE 2Z ,G4 18筛选培养后 ,经Westernblot检测bcl xS的表达。以不含有bcl xS基因的pcDNA3质粒转染CNE 2Z作为对照细胞(CNE 2Zneo)。顺铂处理 2种细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪及荧光染色检测凋亡细胞百分比。结果 :Westernblot检测证实获得稳定表达bcl xS的细胞 (CNE 2ZxS) ,与对照细胞相比 ,其对顺铂的IC50 值明显降低 ,经相同剂量顺铂处理后 ,流式细胞仪及荧光染色检测 ,结果表明 ,其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论 :bcl xS能显著增加鼻咽癌CNE

抑凋亡基因bcl-X_L在胰腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨抑凋亡基因 bcl- XL 在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学链霉亲和素方法 (SABC) ,检测 5 2例份胰腺癌组织中凋亡抑制基因 bcl- XL 的基因蛋白产物 ,并与良性和正常胰腺组织作对照分析。结果 胰腺癌组织中 bcl- XL 的阳性表达率为 73.1% ,显著高于胰腺良性组织及正常组织 ,bcl-XL 的表达与肿瘤的 TNM分期有关 ,而与肿瘤直径、淋巴结转移、分化程度、病理类型等无关。结论 bcl- XL

鼠bcl-X_L基因在CHO细胞中的表达

目的 :构建携带鼠bcl XL 基因的真核表达载体 ,并将其在CHO细胞中表达 .方法 :用反转录PCR获取鼠bcl XL全长cDNA序列 ,将其克隆进pEGFP重组融合表达质粒 .脂质体法转染CHO细胞 ,荧光检测目的蛋白表达 .结果 :成功获得了鼠bcl XLcDNA ,构建了编码鼠bcl XL 的真核融合表达载体pEGFP bcl XL,转染CHO细胞后观察到融合蛋白表达 .结论 :鼠bcl XL 基因的克隆及融合表达 ,为进一步在高密度、大规模细胞培养中利用bcl

Bcl-x基因转录后剪切方式改变在大鼠胰岛细胞凋亡中的作用

目的 探明 Bcl- x基因在大鼠胰岛细胞凋亡时剪切方式的变化及其该基因在胰岛细胞凋亡中的作用。方法 应用 TUNEL法检测长期高糖培养时大鼠胰岛细胞凋亡 ,应用半定量多重 RT- PCR(SQ- RT- PCR)检测了胰岛细胞凋亡时 Bcl- x基因 m RNA的表达变化情况 ;同时观察小剂量 STZ所致的糖尿病大鼠胰岛 Bcl- x基因 m RNA的表达变化。结果 2 5 .5 m M葡萄糖浓度体外培养 14天较 5 .5 m M和 11.1m M葡萄糖浓度培养 ,胰岛细胞凋亡百分率明显增加 ,分别为 31.5± 4 .5 % ,15 .4± 3.0 % ,17.4± 4 .8% ;P <0 .0 1。细胞凋亡百分率变化的同时伴有 Bcl- x基因转录后剪切方式的改变 ,表现为 Bcl- x S m RNA表达明显增加 ;低剂量 STZ所致的糖尿病大鼠胰岛 Bcl- x S m RNA表达明显增加 ,Bcl-x L与 Bcl- x S比率明显减少。结论 长期高糖可以诱导大鼠胰岛细胞凋亡 ,Bcl- x基因剪切方式的改变所致的 Bcl- x L/Bcl- x S比率的变化在高糖和

超声微泡介导bcl-xl基因抗视网膜神经节细胞凋亡作用的实验研究

目的评价超声微泡介导bclxl基因抗视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的作用。方法体外混合培养LongEvans大鼠RGCs,并建立N甲基D天冬氨酸(NMDA)损伤的RGCs凋亡模型。将体外培养的RGCs分为A组(正常对照组),B组(NMDA组),C组(bclxl转染+NMDA组);其中C组在加入NMDA前48h用超声微泡介导bclxl转染RGCs。转染48h后采用免疫组化分析转染细胞和未转染细胞的bclxl蛋白水平;加入NMDA36h后采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色检测细胞凋亡的形态特征,琼脂糖电泳检测细胞凋亡DNA片断。结果免疫组化检测表明转染细胞与未转染细胞的bclxl蛋白表达水平有差异,AO/EB检测发现B组可见大量凋亡小体,C组可见少许凋亡细胞。琼脂糖电泳检测亦发现B组呈典型的DNA“梯度”条带,而A组和C组无明显的DNA“梯度”条带。结论超声微泡介导bc1xl基因抗视网膜神经节细胞凋亡有一定作用,有可能为视网膜视神经疾病的基因治疗提供一种新的方法。

BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的表达及其意义

目的检测BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡的表达,探讨细胞凋亡调控基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的作用。方法应用免疫组织化学染色法,观察不同剂量糖皮质激素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡时BAD和Bcl-X/L基因的表达。结果免疫组织化学结果表明,正常对照组胸腺内BAD呈低表达,地塞米松组随剂量的增加BAD的表达成递增趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有有统计学意义(P<0.05);正常对照组胸腺内Bcl-X/L呈高表达,地塞米松组随剂量的增加Bcl-X/L的表达成递减趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论促凋亡蛋白BAD和抗凋亡蛋白Bcl-X/L在糖皮质激素诱导引起的胸腺细胞凋亡调控中起重要作用。

细菌内同源重组高效制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-X_L的重组腺病毒载体

目的 :制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-XL 的重组腺病毒载体。方法 :采用PCR方法从质粒pEGFP -C3 -bcl-XL 中扩增出bcl-XL 基因 ,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒pAdTrack -CMV -bcl-XL;然后与pAdEasy - 1共转化BJ51 83菌 ,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy - 1 -gfp -bcl-XL,筛选同源重组的阳性克隆 ;抽提的pAdEasy - 1 -gfp -bcl-XL 经PacI线性化后 ,再用LIPOFECTAMINETM2 0 0 0介导转染至人胚肾 2 93细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒 ;采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定 ;用氯化铯超高速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒rAd -gfp -bcl-XL。结果 :由pAdTrack -CMV -bcl-XL 和pAdEasy - 1共转化BJ51 83菌1 6 - 2 0h后 ,可获得 35 %的阳性重组体细菌克隆。由重组质粒DNA经 2 93细胞包装后产生的重组腺病毒 ,经PCR检测表明含有目的基因bcl-XL。氯化铯纯化所得重组腺病毒滴度约为 6 5× 1 0 1 2 PFU/L。结论 :用细菌内同源重组法可以高效、简便、快捷地制备出重组腺病毒质粒载体 ,重组体病毒质粒经 2 93细胞包装、扩增和氯化铯纯化后可制备出高滴度的重组腺病毒颗粒rAd -gfp -bcl-XL,为人类相关疾病的基因治疗提供良好的基因转染载体。

雌激素受体和凋亡相关基因bcl-x及bax在人原发性胆囊癌中表达的临床意义

目的 研究凋亡相关基因bcl x、bax和雌激素受体 (ER)在原发性胆囊癌 (PGC)中表达的意义。方法 应用免疫组织化学LDP法检测石蜡包埋的PGC标本中ER和凋亡相关基因bcl x及bax的表达。结果 bcl x、bax和ER在 47例PGC中表达阳性率分别为 72 .3 % (3 4/4 7)、66.0 % (3 1/4 7)和 5 9.6% (2 8/4 7) ,在 15例胆囊不典型增生中表达阳性率分别为 40 .0 % (6/15 )、93 .3 % (14 /15 )和 93 .3 % (14 /15 )。bax和ER在PGC中的表达显著低于胆囊不典型增生(P<0 .0 5 ) ,而bcl x则高于后者 (P<0 .0 5 )。ER和bax的表达在高分化型PGC显著高于中、低分化型 (P<0 .0 5 ) ,而bcl x则低于后者 (P<0 .0 5 ) ;ER和bax的表达在男性PGC患者显著低于女性患者 (P<0 .0 1) ,而bcl x的表达则男性显著高于女性 (P<0 .0 5 ) ;ER表达在肿瘤直径 ≤2cm者显著高于 >2cm者 (P<0 .0 5 ) ,而bcl x及bax的表达则差异均无显著性意义 (P >0 .0 5 )。bcl x、bax和ER的表达在PGC的Nevin临床分期Ⅰ～Ⅲ期和Ⅳ～Ⅴ期间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 凋亡相关基因ER和bcl x及bax的表达与PGC的分化程度、性别等因素有关 。

大鼠液压脑损伤后 bax/ bcl-x_L的表达在 m RNA和蛋白质水平的相关性(英文)

目的 :探讨脑创伤后 bax/bcl- x L 在 m RNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系。方法 :在液压脑损伤模型中 ,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程 bax和 bcl- x L 表达 ;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征。结果 :伤后 6 h,bcl- x L m RNA表达下调 [伤侧半球为对侧的 (6 7.42± 7.5 4) % ],bcl- x L 蛋白水平下降 [伤侧为对侧的 (85 .85± 5 .72 ) % ]。伤后 3d,bcl- x L m RNA和 bcl- x L蛋白表达分别为对侧的 (39.97± 3.6 1) %和 (5 7.5 0± 6 .2 1) % ;bax m RNA和 bax蛋白分别为对侧半球的 (2 0 3.95± 17.5 3) %和 (189.0 2± 7.2 3) %。伤后 bax/bcl- x L 比率升高比细胞凋亡提前出现 ,早期由于 bcl- x L 的表达下降 ,后期主要是由于 bax的升高所致。结论 :细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性 ;脑创伤对 bax和 bcl- x L 的调节发生在转录水平以前的某一环节。bax/bcl- x L

胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠Bcl-x和p53表达的影响

目的观察胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠Bcl-x和p53表达的影响。方法将大鼠分成4组,空白组、模型组、中药对照组、中药治疗组。空白组腹腔注射0.9%氯化钠注射液;其余各组腹腔注射L-精氨酸,制备慢性胰腺炎大鼠模型。造模成功,各组实行相应治疗2个月。治疗结束后,采用免疫组织化学法检测各组大鼠胰腺组织的Bcl-x和p53蛋白表达。结果模型组、中药对照组和中药治疗组中的Bcl-x蛋白表达水平显著低于空白组;中药治疗组中的Bcl-x蛋白表达水平高于中药对照组和模型组;模型组、中药对照组和中药治疗组中的p53蛋白表达水平显著高于空白组;中药治疗组中的p53蛋白表达水平低于中药对照组和模型组(均P<0.05或P<0.01)。结论胰泰复方可以减缓慢性胰腺炎胰腺纤维化进程,其分子机制可能与Bcl-x蛋白表达上调及p53蛋白表达下调相关。

bcl-x、bax基因表达与肝细胞癌临床病理特征的关系

目的研究凋亡相关基因bcl-x及bax在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达与HCC临床病理学特征的关系及其意义。方法采用免疫组织化学方法，检测石蜡包埋的HCC标本中凋亡相关基因bcl-x及bax的表达。结果在40例HCC中，bcl-x和bax阳性者分别为20 例和19例；14例肝硬变bcl-x和bax 阳性者分别为12例和11例。bcl-x和bax 在HCC细胞中的表达均低于肝硬变(均P∨0.05)；bcl-x和bax在高中分化型HCC细胞中的表达均高于低分化型。AFP≤400μg/L的患者二者的表达均高于AFP∧400μg/L的患者。在临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的HCC细胞中的表达均高于Ⅲ期, 彼此间均有显著性差异；而在男性与女性患者间, 在年龄∧60岁与∨60岁患者间，均无显著性差异(均为P∧0.05)。凋亡相关基因bcl-x及bax在HCC细胞的表达呈正相关(r=0.5602, P∨0.001)。结论凋亡相关基因bcl-x和bax在HCC细胞中的表达，对肝癌细胞的凋亡具有调节作用, 并与HCC的分化程度、临床分期和AFP的水平有关。

反义RelA下调白血病耐药细胞株HL-60/E6 bcl-x_L mRNA

为了探讨NF κB对白血病耐药细胞株HL 6 0 E6bcl x基因转录的影响 ,首先在体外采用间歇小剂量表阿霉素 (6ng ml)作用于HL 6 0细胞的方法 ,建立了性能稳定的广谱耐药细胞株HL 6 0 E6。然后用RT PCR方法检测 5 μmol L硫代修饰反义RelA作用于HL 6 0 E6细胞后bcl x基因mRNA水平的变化。同时应用免疫荧光技术和流式细胞术分别对HL 6 0 E6细胞中NF κB RelA的功能状态及脂质体作为寡核苷酸载体的转染效率进行评估。结果表明 ,在HL 6 0 E6细胞中RelA表达于胞核 ,NF κB处于持续活化状态。脂质体介导的寡核苷酸 (ODN)的转染效率明显高于裸ODN组 ,在 4 ,6和12小时时有显著差异 (P <0 .0 1)。反义RelA作用于HL 6 0 E6细胞后 ,bcl xL mRNA水平下降呈时间依赖性 ,8小时抑制达到最高峰 ,15小时后逐渐恢复 ,而对照组bcl xL mRNA水平变化不明显。分析结果认为 ,NF κB对bcl x有转录调节作用 ,反义技术封闭RelA亚基可以减弱NF κB对bcl xL 基因的转录激活 ,进而推测NF κB可能是白血病细胞耐药的一个重要因子。

大鼠液压脑损伤后bax和bcl-X_L的表达改变在mRNA和蛋白水平的相关性

目的 探讨脑创伤后bax和bcl xL 在mRNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系。方法 在液压脑损伤模型中 ,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程bax和bcl xL 的表达 ;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征。结果 伤后 6h ,bcl xL mRNA下调 [伤侧半球为对侧的 (6 7.42± 7.5 4) % ],bcl xL 蛋白水平下降 [伤侧为对侧的 (85 .85± 5 .72 ) % ]。伤后 3d ,bcl xL mRNA和bcl xL 蛋白表达分别为对侧的 (39.97± 3.6 1) %和 (5 7.5 0± 6 .2 1) % ;baxmRNA和bax蛋白分别为对侧半球的 (2 0 3.95± 17.5 3) %和 (189.0 2± 7.2 3) %。伤后bax/bcl xL 比率升高比细胞凋亡提前出现 ,早期由于bcl xL 的表达下降 ,后期主要是由于bax的升高所致。结论 细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性 ;脑创伤对bax和bcl xL 的调节发生在转录水平以前的某一环节。bax/bcl xL 平衡体系的维持或紊乱影响脑创伤后神经细胞生存或死亡。