IL-35、Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义

目的探讨白细胞介素(IL)-35、自噬相关蛋白Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义。方法选取2022年5-10月在上海市嘉定区妇幼保健院诊治的原发性乳腺癌女性患者44例(乳腺癌组)、乳腺良性肿瘤女性患者40例(乳腺良性肿瘤组)及体检的健康者40例(健康对照组)作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验检测并比较各组外周血中IL-35和Beclin-1水平,同时检测乳腺癌患者糖类抗原15-3(CA15-3),比较不同临床病理特征的乳腺癌患者IL-35、Beclin-1、CA15-3水平;分析乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1、CA15-3水平之间的相关性。结果乳腺癌组和乳腺良性肿瘤组外周血IL-35水平均高于健康对照组(P<0.05),Beclin-1水平均低于健康对照组(P<0.05)。乳腺癌组外周血IL-35水平高于乳腺良性肿瘤组(P<0.05),Beclin-1水平低于乳腺良性肿瘤组(P<0.05)。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同雌激素受体(ER)检测结果的乳腺癌患者外周血IL-35水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),而Beclin-1水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关(r=-0.484,P<0.05);IL-35、Beclin-1水平与CA15-3水平均无相关性(均P>0.05)。结论乳腺癌患者外周血IL-35水平升高、Beclin-1水平降低。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平有明显差异。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关,而IL-35、Beclin-1水平与肿瘤标志物CA15-3水平均无关。

痛风性关节炎患者血清RETN、Beclin-1的表达及其临床意义

目的探讨痛风性关节炎(GA)患者血清抵抗素(RETN)、Beclin-1的表达特点,分析其与GA临床特征及临床疗效的关系。方法将2019年1月至2022年12月东莞市人民医院收治的82例GA患者(GA组)和60例健康志愿者(对照组)纳入研究。GA患者治疗前后(对照组体检当日)检测血清RETN、Beclin-1的表达,比较不同临床特征和疗效GA患者血清RETN、Beclin-1表达差异。Pearson相关性分析GA患者血清RETN、Beclin-1表达与尿酸(UA)水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清RETN、Beclin-1对GA的诊断价值。结果GA组血清RETN水平高于对照组,Beclin-1相对表达水平低于对照组(P<0.05)。急性期、病程≥5年、受累关节≥5个、年发作频率≥3次GA患者血清RETN水平高于慢性期和间歇期、病程<5年、受累关节<5个、年发作频率<3次GA患者(P<0.05),Beclin-1相对表达水平低于慢性期和间歇期、病程<5年、受累关节<5个、年发作频率<3次GA患者(P<0.05)。GA患者血清UA水平与RETN水平呈正相关(r=0.674,P<0.05),与Beclin-1相对表达水平呈负相关(r=-0.568,P<0.05)。有效组治疗后血清RETN水平低于无效组,Beclin-1相对表达水平高于无效组(P<0.05)。联合RETN、Beclin-1诊断GA的曲线下面积为0.921,高于单独诊断(Z=3.752、3.154,P<0.05)。结论GA患者血清RETN水平增高,Beclin-1相对表达水平降低,且与UA水平增高、GA急性期、病程延长、受累关节数量和年发作频率增加及治疗无效有关。RETN、Beclin-1可作为GA诊断的标志物。

艾灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的观察艾灸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠炎症因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)及滑膜细胞中自噬相关因子Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达的影响,探索艾灸治疗RA的作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、艾灸组,每组9只。采用弗氏完全佐剂造模法制备RA大鼠模型。造模成功后艾灸组予艾灸足三里、关元,每次20 min,每天1次;甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤0.35 mg/kg灌胃,每周2次。空白组、模型组、甲氨蝶呤组每天给予艾灸组大鼠同样时长及强度的捆绑。每组均干预3周。观察大鼠一般情况,采用足趾容积测量仪检测大鼠左后肢足趾容积,ELISA法检测血清中IL-2含量,Western blot检测大鼠踝关节滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量。结果与模型组比较,甲氨蝶呤组及艾灸组精神一般,反应尚可,体质量恢复,较活跃,摄食、饮水尚可,足部肿胀、红肿缓解,其局部炎症及全身多发性关节炎情况均轻于模型组。与空白组比较,模型组大鼠于造模后第3、10、17、24天足趾容积明显增大(P<0.01),结合一般情况,提示模型制备成功;甲氨蝶呤组、艾灸组足趾容积于第24天增大(P<0.05)。与模型组比较,甲氨蝶呤组造模后第17、24天足趾容积降低(P<0.05,P<0.01),艾灸组第10、17、24天足趾容积明显降低(P<0.01)。干预3周后,与空白组比较,模型组血清中IL-2含量明显升高(P<0.01),滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量明显上升(P<0.01);与模型组比较,甲氨蝶呤组、艾灸组血清中IL-2含量降低(P<0.05),艾灸组滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量下降(P<0.05)。结论艾灸能改善RA大鼠关节肿胀,降低IL-2含量,其作用机制可能是通过调节自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量有关。

针刺调控自噬蛋白Beclin-1对脑缺血再灌注损伤大鼠海马区Caspase-9的影响

目的 探讨针刺调控细胞自噬对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠海马区细胞凋亡的影响及机制。方法 110只SD大鼠随机分为正常组22只、假手术组22只和造模组66只,造模组使用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,成功后随机均分为模型组、针刺组、药物组,每组各22只。针刺组捆绑并针刺“大椎”“百会”“人中”,药物组注射依达拉奉。Garcia神经功能评分评定大鼠神经功能,TTC染色观察脑梗死情况,透射电镜观察海马区自噬小体,TUNEL检测患侧脑组织细胞凋亡率,免疫组化检测海马区半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达,Western blot检测海马区苄氯素-1 (Beclin-1)、Caspase-9表达。结果 干预前后与正常组比较,假手术组各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。干预前,与假手术组比较,造模组神经功能评分下降(P<0.01)。针刺72 h后,与假手术组比较,模型组神经功能评分下降(P<0.01)、脑梗死面积比上升(P<0.01)、缺血侧脑组织细胞凋亡率、海马区Caspase-9、Caspase-3表达量增加(P<0.01)、Beclin-1表达量下降(P<0.05);与模型组比较,药物组、针刺组神经功能评分显著上升(P<0.01)、梗死面积比缩小(P<0.01)、患侧脑组织细胞凋亡率及海马区Caspase-9、Caspase-3下降(P<0.01)、Beclin-1表达量上升(P<0.05)。透射电镜下模型组细胞器肿胀,大多数线粒体变大,见少量溶酶体;针刺组、药物组神经细胞轻度水肿,线粒体轻度肿胀,可见初级溶酶体、自噬小体、自噬溶酶体存在。结论 针刺可调控大鼠自噬关键蛋白抑制CIRI后细胞凋亡,其机制可能与调整自噬影响Caspase-9表达相关。

自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在胸腔积液中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在良恶性胸腔积液中的表达,分析其临床意义。方法:通过液基薄层细胞学检查及免疫组化检查并结合患者临床资料纳入300例胸腔积液标本作为研究对象,分为group165例(漏出性胸腔积液组)、group2142例(非肿瘤炎性胸腔积液组)及group393例(非小细胞肺癌性胸腔积液组),通过RT-PCR方法及Western blot方法分别检测各组胸腔积液中mTOR、Beclin-1及LC3在基因及蛋白水平的表达。结果:在基因和蛋白表达水平,group1及group2相较于group3在Beclin-1和LC3的表达水平均升高,而mTOR的表达则显著减低,差异均有统计学意义;同时,group2较group1在Beclin-1和LC3表达中均降低,mTOR的表达则升高,差异均有统计学意义;此外在良、恶性胸腔积液相关性分析中发现,在蛋白水平Beclin-1相对表达值与LC3表达值呈正相关,而mTOR相对表达值与Beclin-1、LC3表达值呈负相关。结论:自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在不同性质胸腔积液中表达存在差异,可能与炎性及非小细胞肺癌引起的肿瘤性胸腔积液的发病机制有关,可为胸腔积液性质鉴定提供新的分子学依据。

Beclin-1与P62在骨质疏松症中的研究进展

骨质疏松症(OP)是一种以全身性骨量丢失、骨微结构破坏为特征的骨骼疾病,根本病因在于由成骨细胞和破骨细胞介导的骨形成与骨吸收动态平衡失调,骨吸收大于骨形成。而自噬对OP的发生、发展起着重要作用,自噬水平的变化是影响骨平衡的关键因素。研究证实,自噬相关分子Beclin-1、P62通过不同层面直接调控自噬小体的形成,从而影响OP的发生与发展。该文对Beclin-1、P62在OP中的表达机制、作用特点及靶向治疗作一概述,为今后OP的防治以及进一步研究提供理论基础。

美洲大蠊研粉干预脊髓半横断大鼠运动功能和自噬蛋白Beclin-1的表达

背景:脊髓损伤有氧化应激、炎症、凋亡、自噬等机制参与其中,激活自噬可改善脊髓损伤后的神经运动功能,对脊髓起保护作用。目的:探讨美洲大蠊研粉对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能和损伤区域自噬蛋白Beclin-1的影响。方法:取30只6-8周龄SD大鼠,采用随机数字表法分为3组,每组10只:假手术组仅打开椎板,暴露脊髓后缝合;生理盐水组与美洲大蠊组均建立左侧脊髓半横断损伤模型,术后第1天开始分别灌胃给予生理盐水与美洲大蠊研粉,连续给药14 d。术后6 h及1,3,7,14 d行BBB评分,观察后肢运动功能的情况;给药14 d后处死大鼠,采用免疫组化染色、Western Blot检测、免疫荧光染色检测脊髓半横断损伤区域自噬蛋白Beclin-1的表达情况。结果与结论:①随着术后时间的延长,生理盐水组、美洲大蠊组大鼠BBB评分逐渐升高;与假手术组比较,生理盐水组、美洲大蠊组术后6 h及1,3,7,14 d的BBB评分均降低(P<0.05);美洲大蠊组术后7,14 d的BBB评分高于生理盐水组(P<0.05);②免疫组化染色显示,假手术组Beclin-1呈弱阳性表达,主要位于胞浆;生理盐水组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;美洲大蠊组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于生理盐水组(P<0.05);③Western Blot检测与免疫荧光染色显示,生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于生理盐水组(P<0.05);④结果表明,美洲大蠊研粉能够改善脊髓半横断损伤大鼠的后肢运动功能,机制可能是美洲大蠊研粉中的多糖类物质增加了自噬蛋白Beclin-1的表达。

怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠LC3及Beclin-1表达的影响

目的:探讨怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠肾脏LC3及Beclin-1表达的影响。方法:将64只雄性SD大鼠随机分为假手术组(16只)、UUO模型组(16只)、UUO模型+怡肾丸组(16只)、UUO模型+依那普利组(16只)。手术组大鼠游离并结扎左侧输尿管制备肾纤维化模型,假手术组只游离不结扎左侧输尿管。各给药组于造模当日开始给予相应药物,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃3周。于术后第3、7、21天分批处死各组大鼠,取血清及左肾标本,检测血清肌酐、尿素氮,HE染色、Masson染色观察其病理形态学改变,免疫组织化学法及qRT-PCR法分别检测肾组织LC3及Beclin-1的蛋白及mRNA表达水平。结果:与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素水平均升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组肾功能上升速度缓慢(P<0.05);假手术组大鼠肾脏未见明显病理改变。模型组大鼠肾小球硬化,肾小管高度扩张萎缩,小管基底膜变薄,间质区细胞大量增生及纤维化,并随梗阻时间延长而加重,治疗组病理损伤明显减轻,胶原纤维沉积减少(P<0.05);与假手术组相比,模型组的LC3、Beclin1水平升高(P<0.05);与模型组相比,治疗组的LC3、Beclin1表达水平显著上升(P<0.05)。结论:UUO大鼠肾损害过程中自噬被激活,而怡肾丸增强了LC3、Beclin-1自噬相关蛋白的表达水平,并减轻肾纤维化以保护肾脏。

Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断价值及与甲状腺细针穿刺诊断准确率对比

目的 探讨自噬相关基因Beclin-1联合细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)对甲状腺癌的诊断价值,并分析两者联合与甲状腺细针穿刺诊断对甲状腺癌准确率差异。方法 选取医院2020年10月至2023年10月收治的80例甲状腺癌患者作为观察组,另取同期收治的80例甲状腺结节患者作为对照组,取所有患者术后病理组织进行免疫组化染色,qRT-PCR仪进行检测与扩增,采用2-△△α法计算Beclin-1、Cx43的相对表达量,并将两组患者Beclin-1、Cx43水平进行对比。采用Spearman相关分析法分析Beclin-1、Cx43和甲状腺癌的相关性,并使用受试者工作特征(ROC)曲线分析Beclin-1联合Cx43诊断甲状腺癌的效果,并对比两者联合与甲状腺细针穿刺对甲状腺癌的诊断价值。结果 经免疫组化结果显示,两组细胞质内均检测到Beclin-1、Cx43,且观察组的Beclin-1、Cx43相对表达量比对照组更少(P<0.05),而Beclin-1、Cx43阳性率也同样小于对照组(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,Beclin-1、Cx43和甲状腺癌呈现负相关(P<0.05);Beclin-1对甲状腺癌的诊断曲线下面积为0.822,最佳阈值为13.52;Cx43诊断甲状腺癌的曲线下面积为0.875,最佳阈值为18.67,两者联合的曲线下面积为0.932;Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断灵敏度与特异度明显高于单一指标(P<0.05);Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断准确率为93.75%,甲状腺细针穿刺对甲状腺癌的诊断准确率为98.75%,两者对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断灵敏度与特异度较高,且两者联合与甲状腺细针穿刺诊断甲状腺癌准确率对比并无显著差异,可考虑将Beclin-1、Cx43两者作为甲状腺癌诊断及预后判断的重要标志物。

EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路的影响

目的:基于HMGB1/Beclin-1信号通路探究EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体的作用机制。方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、二甲双胍(C)组、EPO(D)组,每组10只,对B、C、D组采用高脂饲料及链脲佐菌素进行糖尿病肾病建模。建模成功后,对C组灌胃100 mg/kg二甲双胍,对D组腹腔内注射100 U/kg EPO,A组、B组同期灌胃等体积生理盐水;另取20只大鼠建模,建模成功后,随机分为E组、F组,E组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂,F组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂和腹腔内注射100 U/kg EPO;取HK-2细胞,分为高糖+HK-2细胞(HH)组、EPO+高糖+HK-2细胞(EH)组、甘草酸苷L+高糖+HK-2细胞(LH)组,葡萄糖培养后进行细胞实验。血糖仪检测大鼠血糖,全自动生化分析仪检测大鼠生化指标,PAS染色法检测大鼠肾组织病理形态,免疫印迹法检测HMGB1/Beclin-1蛋白表达,RT-PCR及免疫组化法检测NK细胞活化性受体表达。结果:与A组比较,B组血糖及血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),体质量明显降低(P<0.05);与B组比较,C组、D组血糖及24 h尿量、血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量明显升高(P<0.05),肾脏病理学明显改善,且D组较C组变化显著(P<0.05);与A组比较,B组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组相比,C、D、E、F组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),且D组HMGB1/Beclin-1蛋白表达与C组相比降低明显(P<0.05),E组与D组无明显差异,F组较E组降低明显;HMGB1/Beclin-1蛋白表达与NKp30、NKp44、NKp46mRNA均呈正相关(P<0.05);与HH组相比,EH、LH组细胞增殖率显著升高(P<0.05),凋亡率及HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),而LH组与EH组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EPO可有效降低糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体表达,抑制HMGB1/Beclin-1信号通路,提示EPO可能通过调控NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路发挥作用,而NK细胞活化性受体表达与HMGB1/Beclin-1信号通路呈正相关。

LC-3、Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性

目的 探讨微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、自噬调控因子Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征的相关性。方法 回顾性分析93例NSCLC患者资料,比较癌组织和癌旁组织LC-3、Beclin-1和P62表达情况;比较LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者临床病理特征差异。结果 癌组织LC-3、Beclin-1阳性率低于癌旁组织,P62表达阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者肺癌病理类型、TNM分期以及分化程度差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LC-3、Beclin-1和P62表达情况与NSCLC患者病理类型、TNM分期以及分化程度有密切联系。LC-3、Beclin-1表达降低及P62表达升高与肺癌的发生发展相关,可作为NSCLC患者早期评估的辅助指标。

PTEN和Beclin-1在儿童非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨PTEN、Beclin-1在儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)组织中的表达特点及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测儿童NHL及淋巴结反应性增生(reactive hyperplasia, RH)组织中PTEN蛋白、Beclin-1蛋白的表达,应用χ^(2)检验比较此两种蛋白在NHL及RH组织中的阳性表达率,进一步分析此两种蛋白与患儿临床病理因素(性别、年龄、T/B分型、St.Jude分期、LDH水平、有无B症状、Ki-67及IPI危险度分层)的关系及两者的相关性。结果:儿童NHL组织中PTEN蛋白阳性率为47.2%,低于RH组织(80.8%)(χ^(2)=7.161,P<0.05)。PTEN蛋白的表达与NHL患儿IPI危险度分层及LDH水平相关。儿童NHL组织中Beclin-1蛋白阳性率为50.0%,低于RH组织(84.6%)(χ^(2)=7.902,P<0.05)。Beclin-1的表达与NHL患儿的临床病理特征无明显相关性。Spearman等级相关分析显示PTEN蛋白和Beclin-1蛋白在儿童NHL组织中的表达呈正相关(r=0.501,P<0.05)。结论:PTEN基因和Beclin-1基因在儿童NHL中缺失或失表达,可能促进疾病发生发展。此两种抑癌基因在NHL的发生中可能起协同作用,联合检测可能有助于诊断及预后判断。

老年肾癌患者Beclin-1及YKL-40蛋白表达特点和意义

目的 探讨老年肾癌患者Beclin-1及YKL-40蛋白表达特点和意义。方法 选取老年肾癌患者184例。手术切除肾标本后立即使用手术刀剖开肾组织,选取合适位置切取肾癌组织和癌旁正常肾组织。免疫组化检测肾癌组织、癌旁正常肾组织中Beclin-1及YKL-40蛋白表达情况;Kaplan-Meier曲线分析患者术后3年生存情况;并进一步分析术后生存的影响因素。结果 老年肾癌患者肾癌组织中Beclin-1阳性率明显低于癌旁组织,YKL-40阳性率明显高于癌旁组织(P<0.01)。肾癌组织中Beclin-1、YKL-40表达情况在不同肿瘤分期、肿瘤分级、淋巴结转移情况的肾癌患者差异有统计学意义(P<0.01)。随访3年期间,184例肾癌患者总生存率48.37%,平均生存时间(20.58±6.15)个月。Kaplan-Meier曲线分析显示,Beclin-1阴性、YKL-40阳性表达的肾癌患者累积生存率明显低于Beclin-1阳性、YKL-40阴性表达患者(P<0.01)。多因素Cox回归分析显示,肿瘤分期、肿瘤分级、淋巴结转移、Beclin-1及YKL-40表达是老年肾癌患者生存情况的独立影响因素。结论 Beclin-1低表达、YKL-40高表达提示老年肾癌患者预后不良,可作为预测术后生存的潜在标志物指导临床治疗。

针刺通过PI3K-Ⅲ/Beclin-1通路抑制脑缺血-再灌注损伤大鼠的细胞凋亡

目的:利用大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)法制备大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,研究针刺对CIRI模型大鼠脑组织中Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K-Ⅲ)/Beclin-1通路的影响。方法:利用MCAO/R方法制备SD大鼠CIRI模型,分别给予针刺和(或)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)进行治疗。利用采用Garcia评分法检测大鼠神经功能,TTC染色法检测大鼠脑梗死面积,Western Blot法检测海马组织PI3K-Ⅲ、Beclin-1和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:MCAO/R手术后大鼠神经功能评分降低(P<0.01),TTC染色观察到脑梗死,同时海马区PI3K-Ⅲ、Beclin-1和Bcl-2表达显著下调(P<0.01),脑皮质细胞凋亡增多(P<0.01)。针刺治疗不但提高了大鼠神经功能评分(P<0.01),并且减少了脑梗死面积(P<0.01);同时显著上调了海马组织中PI3K-Ⅲ、Beclin-1和Bcl-2表达(P<0.01),并减少了脑细胞凋亡(P<0.01)。3-MA阻断了针刺的治疗作用,而且使脑损伤更加严重。结论:针刺可改善CIRI大鼠神经功能并减轻神经损伤,其机制可能与激活PI3K-Ⅲ/Beclin-1通路增加细胞自噬并减少细胞凋亡有关。

RNAi介导的HvCDA1基因沉默影响茄二十八星瓢虫存活和发育

【目的】茄二十八星瓢虫Henosepilachna vigintioctopunctata是茄科(Solanaceae)植物上的重要害虫。昆虫体内几丁质脱乙酰酶1(chitin deacetylase 1,CDA1)催化N-乙酰氨基-D-葡萄糖胺脱去乙酰基,促使几丁质转化为壳聚糖,控制昆虫体内几丁质纤维有序堆积,并维持角质层结构的完整性。抑制虫体中CDA1基因的表达会抑制壳聚糖的合成,影响昆虫表皮结构的形成,使昆虫不能正常发育而亡。【方法】利用RT-qPCR方法测定HvCDA 1基因在茄二十八星瓢虫不同发育阶段(卵、1-4龄幼虫和预蛹)和4龄幼虫不同组织(表皮、脂肪体、中肠和马氏管)中的表达模式。通过饲喂茄二十八星瓢虫1龄幼虫不同浓度ds HvCDA1溶液浸泡处理1 min的茄子叶片后及直接饲喂4龄幼虫不同浓度ds HvCDA1溶液,探究沉默茄二十八星瓢虫HvCDA1基因对其幼虫存活和发育以及HvCDA1基因表达量的影响。【结果】发育表达谱结果表明,HvCDA1在茄二十八星瓢虫的各发育阶段均有表达,但在1龄末和2龄末幼虫中的表达量最高。组织表达谱结果显示,在茄二十八星瓢虫4龄幼虫的表皮中HvCDA1基因的表达量显著的高于其他组织中的。1龄幼虫取食50 ng/μL ds HvCDA1溶液浸泡处理的茄子叶片后,幼虫蜕皮后其枝刺不能直立,角质层不能正常形成,且出现取食障碍直至死亡;饲喂50,200和400 ng/μL ds HvCDA1溶液浸泡处理的茄子叶片后48 h时,死亡率分别高达84%,94%和100%。与对照组(饲喂ds GFP溶液浸泡处理的茄子叶片)相比,饲喂1龄幼虫50 ng/μL ds HvCDA 1溶液浸泡处理的茄子叶片后48和96 h时,其HvCDA1基因的表达量分别下降了38.63%和79.00%。另外,4龄幼虫单头饲喂50,200和400 ng ds HvCDA1溶液,可分别导致29%,40%和66%的幼虫化蛹后呈畸形且不能正常羽化。与对照组(饲喂200 ng/头ds GFP溶液)相比,饲喂4龄幼虫200 ng/头ds HvCDA1溶液后48和96 h时,其HvCDA1基因的表达量分别下降了52.99%和70.09%。【结论】上述结果表明,HvCDA1基因在茄二十八星瓢虫的存活和发育中起重要作用。当该基因表达受阻,会负面影响茄二十八星瓢虫的蜕皮、化蛹以及羽化,最终死亡。本研究结果表明HvCDA1可作为1个潜在的防治二十八星瓢虫的RNAi靶标基因。

水稻OsBAK1P基因过表达与RNAi载体构建及其表型鉴定

为了探究水稻油菜素内酯不敏感1相关受体激酶1前体物质OsBAK1P对水稻相关农艺性状的影响。通过以中花11粳稻品种为材料,根据基因所设计的特异性引物从水稻穗部cDNA中扩增得到CDS片段大小为651 bp的目的序列片段;通过酶切酶连的方法成功构建了PTCK303-OsBAK1P过表达载体和PTCK303-OsBAK1P RNA干扰载体;用农杆菌EHA105菌株转化表达正确的载体质粒并利用基因CDS扩增引物检测菌落筛选出阳性农杆菌克隆;再利用农杆菌遗传转化法侵染中花11粳稻品种的愈伤组织从而获得转基因植株;最后,相比较于中花11挑选2个表型相似的过表达、RNA干扰的T1转基因植株测定并分析株高、穗长、叶夹角等农艺性状的变化和萌发初期的根长、胚芽鞘长度的变化以及对芸苔甾内酯(BL)的响应程度。结果表明,OE-OsBAK1P转基因水稻植株株高矮化,穗长变短,叶片夹角下降,种子萌发后根长增长而幼苗长度缩短,叶片对BL的响应不敏感;而RNAi-OsBAK1P转基因水稻植株株高增加,穗长变长,叶片夹角增加,种子萌发后根长缩短而幼苗长度增长,叶片对BL的响应敏感。综上,这些结果为改变水稻植株结构进而增加籽粒产量提供理论支持并可能为后续研究OsBAK1和前体物质OsBAK1P的其他功能提供参考。

中药调控Beclin-1基因干预自噬治疗类风湿性关节炎的研究进展

类风湿性关节炎是一种难以治愈的自身免疫性疾病,其病因复杂,基本的病理表现为软骨的破坏、血管翳的生成等。有效治疗和预防类风湿性关节炎的发生及提高患者的生活质量是亟待解决的问题。现阶段临床治疗方法存在着用药量大,毒副作用强等弊端,近年来,以精准调控为优势并基于Beclin-1为代表的基因调节自噬和线粒体从而治疗类风湿性关节炎的研究不断发展,目前受到国内外专家学者的关注,具有广阔的发展前景。本文系统阐述在治疗类风湿性关节炎中Beclin-1、自噬和线粒体的相关联性,并发现中药在调节Beclin-1、自噬和线粒体治疗类风湿性关节炎的巨大潜力,因此对中药调控Beclin-1干预自噬治疗类风湿性关节炎进行系统性综述,并为该领域提供一定的科学参考。

沙库巴曲缬沙坦治疗慢性心力衰竭的临床疗效及对血清Sirtuin-4和Beclin-1水平的影响

目的探讨沙库巴曲缬沙坦对慢性心力衰竭患者的疗效及对患者心功能、血清沉默调节蛋白-4(Sirtuin-4)和Beclin-1水平的影响。方法选取2019年1月—2021年9月内蒙古自治区国际蒙医医院收治的60例慢性心力衰竭患者作为研究对象,依据随机数表法将患者分为对照组和观察组,每组30例。对照组采用贝那普利治疗,观察组采用沙库巴曲缬沙坦治疗,比较两组患者治疗前后左室收缩末期容积(LVESV)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室射血分数(LVEF)和血清Sirtuin-4及Beclin-1的水平,以及总有效率、住院次数、平均住院天数、不良反应发生率。结果观察组有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组LVEF、LVESV及LVEDV水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组LVEF、LVESV及LVEDV水平均高于治疗前,且观察组LVEF、LVESV及LVEDV水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组Sirtuin-4及Beclin-1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组Sirtuin-4及Beclin-1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组住院次数和平均住院天数均少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论沙库巴曲缬沙坦治疗慢性心力衰竭疗效确切,其能改善患者心功能,降低患者血清Sirtuin-4及Beclin-1水平,减少住院次数和平均住院天数,该方法安全性佳,值得临床应用。

温度对Mhc>PINK1-RNAi转基因帕金森果蝇模型的影响

目的 探讨温度对Mhc>PINK1-RNAi转基因帕金森(PD)果蝇模型的影响。方法 首先,将2个黑腹果蝇Drosophilamelanogaster品系UAS-PINK1-RNAi和Mhc-GAL4杂交获得Mhc>PINK1-RNAi转基因PD果蝇,以w1118作为对照组,将两组果蝇放置在不同的温度(25℃和29℃)下培养。然后采用逆转录定量PCR(reverse transcription quantitative PCR,RT-qPCR)技术检测果蝇体内靶基因PINK1的表达水平。最后结合攀爬指数、体视显微镜下观察异翅率等行为学指标以及酶联免疫技术检测多巴胺含量(DA)等指标来评价Mhc>PINK1-RNAi转基因PD果蝇模型。结果 在25℃培养条件下,与w1118相比,Mhc>PINK1-RNAi转基因PD果蝇PINK1基因表达量下降,且表现出典型的PD症状:多巴胺含量、攀爬能力显著下降和异翅率显著提高(P<0.05)。在29℃培养条件下,与w1118相比,Mhc>PINK1-RNAi转基因PD果蝇PINK1基因没有沉默、多巴胺含量差异无统计学意义(P>0.05),异翅率显著提高(P<0.05)。与25℃培养条件相比,29℃培养条件下,10 d和20 d Mhc>PINK1-RNAi转基因PD果蝇异翅率较低,仅为4.6%和8.2%。结论 Mhc>PINK1-RNAi转基因PD果蝇在常温25℃培养条件下模型成立。

基于HMGB1/Beclin-1信号通路探讨雷公藤多苷对肾病综合征模型大鼠保护机制

目的探讨雷公藤多苷对肾病综合征模型大鼠高迁移率族蛋白(HMG)B1/自噬效应蛋白(Beclin)-1信号通路及炎性因子的影响。方法构建SPF级Wistar大鼠肾病模型与健康大鼠共同饲养形成对照组,选择雄性SPF级Wistar大鼠60只均分为6组:高剂量组、中剂量组、低剂量组、空白对照组、模型对照组及阳性对照组。使用尾静脉注射方法制成不同组别的大鼠差异。除空白对照组外,模型对照组、阳性对照组、低、中、高剂量组的大鼠均制成肾病综合征大鼠模型,通过在其尾部静脉注射盐酸阿霉素的方法制作肾病模型,空白对照组注射生理盐水。使用苏木素-伊红(HE)染色法对大鼠肾脏组织切片进行病理变化观察;使用酶联免疫吸附试验(ELISA)白细胞介素(IL)-4、IL-8及肿瘤坏死因子(TNF)-α的相对表达量;使用Western印迹检测HMGB1/Beclin-1相关蛋白表达。结果与阳性对照组相比,雷公藤多苷治疗各组大鼠活跃度较高,精神好转,毛发渐有光泽。与空白对照组相比,阳性对照组中外周血的TNF-α、IL-4、IL-8水平及肾组织的自噬微管相关蛋白1轻链(LC)3、HMGB1和Beclin-1的蛋白表达水平显著提高(P<0.05),组织观察中,发现阳性对照组肾脏明显充血且出现与周围的结缔组织紧密相连的现,细胞膜表面存在的微绒毛明显减少,并且细胞形态发生不规则化,出现细胞核变形的现象,并且细胞核区染色质边缘发生聚集,肾脏细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。雷公藤多苷各治疗组和模型对照组相比,组织病理的微观损伤减轻明显,肾脏细胞凋亡率、TNF-α、IL-4和IL-8水平及HMGB1、LC3、Beclin-1蛋白因子的表达水平显著降低(P<0.05),且剂量的雷公藤多苷治疗呈现出显著剂量依赖性(P<0.01)。结论雷公藤多苷可显著抑制炎性因子在肾病综合征模型大鼠的肾脏病理组织中的表达,调节HMGB1/Beclin-1信号通路,保护肾病综合征模型大鼠肾脏组织。