荞麦蜂花粉多糖的纯化、表征及其在体外消化过程中抗氧化活性的变化

本论文旨在研究荞麦蜂花粉多糖(BWPP)在模拟体外胃肠消化过程中的抗氧化活性。采用DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分级纯化,经体外模拟胃、肠消化研究其在体外消化过程中的抗氧化活性的变化规律。结果表明经DEAE-52纤维素柱层析洗脱纯化后得到总糖含量最高组分BWPP-1,其主要由Glc、Xyl、Ara等组成,且红外光谱显示BWPP-1具有明显的多糖特征吸收峰。BWPP和BWPP-1在进行体外模拟胃肠消化时,模拟胃液消化60 min时,BWPP和BWPP-1的ABTS^(+)·清除率均达到最大值,分别为86.39%±1.28%、90.38%±2.78%,与其他消化时间的存在显著差异(P<0.05);60 min时对DPPH·清除率达到最大值,分别为86.86%±0.11%、89.58%±1.67%,且二者差异不显著(P>0.05);模拟肠液消化时,BWPP和BWPP-1对ABTS^(+)·清除率在60 min时达到最大值为88.67%±0.40%和91.82%±2.77%,且二者差异不显著(P>0.05);对DPPH·清除率在240 min时达到最大值57.11%±0.06%和65.67%±3.67%,二者差异显著(P<0.05);而在消化过程中,对铁离子还原能力均较弱。由此可得,BWPP和BWPP-1具有较好的ABTS^(+)·和DPPH·清除能力,且胃液消化时DPPH·清除能力略高于肠液消化,而肠液消化时的ABTS^(+)·清除能力略高于胃液消化。本研究为以荞麦蜂花粉为基料的功能性产品的开发提供理论依据。

不同代花粉饲料对蜂群采食量、群势及工蜂生理指标的影响

文章旨在研究不同代花粉饲料对蜂群采食量、群势及工蜂生理指标的影响。试验将16群蜂王繁殖力和工蜂数量相近的中华蜜蜂随机分为4组,每组4群。各组蜂群分别采用茶花粉(T0组)、玉米蛋白粉(T1组)、菜籽饼(T2组)、啤酒酵母(T3组)作为饲料原料。试验从春季繁殖期开始,共计60 d。结果表明:(1)4组蜂群的总采食量分别为1671.84、1972.84、1428.63、2298.47 g。其中,与T0组相比,T1组、T3组蜂群的总采食量显著提高了18.00%、37.48%(P<0.05)。(2)试验第20天,T3组蜂群群势显著高于T0组、T1组、T2组(P<0.05);试验第40天,T3组蜂群群势显著高于T0组、T2组(P<0.05);试验第60天,T1组、T3组蜂群群势显著高于T0组、T2组(P<0.05)。(3)4组蜂群工蜂初重分别为0.11、0.12、0.09、0.11 g。其中,与T2组相比,T0组、T1组、T3组工蜂初重显著提高了22.22%、33.33%、22.22%(P<0.05)。T1组成年工蜂头部蛋白质含量显著高于T0组和T2组(P<0.05)。由此可见,用玉米蛋白粉、啤酒酵母作为饲料原料,能增加蜂群采食量,促进蜂群群势增长,改善工蜂生理指标;用菜籽饼作为饲料原料会降低工蜂初重。

酶法破壁提取蜂花粉功能成分的工艺优化及抗氧化活性分析

目的探索酶解结合超声和碱解从而高效破壁和提取蜂花粉中的活性成分。方法采用扫描电镜对蜂花粉微观结构进行分析,并使用高效液相色谱法分析酚类物质的组成和含量变化。结果经12.5%碱性蛋白酶酶解1 h后,蜂花粉酶解上清液的总酚含量、总黄酮含量和2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)ammonium salt,ABTS]阳离子自由基清除能力最高,分别为(14.14±0.23)mg GAE/(g·dw),(2.34±0.04)mg RE/(g·dw)和(167.06±1.39)μmol TE/(g·dw)。将酶解辅以超声协同0.3 mol/L NaOH处理后,总酚、总黄酮、ABTS阳离子自由基清除能力及铁离子还原能力相比未处理花粉分别提高了191%、39%、69%和162%。扫描电镜结果显示,碱处理酶解后花粉细胞壁破碎程度显著增加,花粉内含物质从裂口处向外溢出,与理化指标趋势一致。最佳工艺条件为0.3mol/LNaOH超声-碱处理1h,调节pH至7,12.5%的碱性蛋白酶于50℃下酶解1 h。结论超声碱处理可辅助酶解实现蜂花粉的高效破壁,同时小肽、多酚、黄酮等营养成分也进一步溶出,促进了蜂花粉的高值化利用。

蜂花粉质量标准提升

目的提升蜂花粉质量标准。方法观察药材性状,并对其粉末进行显微鉴别。参照2020年版《中国药典》方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属元素(Pb、Cd、As、Hg、Cu)、浸出物含量,对TLC鉴别方法进行改进,凯氏定氮法测定总含氮量,HPLC法测定山柰酚含量。结果蜂花粉大多为扁椭圆形,随花粉本身颜色不同花粉团颜色也有所差异;花粉粒呈圆球形、椭圆形或三角形,并可见少量不规则碎片,有的具有萌发孔。山柰酚TLC斑点清晰,分离度良好,不同来源药材中其含量差异较大。13批样品中水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物平均含量分别为7.0%、2.8%、0.16%、52.2%,重金属含量均未超标,平均含氮量为3.5%。结论建议蜂花粉质量标准中增加以山柰酚为对照的TLC鉴别项,并且水分不得超过15.0%,总灰分不得超过5.0%,酸不溶性灰分不得超过1.0%,浸出物不得少于44.0%,含氮量不得少于2.5%。

一种抗氧化膳食补充剂的增强免疫作用和毒理学评价

研究以雨生红球藻为主要原料复配富硒酵母、蜂花粉提取物和维生素E组成的抗氧化膳食补充剂的免疫作用和安全性。采用低、中、高三个剂量(0.1、0.2、0.4 g/kg bw)每天一次灌胃,连续30 d,观察对小鼠脾脏、胸腺指数、脾淋巴细胞转化活性、迟发型变态反应、抗体生成细胞水平、半数溶血值(HC_(50))、碳粒廓清速率、巨噬细胞的吞噬作用和自然杀伤细胞活性等指标的影响;通过Ames试验、骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验分别评估受试物的致癌潜力,以及对细胞和生殖系统的遗传毒性情况;通过30 d喂养试验考察受试物亚急性毒性。结果发现,与对照组相比,中、高剂量组OD差值分别提高了10.32%(P<0.05)和14.29%(P<0.01),说明该膳食补充剂可以促进小鼠的脾淋巴细胞增殖转化能力;高剂量组左右耳肿胀度差增加了8.02%(P<0.05),抗体积数增加了22.12%(P<0.05),说明该膳食补充剂可以显著提升迟发型变态反应能力和抗体生成细胞能力;无急性毒性、遗传毒性和亚急性毒性。实验证明,雨生红球藻、富硒酵母、蜂花粉提取物和维生素E复配的抗氧化膳食补充剂食用安全,具有增强免疫力的功能。

3种功能食品原料提取物毒性研究及安全性评价

目的 研究3种功能食品原料(红景天、五味子和蜂花粉)醇/醇水提取物毒性并评价其安全性。方法 利用小鼠急性毒性实验、遗传毒性实验(小鼠骨髓细胞微核实验、雄性小鼠精子畸形实验)和大鼠30 d喂养实验对3种提取物的毒性进行考察。结果 小鼠对红景天、五味子和蜂花粉提取物的最大耐受量都大于20 g/(kg·bw);3种提取物在遗传毒性实验均呈阴性反应;给予大鼠5.0 g/(kg·bw)红景天、五味子、蜂花粉提取物(分别相当于成人日推荐量250倍、250倍、500倍)连续灌胃30d,大鼠生长正常,无中毒症状、异常症状和死亡,各试食组动物体重、进食量、饲料利用率、血常规指标、常见血液生化指标、脏器重量以及病理组织学等指标与阴性对照组比较,无毒性反应。结论 红景天、五味子、蜂花粉提取物属无毒物质,无遗传毒性和长期毒性。本研究为以红景天、五味子和蜂花粉提取物为原料的功能食品开发和应用提供了一定的安全性依据。

荞麦蜂花粉多酚对α-淀粉酶的抑制作用

蜂花粉多酚是一类能够有效降低血糖的天然物质。α-淀粉酶是高等生物体内血糖控制的关键酶,抑制其活性有助于控制餐后血糖。为探究蜂花粉多酚抑制α-淀粉酶发挥降糖活性的机制,本文以荞麦蜂花粉多酚(buckwheat bee pollen polyphenol,BBPP)为对象,采用比色法、荧光分光光度法研究BBPP对α-淀粉酶活性影响及其抑制机理。结果表明,BBPP能对α-淀粉酶产生较强的抑制作用,半抑制浓度(IC_(50))为2.00±0.06 mg/mL,抑制类型为可逆性混合型抑制。高温、强碱、光照以及高浓度氧化剂与还原剂等处理,均能降低BBPP对α-淀粉酶的抑制作用。在273~298 K和298~310 K时其结合过程分别为动态猝灭和静态猝灭。随着BBPP浓度增加,α-淀粉酶荧光最大发射波长产生蓝移,表明α-淀粉酶构象改变,疏水性增加。本研究发现荞麦蜂花粉多酚对α-淀粉酶具有较强抑制作用,对荞麦蜂花粉多酚的临床开发利用具有重要的理论参考价值。

蜂花粉口香糖的工艺研究

蜂花粉作为一种药食兼用的天然蜜蜂产物,因含有丰富的黄酮和酚酸类物质而具有抑菌、抗炎、抗龋齿等生物活性。本实验通过在口香糖包衣中添加油菜蜂花粉提取物,制成一种新型功能的口香糖。单因素和正交试验结果发现蜂花粉口香糖包衣配方的各物料质量配比为木糖醇∶阿拉伯胶∶麦芽糊精∶二氧化钛∶山梨糖醇∶蜂花粉提取物∶色素∶水=26.5∶2.5∶1.4∶0.4∶0.1∶0.6∶0.2∶68.3时,所得蜂花粉口香糖的香气纯正,适口感好,为蜂花粉口香糖包衣的最佳配方。

Folin-Ciocaileu比色法测定蜂花粉中的总酚

蜂花粉含有丰富的多酚类化合物,这类化合物具有抗动脉硬化、降低胆固醇、抗氧化和抗辐射等作用,因此可以用来评价蜂花粉的活性。本文采用Folin-Ciocaileu法对蜂花粉中的总酚进行检测。本方法以原儿茶酸为对照品,标准曲线的回归方程为:C=7.9234A-0.0157(R2=0.9999);对稳定性、精密度、重现性、回收率进行了试验,相对标准偏差(RSD)为0.05%～1.43%。该方法简便、快速、准确,是检测蜂花粉中总酚的可靠方法。

青海油菜蜂花粉黄酮类化合物含量的研究

采用正交试验设计,研究了青海油菜蜂花粉中黄酮类化合物的最佳提取条件,分别采用HPLC法和比色法测定了黄酮类化合物的含量。最佳提取条件是选用95%的乙醇作为溶剂,以10倍总量的乙醇用量,水浴热回流提取。以槲皮素、山奈酚、异鼠李素为对照品,采用HPLC法,测定出黄酮类化合物平均含量为3.194%;以芦丁为对照物,采用比色法,测定出总黄酮平均含量为3.70%。

蜂花粉油脂抗氧化活性与类胡萝卜素含量的相关性

以新鲜益母草、茶花、油菜、荷花、玫瑰、籽瓜、菊花、荞麦8种常见的蜂花粉油脂为材料,测定其中的类胡萝卜素含量,同时评价不同蜂花粉油脂的抗氧化活性。结果表明:8种蜂花粉油脂对DPPH自由基均具有一定的清除作用,不同蜂花粉油脂清除能力存在显著差异(P<0.05),IC50值在0.212～7.110mg/mL之间。蜂花粉油脂中含有较高含量的类胡萝卜素类物质,其含量与油脂抗氧化活性呈正相关(R2=0.8645),表明类胡萝卜素可能是蜂花粉油脂抗氧化的主要活性成分之一。

油菜蜂花粉提取物对羟基自由基介导2-脱氧核糖损伤的抑制作用

本文以水、80%乙醇、70%甲醇为溶剂提取油菜蜂花粉中的多酚类物质,测定了提取物中总酚含量、还原力、Fe2+络合能力及对DPPH自由基的清除能力。以Fenton为模型,研究了油菜蜂花粉提取物对羟基自由基介导2-脱氧核糖降解的保护机理。结果表明:3种提取物的抗氧化能力与总酚含量呈正相关,乙醇提取物和甲醇提取物的抗氧化能力较水提取物强;油菜蜂花粉提取物主要是作为自由基清除剂,不是依靠络合能力来发挥清除羟基自由基的作用。

蜂花粉及其多糖对犊牛体增质量、物质消化与血清指标的影响

研究蜂花粉及其多糖对14～70日龄犊牛生长性能、营养物质消化率和血清生化指标的影响。试验选用25头新生荷斯坦犊牛,随机分成5组,每组5头牛,分别是饲喂蜂花粉10 g.d-1(10BP)组、25 g.d-1(25BP)组、50g.d-1(50BP)组、蜂花粉多糖5 g.d-1(5PS)组和对照(C)组,试验期56 d,用全收粪法在犊牛21～28和42～49 d进行两期消化试验。结果表明:25BP和5PS组犊牛全期平均日增体质量显著高于C组(P<0.05);25BP组F/G改善了12.85%(P<0.05);在犊牛21～28 d时,25BP和5PS组分别提高干物质(DM)表观消化率8.38%和7.66%,显著高于C组和50BP组(P<0.05),25BP组提高粗蛋白(CP)表观消化率18.03%(P<0.05);在血清生化指标中,添加蜂花粉和多糖组犊牛70 d时,血清总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)有增加趋势,尿素氮(BUN)和总胆固醇(CHO)有降低趋势,甘油三酯(TG)各处理组降低显著(P<0.05)。代乳粉中添加蜂花粉及其多糖可提高犊牛生长性能及对干物质和粗蛋白的表观消化率,改善饲料转化率和降低血清甘油三酯水平,并有提高血清总蛋白和白蛋白含量的趋势。蜂花粉添加量为25 g.d-1,蜂花粉多糖添加量为5 g.d-1水平时,犊牛生长性能和营养物质消化率有明显的改善。

蜂花粉总黄酮检测方法的研究

黄酮类化合物因具有多种生物活性而成为目前天然产物研究的热点。本研究通过三种检测方法的比较,确定了聚酰胺-UV法为蜂花粉总黄酮的测定方法,其检测波长为360nm,以芦丁为标准品,在0.005～0.025mg/ml范围内,其浓度与吸光度呈良好的线性关系,相关系数R2为0.9998,平均回收率分别为95.53%,稳定性、精密度和重现性均理想,其RSD分别为2.124%(n=3)、0.488%(n=3)、0.875%(n=5)。该法检测油菜蜂花粉中总黄酮含量为1.54%。

茶花粉黄酮对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究

为研究茶花粉黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,以茶花粉为原料,将提取、萃取及大孔吸附树脂处理得到的10个组分分别进行黄酮含量及α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定。结果表明,茶花粉粗提物经萃取后黄酮类物质主要在乙酸乙酯中富集,乙酸乙酯萃取相经大孔树脂层析后50%乙醇洗脱相中的黄酮含量最高(180.17 mg RE/g),当该样品浓度为5 mg/m L时,对α-葡萄糖苷酶的抑制率达82.67%,显著高于其它样品(p<0.05);相关性分析表明,茶花粉黄酮含量与α-葡萄糖苷酶抑制活性呈极显著正相关关系(0.867,p<0.01);酶动力学分析显示蜂花粉黄酮提取物对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度为1.27 mg/m L,抑制类型为可逆非竞争型抑制,抑制常数为1.17 mg/m L。该研究结果为蜂花粉黄酮及α-葡萄糖苷酶天然抑制剂的制备提供理论依据。

蜂花粉中糖的高效液相色谱分析

研究了蜂花粉中葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖的高效液相色谱(HPLC)分析方法。花粉样品用热水溶解,超声波提取,亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液沉降蛋白,使用SUPELCO ENVITM固相萃取小柱去除色素等干扰成分后,以Waters Carbohydrate分析柱为色谱柱,乙腈-水(体积比79:21)为流动相进行分离,回收率90.4%～96.2%,精密度为2.4%～4.3%。利用本方法对8种花粉的80个样品进行了分析,发现花粉中果糖和葡萄糖的平均含量分别在10.9%～12.6%和6.8%～9.6%之间。该方法简便快捷,可作为标准方法对蜂花粉中葡萄糖、果糖、蔗糖和麦芽糖进行分析,是一种对花粉糖分组成进行质量控制的有效方法。

HPLC法测定油菜蜂花粉中黄酮含量及六种破壁方法对黄酮提取的影响

目的:六种破壁方法处理油菜蜂花粉,运用HPLC测定花粉中的黄酮含量,研究不同破壁方法对黄酮提取的影响。方法:色谱柱为反相C18柱,流动相V(甲醇):V(0.4%磷酸)为60:40,流速0.5ml/min,波长370nm。采用超声法、酶解法、温差法、温差-超声法、温差-酶法和混合方法进行花粉破壁。结果:未破壁花粉总黄酮含量为2.2447mg/g。六种破壁方法提取的花粉总黄酮含量比未破壁的依次增加12.4%、8.3%、23.1%、25.4%、28.1%、31.5%,破壁分别为52.56%、41.31%、76.94%、78.66%、83.13%、86.88%。结论:建立了HPLC测定花粉黄酮的方法;花粉破壁率越高,黄酮的提取得率越高。

蜂花粉对动物免疫器官发育的影响

目的:研究蜂花粉对动物免疫器官发育的影响。方法:试验取144只1日龄肉鸡,随机分成2组,对照组饲喂基础日粮,试验组添加1.5%的蜂花粉。饲养期42 d。于7,14,21,28,35,42日龄每组随机取鸡6只,解剖取胸腺、腔上囊、脾称重并制作切片。结果:试验组胸腺、腔上囊和脾的平均重量和相对重量均高于对照组,差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。试验组的胸腺小叶皮质增厚,胸腺小体增多;腔上囊皱襞发达,腔上囊小结体积大,皮质较厚,退化延缓;脾的动脉周围淋巴鞘增厚,脾小结体积大,生发中心明显,椭球增大。结论:日粮中添加蜂花粉可促进胸腺、腔上囊的早期发育;延缓腔上囊退化;增强脾的免疫应答反应。

油菜蜂花粉中黄酮类化合物的提取与鉴定

以湖北大宗油菜蜂花粉为材料,对其中微量特征成分黄酮类化合物进行鉴定。采用超声波辅助技术提取,运用二次回归正交旋转组合实验优化提取工艺,通过响应面分析和岭嵴寻优分析,确定黄酮类化合物的最佳提取条件;采用HPLC-DAD以及HPLC-MS对酸解后的提取液进行分析。结果表明:超声波辅助技术提取油菜蜂花粉中黄酮类化合物的最佳条件为体积分数76%乙醇、料液比1:30、超声波时间33min,超声波温度为51℃。蜂花粉中总黄酮含量的理论得率为2.12%,实际得率为1.89%,实测得率达到理论预测值的89.15%。HPLC-DAD以及HPLC-MS分析结果证实油菜蜂花粉中可能含有9种黄酮苷元。其中可以推定的黄酮类物质是槲皮素、山奈酚、异鼠李素和柚皮素。可为识别蜂花粉的植物来源,鉴别真伪提供研究方法和实验依据。

油菜蜂花粉蛋白的分离提取及其抗氧化活性

以油菜蜂花粉为研究对象,根据溶解性的不同,从中分离出了水溶性蛋白、醇溶性蛋白、碱溶性蛋白及盐溶性蛋白,并对各蛋白组分抗氧化活性进行了研究。结果表明:油菜蜂花粉中主要蛋白为水溶性蛋白,占其干重的7.35%,其次为醇溶性蛋白3.65%,盐溶性蛋白和碱溶性蛋白分别占2.50%和2.24%。4种不同溶解性的油菜蜂花粉蛋白均具有一定的体外抗氧化作用,各蛋白组分的总抗氧化能力以及对DPPH自由基、OH.和O2-.的清除能力呈现较好的量效关系;4种蛋白抗氧化活性由强到弱的顺序依次为水溶性蛋白>醇溶性蛋白>碱溶性蛋白>盐溶性蛋白。因此,油菜蜂花粉蛋白质可作为一种潜在的天然抗氧剂进行深入研究。