二喹啉甲酸法(BCA)分析蛋白多肽的原理、影响因素和优点

蛋白多肽的定量分析方法很多,二喹啉甲酸法(BCA)是常用的方法之一。食品组成成分复杂,有很多影响BCA反应的干扰物。文中对BCA法的反应原理、测定方法、影响因素和消除方法,以及BCA法的优点进行系统的论述。

BCA法测定蜜蜂变应原中的蛋白含量

建立了用二喹啉甲酸 (BCA)法测定蜜蜂变应原中蛋白含量的方法。经t检验证明 ,该方法的测定结果与微量凯氏定氮法无显著差异 ,测定结果的相对标准偏差为 3.1%。该方法操作简便 ,结果准确可靠 ,可替代微量凯氏定氮法。

BCA法优化补骨脂蛋白质的提取工艺

采用碱提酸沉法提取补骨脂蛋白质,以二喹啉甲酸(BCA)法测定的蛋白质溶出率为指标,通过单因素实验和正交实验优化补骨脂蛋白质的碱提工艺条件,考察浸提p H、料液比、温度、时间等因素对补骨脂蛋白质提取的影响.结果表明,四种提取因素的影响从大到小的顺序为:浸提p H>料液比>温度>时间.最佳工艺条件为浸提p H 10.0、料液比(g/m L)1∶20、温度45℃、浸提时间150 min,此条件下补骨脂蛋白质溶出率为23.69%.以BCA法测定酸沉蛋白质浓度,确定补骨脂蛋白质的最大沉淀量p H为4.5,蛋白质的最大沉淀率为55.16%.对比发现理论提取率与实际提取率基本相同,证明BCA法测定补骨脂蛋白质的方法准确、可靠,为补骨质蛋白质的进一步研究利用奠定了基础.

威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定方法研究

目的 建立威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定的最佳方法。方法 以氨基酸分析仪测定的威廉环毛蚓提取物中的氨基酸含量为指标,对蛋白质含量检测方法 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法进行对比评价。结果 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法测定威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(上清液)结果分别为27.03%、45.85%、31.58%、11.11%,威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(混悬液)的结果分别为38.44%、52.39%、44.06%、11.56%。采用氨基酸分析仪法测定得到威廉环毛蚓提取物中游离氨基酸含量为4.18%,将威廉环毛蚓提取物蛋白质酸水解之后测定总氨基酸含量为48.53%。结论 在威廉环毛蚓提取物样品溶液的处理方式上,与样品上清液相比,样品混悬液的测定结果更接近样品中蛋白质的真实含量。以牛血清白蛋白(BSA)为对照品,相较于Lowry法2、改良Lowry法和Bradford法,BCA法更适宜用于威廉环毛蚓提取物中的蛋白质含量测定。

不同品种姬松茸菌丝体蛋白质和水溶性多糖含量的研究

研究目的在于筛选出性质优良的姬松茸品种。首先对本实验室保藏的姬松茸4个品种进行了菌丝发酵,并通过二奎林甲酸(BCA)检测法和苯酚-硫酸法测定了菌丝体的蛋白质和水溶性多糖含量。结果表明:姬松茸7号的蛋白质含量占菌丝体鲜重的5·41%,其水溶性多糖含量占菌丝体干重的1·499%,是4个品种中蛋白和多糖含量相对较高的品种,值得对其进行深度开发。

二十个平菇品种菌丝体蛋白质和多糖含量的研究

对北京农林科学院植保环保研究所实验室保藏的20个平菇菌株进行深层发酵,采用二奎林甲酸(BCA)检测法和苯酚-硫酸法测定了菌丝体中蛋白质和水溶性多糖的含量,比较20个品种的营养含量,为后期平菇功能性深加工研究奠定数据基础。结果表明:20个品种中蛋白质含量较高的品种为平侧5号、黑丰268和平菇4号,分别占菌丝体鲜重的14.225%、11.966%和11.533%;水溶性多糖含量较高的品种为平侧5号、平菇4号和平82号,分别占菌丝体干重的1.664%、1.596%和1.381%。通过该研究发现平侧5号和平菇4号是20个品种中蛋白和多糖含量相对较高的品种,可以根据需要对其进行深加工研究。

EGCG对体外培养的胚鼠皮层神经细胞的保护作用

目的研究表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对FeSO4和H2O2诱导神经细胞损伤的保护作用。方法采用FeSO4和H2O2作用产生自由基的方法诱导离体培养的小鼠胚鼠大脑皮层神经细胞损伤建立模型。倒置相差显微镜进行神经元形态学观察,中性红比色法和MTT法测定神经细胞的存活数量和活性,TBARS法和BCA法分别测定神经细胞中丙二醛(MDA)的水平和总蛋白合成的能力。结果与FeSO4和H2O2损伤组进行比较,EGCG增加了神经细胞的存活数量和活性,降低MDA的含量和提高了总蛋白的合成能力。EGCG显示出较强的抗氧化能力。结论EGCG对FeSO4和H2O2诱导神经细胞损伤有明显的保护作用,其作用机制可能源于EGCG清除自由基和抑制脂质过氧化过程。

毛木耳菌丝体营养优势菌株的筛选研究

研究目的在于从保藏的9种毛木耳品种中筛选出高蛋白、高多糖含量的优势菌株,为毛木耳功能研发发掘出优势材料。通过菌丝发酵的方法获得9种毛木耳的菌丝体,经过组织处理,利用二奎林甲酸(BCA)检测法和苯酚-硫酸法进行蛋白质和多糖的筛选工作。研究结果表明,9个品种中蛋白质含量较高的品种为毛木耳福建农,其蛋白质含量占菌丝体鲜重的8.99%;水溶性多糖含量较高的为毛木耳紫木耳品种,分别占菌丝体干重的2.625%。通过研究发现9个品种中蛋白质含量和多糖含量存在较大差异,可根据对功能成分开发需要,选择优势菌株并对其进行高产发酵方面研究。

二喹啉甲酸法在食品加工用具蛋白质残留现场快速检测的应用

[目的]探讨二喹啉甲酸法现场快速检测食品加工用具上蛋白质残留的应用前景。[方法]以棉签为反应载体,通过检测限测定试验、反应时间条件试验、还原性物质干扰试验和现场应用试验,研究二喹啉甲酸法检测蛋白质的检测限、干扰因素和实际应用情况。[结果]棉签二喹啉甲酸法能检测50μg以上的蛋白质,5000μg的3种还原糖、低于2μg的维生素C和5μg维生素B1不会产生干扰。[结论]棉签二喹啉甲酸法方法简便,结果直观,检测限低,是现场快速检测食品加工用具蛋白质残留的理想方法。

反相高效液相色谱法测定4,4′-二羧酸-2,2′-联喹啉的含量

应用反相高效液相色谱法测定了4，4’-二羧酸-2，2’-联喹啉（又名2，2’-联喹啉酸，简写作BCA），作为BCA生产过程的质量控制方法。方法中采用Phenomenex-C18柱（4．6mm×200mm，5μm）作为固定相，采用甲醇与0．05mol·L^-1乙酸钠溶液，以3比7的体积比混合配成的溶液作为流动相，其流速为0．5mL·min^-1，柱温为28℃，在330nm波长处作UV-检测，所测得的峰面积值与BCA质量浓度在0．05-10．0mg·L^-1之间呈线性关系。从同一批产品中取7份试样，按所提出的方法测定其BCA的含量，测得BCA量的平均值为98．62％，7次测定的相对标准偏差为1．65%。

重组水蛭素肠溶包衣微丸的制备及体外释放行为考察

目的研制重组水蛭素口服肠溶包衣微丸,并对其在不同pH释放介质中的释放行为进行考察,为重组水蛭素口服制剂的研究与开发提供实验依据。方法以羟丙甲基纤维素酞酸酯(HP55)为包衣材料,利用离心造粒机和流化床包衣设备制备重组水蛭素肠溶包衣微丸;采用二喹啉甲酸(BCA)法测定重组水蛭素肠溶包衣微丸的药物含量。结果所制备的重组水蛭素肠溶包衣微丸药物含量质量分数为3.513%。pH梯度释放实验结果表明,所研制的包衣微丸人工胃液中2 h药物仅释放4.98%;pH 5.8释放介质中继续释放,0.5 h释放82.13%,1 h释放95.47%;pH 7.2释放介质中继续释放,0.5 h释放97.53%,1 h释放98.33%。结论重组水蛭素肠溶包衣微丸在人工胃液中几乎不释药,可避免水蛭素被胃蛋白酶所降解;在人工肠液中药物释放快速而且完全,有利于水蛭素在肠道中的吸收。

一种基于二喹啉甲酸-Cu^+显色反应的毛细管电泳检测蛋白质的新方法

采用毛细管电泳法和蛋白质显色反应-二喹啉甲酸(BCA)法,结合微波辅助反应,在60mmol/L硼酸盐缓冲液(pH9.5)中,实现了对蛋白质的快速毛细管电泳分析检测。同时以β-环糊精为包合添加剂,实现了BCA-Cu+复合物和游离BCA的分离,从而在波长200nm处以测定特征生成的BCA-Cu+复合物来间接检测蛋白质,其峰强度比直接检测蛋白质自身吸收的峰强度提高了2个数量级。对于转铁蛋白、蓖麻毒素,其线性范围分别为2～200mg/L和2～100mg/L,检出限分别为0.33和0.37mg/L。将该方法成功地应用于第一届蓖麻毒素国际实验室间比对测试的部分样品,含量测定结果满意。

酶联免疫吸附法与二喹啉甲酸法检测核桃蛋白浓度的比较研究

目的探究间接酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)试剂盒2种方法在核桃蛋白浓度检测中的优缺点和适用范围。方法对本实验室提取的核桃蛋白进行烘烤、高温高压以及微波加热处理后,用ELISA法和BCA法2种方法分别检测其蛋白质浓度。结果在不同的热加工处理条件下, ELISA对蛋白浓度测定结果存在显著性差异,高度依赖热处理的类型。与之相比,使用BCA法测定蛋白浓度时,受到热加工处理影响较小。结果提示,在食物加工中的一些剧烈条件下,蛋白质的高级结构很容易遭到破坏,蛋白质结构的改变会干扰其与抗体结合部位的作用,导致ELISA法测定的结果不准确。BCA法测定蛋白质浓度的准确性较高,且受加热影响较小。结论 在剧烈的食品加工条件下,尤其当这种条件引起蛋白结构发生改变后,对其蛋白质浓度进行测定时,可选用BCA法进行测定。

一种快速简便测定奶粉中蛋白质的方法

目的尝试建立一种快速准确地测定奶粉中蛋白质含量的方法。方法使用三氯乙酸沉淀蛋白质后,运用BCA(二喹啉甲酸)法,在570nm波长处,分别测定标准蛋白质应用液与样品稀释液的吸光度值,基于测定液中蛋白质含量与其吸光度值呈正比关系,计算出样品中蛋白质的含量。结果待测溶液中蛋白质浓度在0～250μg/ml范围内标准曲线呈线性关系,其回归方程为:Y=301.12X-73.42,相关系数r=0.998,平均回收率为100.2%。结论结合三氯乙酸沉淀的BCA法适用于奶粉中蛋白质的快速检验和掺伪检验。

不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较

采用辛酸-硫酸铵法和亲和层析法两种方法纯化兔抗苏丹红I IgG。纯化产物通过BCA法、琼脂双向扩散、SDS-PAGE凝胶电泳试验进行蛋白浓度、效价及纯度的验证。实验结果表明,利用辛酸硫酸铵纯化的产物蛋白质浓度高于亲和层析法,但经亲和层析纯化的产物纯度和效价均优于饱和硫酸铵。因此亲和层析法是一种快速高效的纯化方法,纯化产物可适用于免疫学检测方法的研究,为今后食品中苏丹红添加剂的快速检测奠定了良好的基础。

2,2′-二喹啉-4,4′-二羧酸构筑的锰配合物的合成、结构及性质

利用2,2′-二喹啉-4,4′-二羧酸(2,2′-bca)为主配体,1,10-邻菲罗啉(1,10-phen)为辅配体,与四水合醋酸锰通过溶剂热反应得到配合物1([Mn(2,2′-bca)(1,10-phen)(H_(2)O)2]_(n))和配合物2([Mn(2,2′-bca)(H_(2)O)]_(n)),并使用X-射线单晶衍射、傅里叶红外光谱、元素分析、紫外光谱、荧光光谱、热重分析等测试手段对其结构进行表征与性质研究。单晶结构分析表明配合物1由一个2,2′-bca配体、一个1,10-phen和两个配位水分子组成,通过主配体2,2′-bca的桥联作用连接Mn^(2+)形成一维链结构,并通过氢键相互作用与π-π堆积,进一步有序堆积形成三维网络结构;配合物2是由一个2,2′-bca配体和一个配位水分子组成,通过2,2′-bca配体的两个羧酸基团桥联Mn^(2+)形成无限三维框架结构。两种配合物均有良好的荧光性能和热稳定性。

消光系数法与二喹啉甲酸法测定多肽浓度精密度的比较

目的比较研究实验室测定多肽浓度的消光系数法与二喹啉甲酸法(bicinchoninic acid,BCA)的精密度。方法将牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)与固相合成环肽CYE(NH2-CYENLRSTC-COOH)、CLP(NH2-CLPLWYPSC-COOH)及CHY(NH2-CHYPTYSKC-COOH)溶液梯度稀释后分别使用消光系数法和BCA法进行吸光度测定,通过消光系数公式或标准曲线方程式计算相应浓度值,比较浓度计算值与理论值之间的差异,并计算测定方法的精密度。结果消光系数法的浓度计算值与理论值之间差异无统计学意义(P>0.05)。BCA法中,以BSA作为标准品得到的多肽浓度计算值与理论值之间有显著差异(P<0.05);以待测多肽自身为标准品求得的多肽浓度计算值与理论值之间无明显差异(P>0.05);以与待测多肽长度相同、分子量相近的多肽绘制个性化标准曲线求得的多肽浓度计算值与理论值之间存在统计学差异(P<0.05),但求得的浓度计算值相比BSA标准曲线的浓度计算值更接近理论值(P<0.05)。各方法的精密度之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论消光系数法推荐用于含有色氨酸和酪氨酸的多肽;当标准品在结构、疏水性等方面的性质越接近待测物,使用个性化标准曲线的BCA法得到的浓度计算值越准确,可用于多肽浓度的快速半定量测定。

杏鲍菇菌丝体营养优势菌株的筛选

[目的]从保藏16种杏鲍菇品种中筛选出高蛋白、高多糖含量的优势菌株,为杏鲍菇功能研发发掘出优势材料。[方法]通过菌丝发酵的方法获得16种杏鲍菇的菌丝体,经过组织处理,利用二喹啉甲酸(BCA)检测法和苯酚-硫酸法进行蛋白和多糖的筛选工作。[结果]16个品种中蛋白质含量较高的品种为杏21,其蛋白含量占菌丝体鲜重的5.20%;水溶性多糖含量较高的为杏4,占菌丝体干重的6.37%。[结论]16个品种中蛋白质含量和多糖含量存在较大差异,可以根据对功能成分开发的需要,选择优势菌株并对其进行高产发酵方面的研究。

响应面法优化BCA法测定冷鲜滩羊肉中蛋白变化

以冷鲜滩羊肉为原料,通过响应面分析优化二喹啉甲酸（BCA）法测定滩羊肉蛋白质含量的最佳条件,并确定滩羊肉中蛋白质含量、pH与菌落总数三者之间的内在联系。结果表明：二喹啉甲酸（BCA）法测定滩羊肉蛋白质含量最佳参数为：温度37℃、反应时间30 min、pH 11.0、BCA溶液用量2.0 mL、样品4倍稀释和样品去脂。BCA法的加样回收率为95%~96%,精密性RSD为0.16%,表明该方法具有较高的准确性。滩羊肉冷鲜贮藏期间蛋白质含量随着贮藏时间的延长而降低,菌落总数随着时间的延长而增加,滩羊肉pH在冷鲜贮藏期间先降低后升高。

二喹啉甲酸校正系数法测定食品中肽含量

肽具有多种功能特性,已逐渐成为当前医学界、食品界及功能食品研发等领域研究的一大热点。快速准确地确定肽的浓度对研究肽的性能及作用机制十分重要。因此,研究开发更加精确、便捷、高效的食品中肽含量测定方法对促进食品肽产业健康持续发展具有重要意义。文章通过混标标准肽的选择、降低标准肽之间的差异性,研究了单个及混合干扰体系对肽测定结果的影响,并建立了校正系数法测定食品中肽含量的方法。在实际样品测定中,校正系数法测定结果的相对误差均降低至10%左右,且测量结果与凯氏定氮法测定结果差异不显著(P>0.05)。这为食品研究、蛋白质组学及肽组学研究中肽浓度的定量提供新的测定方法与理论依据。