神经病理性疼痛相关蛋白质在双侧慢性缩窄性损伤大鼠脊髓后角的表达

目的评估双侧慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠的疼痛行为学改变,分析鉴定双侧CCI大鼠神经病理性疼痛相关蛋白的表达情况。方法以雌性SD大鼠为研究对象,采用双侧坐骨神经松结扎法制造双侧CCI模型,电子von Frey和丙酮刺激检测机械痛阈与冷痛阈,液相色谱-质谱/质谱联用(LC-MS/MS)技术分析鉴定CCI大鼠脊髓后角神经病理性疼痛相关蛋白质的表达情况。结果双侧CCI大鼠术后第7和14天的机械痛阈和冷痛阈较假手术组与正常组大鼠显著降低(P均<0.05)。双侧CCI大鼠与假手术大鼠比较,共发现25种差异表达蛋白质,其中表达上调18种,表达下调7种。结论双侧CCI大鼠的机械痛阈与冷痛阈显著降低,发现其脊髓后角存在25种与疼痛行为学相关的蛋白质。

神经病理性疼痛对大鼠脊髓背角蛋白磷酸酶1的表达调控作用

目的 明确双侧坐骨神经松结扎（bCCI）大鼠脊髓背角蛋白磷酸酶1催化亚基β异构体（PPP1 CB）的表达水平及其与miR-203之间的关系,以及加巴喷丁的干预效果.方法 48只雌性大鼠,被随机分为Naive组、Sham组、bCCI组和bCCI＋加巴喷丁组,建立bCCI模型.加巴喷丁干预组分别于术前15 min 1次、术后第7天起每日2次腹腔注射给予加巴喷丁100 mg/kg,连续7d.术后第14天处死大鼠,留取脊髓背角（L4～L6）标本,分别利用real-timePCR与Western blot技术检测PPP1CB mRNA及蛋白质表达,并进行生物信息学分析.结果 PPP1 CB mRNA表达显著下降约80％,而大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白表达水平则较对照组和假手术组上升约2倍;加巴喷丁干预组大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白表达水平较未干预组显著回落（P＜0.05）,但未恢复到对照组和假手术组水平,而PPP1CB mRNA表达水平则较未干预组有显著回升（P＜0.05）,恢复到与正常对照组、假手术组相同水平;利用生物信息学验证了 miR-203对PPP1CB的调控关系.结论 bCCI大鼠脊髓背角PPP1 CB蛋白的表达量上升可能受到了miR-203的调控作用,并可能通过多种途径参与了神经病理性疼痛的发生发展.

miR-146a激动剂对大鼠神经病理性疼痛行为学和IRAK1、TRAF6表达的影响

目的：探讨miR-146a激动剂（agomiR-146a）经鞘内给药对大鼠神经病理性疼痛的影响.方法：雌性SD大鼠16只,体重200～250g,采用随机数字表法随机分为对照组（n=8）和agomiR-146a组（n=8）,两组均行双侧坐骨神经结扎手术,于手术当天及术后第3、5、7、10天分别经鞘内注射体积为15 μl的agomiR-对照组或agomiR-146a（5nmol溶于生理盐水）,于术前及术后第1、3、7、14天进行动物行为学评估,观察大鼠对机械和热刺激的反应.实时定量PCR法检测术后第14天大鼠L4～6背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）中miR-146a、白介素1受体相关激酶（interleukin-1receptor-associated kinase 1,IRAK1）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor-associated factor 6,TRAF6）的mRNA表达水平;Western-blot法检测IRAK1及TRAF6蛋白表达水平变化.结果：agomiR-146a组大鼠缩足反射热辐射潜伏期自建模后3天显著增加,而缩足反射机械刺激阈值在建模后7和14天比对照组明显升高（P＜0.05）.与对照组相比,术后14天agomiR-146a组miR-146a表达显著上调（P＜0.05）,IRAK1、TRAF6的mRNA表达水平下降（P＜0.05）;agomiR-146a组IRAK1、TRAF6蛋白水平亦明显降低（P＜0.05）.结论：miR-146a激动剂agomiR-146a经鞘内给药可以减轻大鼠神经病理性疼痛,可能为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点.

信号转导和转录激活子3抑制剂WP1066作为神经病理性疼痛治疗新靶点的可行性

目的：观察Janus激酶2（Janus kinase 2， JAK2）/信号转导和转录激活子3（signal transducers and activators of transcription 3， STAT3）通路抑制剂WP1066对神经病理性疼痛的影响。方法12只体重180～200 g雌性SD大鼠用随机数字表法分为WP1066组及对照组（n＝6），均行双侧坐骨神经结扎手术，两组于术前1 d、术前及术后第3、5天分别经鞘内注射容量为10μl的WP1066（10 mmol/L溶于二甲基亚砜）或二甲基亚砜，于术前及术后第3、5、7、10、14天进行动物行为学检测，观察大鼠对机械、热及丙酮冷刺激的反应。术后第14天处死大鼠，于L4～L6腰膨大脊髓背角处取材，使用RT-PCR及Western blot检测STAT3、细胞因子信号抑制因子3（ suppressor of cytokine signaling 3， SOCS3）、 JAK2 mRNA及蛋白水平。结果大鼠机械缩足反射阈值、热刺激缩足反射潜伏期和冷痛阈值分别从第3、5、5天开始， WP1066组较对照组明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比， WP1066组STAT3、 SOCS3、 JAK2 mRNA表达均明显降低（ P＜0.05）； WP1066组磷酸化STAT3、 SOCS3、 JAK2蛋白水平均亦明显降低（ P＜0.05）。结论 WP1066可明显改善大鼠神经病理性疼痛，可能为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点。