微生物发酵液中生物素含量的ELISA测定

生物素与亲和素具有很强的亲和力，本文利用这一特性建立了一种直接竞争抑制的酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ），用于检测微生物发酵液中生物素含量．当标准品生物素含量在０．５～２０μｍｏｌ／Ｌ范围内，它与抑制率（Ｉ）负对数呈线性关系，因此发酵液样品中生物素含量可从标准曲线上查得。该法简便、准确，而且不需对样品作任何预处理。

己烯雌酚酶联免疫检测方法的建立

建立灵敏度高和特异性强的己烯雌酚残留检测分析方法。用人工合成的己烯雌酚免疫原多次免疫家兔，获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记，可同辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素特异结合。采用纯化的抗体包被96孔板，形成固相抗体。加入不同浓度的己烯雌酚标准品后，再加入生物素标记抗体，以酶标记亲和素作为探针，经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法检测灵敏度为0．125ng／mL，可定量检测范围为0．25～15．60ng／mL。该方法操作简便，具有较强灵敏度和特异性，可满足实践中一般样品的残留检测。

人血清癌胚抗原的生物素-亲和素ELISA检测方法的建立

目的:建立检测血清癌胚抗原(CEA)的高灵敏度生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法。方法:亲和层析纯化得到CEA,免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。将得到的抗体连接生物素和辣根过氧化物酶,在生物素化BSA包被的96微孔板上建立生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)。对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行鉴定,并和常规ELISA、放射免疫检测以及化学发光法相比较检测了临床标本中的CEA浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50)U/mL,检测结果表明,体系稳定性良好;灵敏度为0.42 U/mL,批内、批间差异均小于10.0%。该研究建立的方法与常规ELISA对比差异有统计学意义,与放射免疫检测对比差别无统计学意义。与化学发光法相比较,回归方程为:y=0.04825+0.99674x,r=0.994,差异无统计学意义。结论:建立的CEA的BA-ELISA检测方法易于操作、灵敏度高、价格低廉,适合应用于临床检测。

鼠抗人sIL-6R单克隆抗体的制备及sIL-6R检测方法的建立

以重组人ｓＩＬ－６Ｒ蛋白作为抗原，获得３株分泌特异性ＭｃＡｂ的杂交瘤株，分别命名为ＳＩ１０，ＳＩ１１和ＳＩ１２。３株ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１亚类。竞争抑制试验的结果表明，３株ＭｃＡｂ识别两个不同的抗原表位。将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱生的ＭｃＡｂ腹水，经ｐｒｏｔｅｉｎＧ纯化后用生物素标记，建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ法，该法用于血清ｓＩＬ－６Ｒ的特异性检测，灵敏度为５０μｇ／Ｌ。

金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准,但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测,本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验,检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20ng.mL-1,在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%,采用本法检测质量浓度分别为100ng.mL-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI),均呈现阴性反应,说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测,发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH)酶联免疫分析试剂盒

以辣根过氧化物酶标记链亲合素 (SA) ,二株识别人促甲状腺激素 (hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化 ,以四甲基联苯胺 (TMB)为底物 ,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素 亲合素酶联免疫分析 (sTSH BA ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为 0 0 2mIU/L ,批内变异系数 <7 8% ,批间变异系数 <9 6% ,回收率为 93 3 %～ 1 0 7 8% ,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素 (如FSH ,HCG ,LH)无明显的交叉反应性。正常参考值范围为 0 3～ 4 1mIU/L。本法所制备的试剂盒与中国原子能科学研究院同位素研究所的TSH IRMA试剂盒的相关方程为 y =1 .2xIRMA+0 1 4,相关系数r =0 969。本试剂盒较常规ELISA灵敏度高、简便、快速 。

慢性肝炎患儿血清转铁蛋白含量变化与肝细胞损害程度的关系

采用本室建立的生物素－抗生物素蛋白－酶联免疫吸附测定法（ＢＡ－ＥＬＩＳＡ），检测健康儿童组、慢性肝炎患儿组的血清转铁蛋白（Ｔｆ）含量，并与患儿肝穿刺标本病理变化作对比研究。结果显示，慢性肝炎组血清Ｔｆ含量明显低于健康儿童组；Ｔｆ含量的降低与肝细胞损害程度具有相关性，慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）的血清Ｔｆ下降程度比慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）更为显著。

两种甲型肝炎病毒抗原快速检测方法的建立

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲型肝炎病毒抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法,较双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高1～2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而甲型肝炎病毒抗原双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。

ABC-ELISA检测鸡新城疫病毒

建立了检测鸡新城疫病毒的ABC-ELISA方法。应用此法测定了Lasota株、Mukt-eswar株和细胞培养的新城疫强毒的效价,结果较满意。比较试验证明,ABC-ELISA的敏感性比常规ELISA高2～16倍,比HA法高4～64倍。检测感染鸡口腔和泄殖腔棉拭材料,检出率分别为83.3％和100％,比常规ELISA分别提高33.3％和16.7％,而HA则检不出。该法特异性好,能被特异性抗体和亲和素所阻断,对传染性支气管炎病毒、鸡痘病毒、鸭瘟病毒均不发生交叉反应。重复性亦好,同一样本先后经多次测定,结果基本一致。

人粒细胞弹性蛋白酶的酶免疫测定法及其临床意义

近几年来发现,中性粒细胞在多种疾病的发病学中有广泛的作用。粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)是粒细胞嗜天青颗粒中的一种作用范围广、水解能力强的蛋白水解酶,与急慢性炎症及多种组织损伤性疾病的发生有密切关系。我们建立了一种测量人血浆NE的酶免疫——生物素法,需血浆量为20μl。正常不吸烟成人血浆NE含量为33.7±6.7ng/ml((?)±SD);慢性阻塞性肺疾患病人为48.0±10.9ng/ml;皮肤化脓性感染病人为69.1±15.7ng/ml,系统性红斑狼疮病人为61.0±13.9ng/ml;而再生障碍性贫血病人仅12.3±5.3ng/ml,这些结果与正常人相比均有显著差异。作者认为;本方法特异性好,灵敏度可达毫微克水平,可望作为探讨NE在疾病发生中的作用及监测某些疾病变化的较好指标。

异戊烯基腺嘌呤核苷(iPA)的间接酶联免疫吸附测定法

以iPA－BSA为免疫抗原制备了兔抗血清，与其它iPA类似物的交叉反应率均低于5％，抗体－抗原亲和常数为6．26×106L·mol(-1)。利用此抗体与生物素－亲和素标记（ABC）系统建立了iPA的间接酶联免疫吸附测定法，检测线性范围为0．8～1000ng·mL(-1)（2．4～5693pmol．mL(-1)，板内误差CV＜5％，板间误差CV＜10％，样品平均回收率为87．3％。经平行试验、稀释试验以及对棉花根系伤流液、侧根组织和叶片中iPA含量的测定，表明所建立的ELISA及样品提取方法是可靠的。

BA—ELISA检测人血浆异常凝血酶原用于原发性肝癌的诊断

以钡盐吸附除去血浆凝血酶原后,用生物素—亲和素酶联免疫吸附测定法(Biotin Avidjn ELISA)检测了39例健康人,42例原发性肝细胞肝癌(HCC)患者及17例肝脏良性病变患者血浆异常凝血酶原(AP)含量,结果显示HCC患者血浆AP含量≥150ng/ml的占64.3％。20例血清甲胎蛋白(AFP)阴性患者血浆的60％AP含量≥150ng/ml。两者相结合,可使HCC诊断率提高到81％。对12例癌肿直径小于5 cmHCC患者的血浆AP含量的检测,得到类似的结果。提示血浆AP的检测,有助于提高HCC的诊断率。

滤纸干血-新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),两株识别人促甲状腺素(hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了滤纸干血-新生儿促甲状腺素生物素-亲合素酶联免疫分析(NeonatalTSH-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本方法的灵敏度为0.5mIU/L,批内变异系数<15%,批间变异系数<20%,回收率为90.1%～103.3%。本方法所制备的试剂盒与NeonatalTSH-IR-MA(磁颗粒法)试剂盒具有良好的相关性,相关方程为y=1.01x+0.34,相关系数为r=0.873。本试剂盒无放射性,操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。

BA-ELISA诊断人、猪囊虫病研究

用BA-ELISA和常规ELISA检测100份囊虫病猪血清,阳性检出率分别为98％和94％,经统计学处理差异显著。人、猪囊虫血清在不同稀释度经两种方法检测,BA-ELISA检出的最高血清滴度较常规ELISA提高了4～16倍,折合成几何均数,检测人囊虫敏感2.11倍,检测猪囊虫敏感2.46倍。

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素（SA）,T3抗体包被微孔,T3生物素化,四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T3）生物素-亲合素酶联免疫分析（T3-BA-EL1SA）方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.2μg/L,批内、批间变异系数分别为7.1%－8.3%和6.5%－10.5%,回收率为98.1%－107.2%;高浓度T3血清样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.995 7。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。

玉米素核苷间接酶联免疫吸附测定法的建立

报道了一种利用兔抗 ZR 抗血清和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG 建立的 ZR 固相抗原型(或称间接)酶联免疫吸附测定法;该法的线性测定范围是0.05～12.5ng;本文表明应用生物素抗生物素标记系统能大大改善本法的测定灵敏度.

ABC－ELISA法定量检测IgM、IgG、IgA型类风湿因子的临床意义

目的探讨ＩｇＭ型、ＩｇＧ型及ＩｇＡ型类风湿因子（ＲＦ）定量检测方法的意义。方法应用生物素—亲和素结合ＥＬＩＳＡ法（ＡＢＣ—ＥＬＩＳＡ）测定类风湿关节炎５７例，其他疾病６６例，并以１００例健康人作对照。结果类风湿关节炎患者各型ＲＦ的阳性率及滴度均明显高于其他病患者（Ｐ＜０．００５），其中ＩｇＡＲＦ与ＩｇＭＲＦ相关性较大（Ｐ＜０．０１）。结论定量方法检测各型类风湿因子，有助于类风湿关节炎的早期诊断和鉴别。

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg/抗-HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试剂检测HBeAg及抗-HBe,结果显示单克隆抗体(McAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1:5000,比酶标法ELISA高1倍多,与RIA相当,且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变,1年内批间变异系数为5.8％,相同标本重复检测变异系数为5.94％,是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外,研究发现一孔一期法同时测HBeAg/抗-HBe时,无论标记抗体为单克隆或多克隆,其包被只能用单克隆抗体。

ABC－ELISA法检测小儿哮喘γ－干扰素诱生水平及其意义

采用生物素－亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附分析技术（ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ）检测了哮喘患儿血浆和淋巴细胞诱生γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）水平。结果显示：患儿血浆ＩＦＮ－γ水平极低，外周血单个核细胞经植物血凝素（ＰＨＡ）刺激后，诱生ＩＦＮ－γ的水平仍明显低于正常对照组（Ｐ＜０．００１）。哮喘发作期血清总ＩｇＥ水平明显升高。提示患儿体内细胞因子产生失衡，ＩＦＮ－γ分泌减少与哮喘的发病、病程和易诱发病毒反复感染有一定关系，测定ＩＦＮ－γ水平可作为了解患儿免疫调节功能的一个有用指标。

ABC-ELISA检测HSeAg、抗-HBe的实验研究

本文应用ABC-ELISA检测乙型肝炎e抗原、e抗体,结果表明,抗-HBc的最佳生物素标记用量为150μg/mg Ab,最适包被、标记抗体应用浓度均为10μg/ml。该法和普通ELISA比较,在294份血清中。抗-HBe的阳性率分别为59.18％及34.35％;209份HRsAg阳性血清中,HBeAg阳性率各为34.93％和27.75％,P<0.01,ABC法具有较高的灵敏度;在20份ABC法HBeAg阳性而普通法阴性的血清中,用抗-HBe作中和抑制试验,抑制率均>50％;本法检测抗-HBe时批内CV为9.23％,批问为9.80％,检测HBeAg时批内CV7.42％,批间为6.43％。