应用多重PCR在肠杆菌科细菌中检测blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因

目的应用多重聚合酶链反应(PCR)法在肠杆菌科细菌中检测blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因。方法收集2004年10月—2005年7月湖南地区中南大学3所附属医院临床标本分离的多重耐药肠杆菌科细菌171株,以美国临床实验室标准化研究所(CLSI)规定的方法进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型确证试验,多重PCR进一步进行blaTEM、blaSHV、blaOXA-1三种耐药基因的检测。结果171株多重耐药的肠杆菌科细菌中,142株(83.04%)ESBLs表型检测阳性,经多重PCR扩增,105株获得阳性结果。根据扩增片段大小判断:检出携带blaTEM菌株85株,携带blaSHV菌株26株,携带blaOXA-1菌株10株,其中15株菌同时携带多种耐药基因。结论多重PCR可以快速、准确地检测出ESBLs表型阳性肠杆菌科细菌是否携带blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因。

产β-内酰胺酶伤寒杆菌与痢疾杆菌blaTEM耐药基因研究

目的:研究新余市产β-内酰胺酶伤寒杆菌与痢疾杆菌blaTEM-1D型耐药基因流行特征。方法:收集新余新钢中心医院、新余市人民医院、新余市中医院、新余市妇幼保健院2008年1月—2010年6月分离出的伤寒杆菌产酶株6株和痢疾杆菌产酶株13株共19株,用头孢哨噻吩滤纸片法做β-内酰胺酶的定性检测,确定为产酶株后,采用PCR技术扩增质粒blaTEM-1D耐药基因,用Mark标记量出扩增子的大小(bp),统计blaTEM-1D耐药基因阳性率。结果:伤寒杆菌、痢疾杆菌产酶株blaTEM-1D耐药基因阳性率分别为66.7%(4/6)、76.9%(10/13)。结论:blaTEM-1D型耐药基因在本地区各家医院间存在水平传播和医院内垂直传播。

TEM-1型β-内酰胺酶及CarO蛋白介导的耐舒巴坦鲍曼不动杆菌临床株耐药机制研究

目的研究TEM-1型β-内酰胺酶及Car O蛋白介导的鲍曼不动杆菌临床株对舒巴坦的耐药机制。方法将24株非重复鲍曼不动杆菌临床株通过琼脂稀释法分为舒巴坦非敏感组(18株)和敏感组(6株),用纸片扩散法(K-B)行药敏试验,PCR扩增bla_(TEM-1)和car O基因,选取4株bla_(TEM-1)阳性菌株(A3、A5、1327、C1),对其扩增产物测序,BLAST软件分析;应用实时荧光定量RT-PCR技术检测2组菌株bla_(TEM-1)和car O基因m RNA转录情况。结果敏感组临床株对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮、环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林耐药率分别为1/6、2/6、3/6、1/6、5/6、5/6;非敏感组分别为6/18、10/18、18/18、18/18、18/18。敏感组未检出bla_(TEM-1),非敏感组中16株临床株扩增出bla_(TEM-1);24株临床菌株全部扩增出car O基因。测序显示4株临床株bla_(TEM-1)基因均未出现有义突变;A3、A5、1327启动序列为P4,C1为P3。BlaTEM-1基因阳性菌株m RNA相对表达量与其对舒巴坦MIC值呈正相关(rs=0.551,P=0.027);car O基因m RNA相对表达在敏感组和非敏感组中无差异。结论临床分离鲍曼不动杆菌受试菌株耐药严重,其对舒巴坦的耐药机制与TEM-1型β-内酰胺酶高表达有关,而bla_(TEM-1)基因启动子调控可能是TEM-1型β-内酰胺酶高表达的原因之一。

中国部分地区淋球菌耐药监测点产青霉素酶淋球菌及其 blaTEM-135突变体的流行调查

目的：了解中国不同地区淋球菌耐药监测点产青霉素酶淋球菌（PPNG）的比例及 blaTEm-135突变体在 PPNG 中的分布，比较 PPNG 及 blaTEm-135突变体淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）的型别分布，了解不同地区 PPNG blaTEm-135突变体的差异与联系。方法2012年在江苏、上海、浙江、天津、广东、广西6个淋球菌耐药监测点共收集572株淋球菌，经过分离纯化及鉴定后，采用头孢噻吩纸片法测定 PPNG；菌株培养后利用试剂盒提取 DNA，通过错配扩增突变分析 PCR（MAMA PCR）鉴定 blaTEm-135突变体，采用 NG-MAST 进行分型研究。结果572株淋球菌中 PPNG 总阳性率为38.1%（218/572），PPNG 中相应 blaTEm-135突变体的总比例为52.3%（114/218）。监测点中 PPNG 阳性率从高至低分别为：浙江（45/87，51.7%）、上海（36/79，45.6%）、广东（78/205，38.0%）、广西（12/32，37.5%）、江苏（24/77，31.2%）、天津（23/92，25%）；PPNG 中相应 blaTEm-135突变体的阳性率从高至低分别为：浙江（31/45，68.9%）、江苏（14/24，58.3%）、广东（39/78，50.0%）、上海（17/36，47.2%）、天津（9/23，39.1%）、广西（4/12，33.3%）。 NG-MAST 分型研究显示，blaTEm-135突变体中流行菌株型别有 ST2318、ST1768、ST1866、ST1053、ST8726等，其中 ST1768、ST1053和 ST8726与 blaTEm-135突变体有较强的对应关系。天津 PPNG 菌株及 blaTEm-135突变体 ST 分布与其他各监测点有显著差异，江浙沪地区菌株 ST 有一定联系。结论中国淋球菌耐药监测点 PPNG 及相应 blaTEm-135突变体阳性率处于较高水平，不同地区间 PPNG 及相应 blaTEm-135突变体阳性菌株 ST 型别分布差异有统计学意义。

散发肠道腹泻病人中副溶血弧菌表型及基因型特征分析

目的分析广州市海珠区散发腹泻病人中副溶血弧菌临床分离株的表型及基因型特征,对缺乏聚集性信息的病例开展实验室分析。方法进行表型鉴定,同时进行毒力基因分析及PFGE分子分型。结果广州市海珠区腹泻病人中存在两种血清型:O3:K6(90.9%)和O1:KUT(9.09%,尿酶阳性);所有菌株至少对8种抗生素敏感,对氨苄西林耐药;毒力基因检测:tlh+,tdh+,trh-(81.81%),tlh+,tdh+,trh+(9.09%),tlh+,tdh-,trh-(9.09%);11株均不携带blaTEM基因;分为4种PFGE型别,分属于3个克隆群。结论海珠区腹泻病人中潜在流行的血清型是O3:K6,主要携带tdh基因,少数携带trh基因,PFGE图谱显示,该区域散发腹泻病人中副溶血弧菌有63.6%来自同一克隆起源。