云南省部分地区鸽粪中新型隐球菌的分离与鉴定

目的对云南省部分地区鸽粪中新型隐球菌进行分离鉴定,并对各个地区鸽粪中新型隐球菌带菌率进行调查。方法采集云南省4个城市鸽粪标本共473份,用黑米琼脂培养基对其进行分离,肉眼观察菌落形态、颜色,光学显微镜下观察菌体形态,对疑似菌落进行纯培养后用特异性引物CN4和CN5扩增URA5基因,阳性者鉴定为新型隐球菌,并用SPSS16.0对其结果进行统计分析。结果云南省4个地区473份鸽粪标本中共分离出152株新型隐球菌,平均阳性率为32.13%。其中大理地区阳性率为26.08%,昭通阳性率为30.05%,曲靖阳性率为81.81%,临沧阳性率为37.03%。4个地区阳性率差异有统计学意义(χ2=41.87,P<0.01)。结论云南地区鸽粪中新型隐球菌带菌率较高,且不同地区带菌率不同。

两种新型隐球菌选择性培养基的比较研究

目的比较咖啡酸玉米琼脂培养基(caffeic acid cornmeal agar medium,CACA)和黑米琼脂培养基(black rice agar medium)对鸽粪中新型隐球菌的分离效果。方法用无菌竹签从鸽舍随机采取鸽粪标本,取0.6g与10ml无菌生理盐水制成悬液,然后按每个平板100μl分别接种咖啡酸玉米琼脂培养基和黑米琼脂培养基,肉眼观察菌落形态、颜色,光学显微镜下观察菌体形态,同时用特异性引物CN4和CN5扩增新型隐球菌URA基因,分别统计两种培养基中出现阳性菌株的平板数目。结果黑米琼脂培养基中新型隐球菌菌落呈棕黄色,外观湿润,状似胶汁。共分离获得23株新型隐球菌,检出率32.86%。CACA中新型隐球菌菌落较黑米琼脂培养基上的菌落小,褐色,干燥。共分离出11株新型隐球菌,检出率为15.71%。黑米琼脂培养基的检出率与CACA比较差异有统计学意义(P<0.05),且丝状真菌覆盖性生长的平板数目少于CACA,污染程度低于CACA;通过墨汁染色,在光学显微镜下观察新型隐球菌菌体呈圆形或卵圆形,外有宽厚荚膜,PCR扩增得到了目的条带产物。结论黑米琼脂培养基作为新型隐球菌的选择性培养基其分离培养效果(检出效果和检出率)优于CACA。