不同生物制剂对烤烟提质防病效果及土壤特性的影响

【目的】探明不同生物制剂对烤烟提质防病及土壤特性的影响,为减施化学农药,保障烟区烟叶生产安全并促进当地烟草产业的可持续发展。【方法】采用随机区组试验,对比分析单施枯草芽孢杆菌(A)、单施木霉菌(B)、单施苦参硫磺(C)、枯草芽孢杆菌与苦参硫磺配施(AC)和木霉菌与苦参硫磺配施(BC)下烟草根黑腐病和黑胫病的发病率、土壤理化性质、土壤微生物多样性、农艺性状及烟叶品质的差异。【结果】各处理根黑腐病发病率为1.76%~5.04%,防效为28.77%~65.08%,除A外,其余处理根黑腐病发病率较不施药(CK)显著降低;各处理黑胫病发病率为2.33%~4.40%,防效为31.82%~48.86%,除A外,其余处理黑胫病发病率较CK显著降低,AC和BC对2种病害的防效较佳,防效为47.05%~65.08%,且农艺性状表现较好;烟叶物理特性,中部烟叶以C表现较好,得分较CK提高6.02%,上部烟叶以AC表现最好,得分较CK提高6.74%;各处理中部烟叶化学成分协调性略差于CK,上部烟叶则以A、C较好,均较CK提高4.35%;各处理土壤细菌多样性指数为8.06~8.60,除A稍低于CK外,其余处理均高于CK但无显著差异,土壤真菌多样性指数为6.80~7.59,其中,BC(7.59)、B(7.34)均显著高于CK(6.86);各处理土壤理化性质无显著差异,AC和BC使土壤容重呈降低趋势,孔隙度呈上升趋势。【结论】苦参硫磺与木霉菌或枯草芽孢杆菌配合施用能较好地防治烟草黑胫病和根黑腐病,不同程度提高烟叶的物理特性、协调化学成分,木霉菌可显著提高土壤真菌多样性。

烟草根黑腐病拮抗菌的分离鉴定和生防作用特性研究

为挖掘对烟草根黑腐病菌有较强拮抗效果,且可在烟株根部稳定定殖的生防菌资源,以烟草根黑腐病菌为靶标,利用稀释涂布法和平板对峙法分离筛选出高效拮抗活性菌株,对其进行系统发育分析以及粗脂肽抑菌活性检测;并运用PCR技术检测拮抗细菌的脂肽编码基因,利用趋化性及生物膜成膜等试验研究烟草根系分泌物及其产生的各种有机酸对拮抗菌根部定殖的影响。结果表明:从烟草根际土壤中分离得到两株Thielaviopsis basicola高效拮抗菌株S2-1和SNSY15-5,分子鉴定表明,S2-1和SNSY15-5均为芽孢杆菌属细菌;拮抗菌S2-1和SNSY15-5脂肽粗提物对T.basicola毒力较强,EC 50值分别为1.93和2.56 mg·mL^(-1),SNSY15-5含有参与脂肽类家族细菌素(bmyB)、生物素操纵子(bioA)和假定蛋白(yngG)合成的基因;S2-1菌株中含有参与脂肽类家族生物素操纵子(bioA)合成的基因;烟草品种K326根系分泌物产生的苹果酸对S2-1和SNSY15-5有较强的吸引作用,S2-1和SNSY15-5在苹果酸中的数量分别达到63.35×10^(4) CFU·mL^(-1)和42.35×10^(4) CFU·mL^(-1),K326烟草根系分泌物及其草酸可促进S2-1生物膜形成,而K326烟草根系分泌物及其柠檬酸则促进SNSY15-5生物膜形成。该研究结果为开发效果稳定的微生物菌剂提供理论基础。

烟草根黑腐病化学防治药剂及复配增效配方的筛选

目的:筛选防治烟草根黑腐病菌的有效单一药剂及其复配制剂。方法:采用菌丝生长速率法测定7种商品化杀菌剂对烟草根黑腐病菌的室内毒力活性,筛选出防效较好的单一杀菌剂;在此基础上,对防效较好的单一杀菌剂进行复配,并对复配药剂开展烟草根黑腐病菌的室内毒力测定试验。结果:室内杀菌剂毒力测定结果表明,咪鲜胺、甲基硫菌灵2种杀菌剂对烟草根黑腐病菌均具有较强的抑制作用;且咪鲜胺和甲基硫菌灵按1∶1复配时,对烟草根黑腐病菌毒力有明显的协同增效作用,EC_(50)为0.19 mg/L。结论:咪鲜胺和甲基硫菌灵单剂及其复配药剂均对烟草根黑腐病菌的菌丝生长具有抑制效果,该结果为后续烟草根黑腐病田间防效试验提供了理论依据。

3种生物制剂在宣威南部烟区的防病提质效果研究

为减轻长期大量使用化学农药带来的一系列问题,保障烤烟产业的可持续发展,在宣威南部烟区以云烟100为供试烤烟品种,比较了单施枯草芽孢杆菌(处理A)、单施木霉菌(处理B)、单施苦参硫磺(处理C)、苦参硫磺与枯草芽孢杆菌配施(处理CA)、苦参硫磺与木霉菌配施(处理CB)和不施药处理(CK)对烤烟根黑腐病、黑胫病(俗称“两黑病”)发病率、烟株农艺性状和烟叶品质、植烟土壤理化性质及微生物多样性的影响。结果表明:与CK相比,生物制剂处理的“两黑病”发病率均显著降低,处理CA、CB防治效果较佳,对黑胫病的防治效果分别达59.41%、68.48%,对根黑腐病的防治效果分别达63.27%、71.63%,且农艺性状表现较好,烤后烟叶物理特性提高;土壤养分不同程度地提高,土壤容重降低,土壤比重、孔隙度、胡敏酸碳、富里酸碳、胡敏素碳均有不同程度地上升;土壤细菌多样性也显著提高。总体来看,苦参硫磺与木霉菌或枯草芽孢杆菌配合施用能对烟草黑胫病、根黑腐病取得良好的防治效果,并对改善土壤条件有一定的作用。

烟杆碳基肥与拮抗微生物复配对烟草生长和抗病性的影响

为明确烟杆碳基肥与拮抗微生物肥料复配对烟草生长和抗性的影响,本研究在重庆市奉节县烟草基地开展小区试验,利用烟杆碳基肥与多粘类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌复配,调查不同施肥处理对烟株农艺性状、抗病性及产量产值的影响.结果表明,烟杆碳基肥结合多粘芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌1 kg/666.67 m^(2)复配对烟株生长有一定的促进作用;烟杆碳基肥对土壤酸化改良的效果较为稳定,处理50 d土壤pH值提高了0.64和0.61;烟杆碳基肥综合防控方案对根黑腐病的防治效果为67.8%.烟杆碳基肥与拮抗微生物的协同效应对提升烤烟产量及品质、增强烤烟抗病害能力与农业废弃物资源化利用均具有重要意义.

增加施钾量对红花大金元烤烟部分生理生化参数及“两黑病”发生的影响

针对生产中红花大金元烤烟品种对黑胫病和根黑腐病(俗称"两黑病")抗性较低的问题,通过田间试验研究了不打杀菌剂条件下增加施钾量(与目前生产推荐187.5kgK2Ohm–2相比,分别增加75和150kgK2Ohm–2)对红花大金元烟株移栽后不同时间段健康烟株烟叶中的总氮、蛋白质、游离氨基酸、可溶性糖、总酚和类黄酮含量等生理生化指标及烤烟"两黑病"发病情况的影响。结果表明,随施钾量增加,烟叶内总氮、蛋白质和游离氨基酸含量下降,而可溶性糖、总酚和类黄酮含量则相反;同时"两黑病"发病情况也呈明显下降趋势。上述指标在对照与高钾处理间差异显著,且上述结果在烟株移栽后不同时间段规律一致。烤后烟叶产量、产值以中钾处理最大,高钾处理次之,对照最小。中、高钾两处理产量比对照分别增加4.49%和1.55%,产值分别增加18.27%和12.34%,中钾处理与对照间差异明显。说明目前红花大金元烤烟生产中的推荐施钾量偏低,应适当增加施钾量以增强烟株抗性,减少"两黑病"病害的发生。就本试验而言,当地施钾量以增加75kgK2Ohm–2(即总量达262.5kgK2Ohm–2)为宜。

4种杀菌剂对烟草根黑腐病菌的室内毒力测定

采用生长速率法测定了4种杀菌剂对烟草根黑腐病菌[Thielaviopsis basicola(Berk.and Br.)Ferraris]的室内抑菌毒力。测定结果表明,多菌灵、甲基托布津、大生M-45和杀毒矾等4种药剂对烟草根黑腐病菌的EC50分别为0.4251、5.3134、30.2686和37.2234mg/L,EC90分别为0.8170、11.4312、110.1398和160.5393mg/L。并且,结合对各种药剂有效成分和作用机理的比较,确定最佳的用药方式为多菌灵与大生M-45交替施用。

拮抗放线菌TA21对烟草根黑腐病菌的抑制及其控病作用

菌株TA21是一株从重庆烟区土壤中筛选出的对烟草根黑腐病菌Thielaviopsis basicola有较强拮抗作用的放线菌,为了明确其抑菌效果和控病作用及其在烟草根黑腐病生防中的应用潜力,本文进行了菌株TA21抑菌活性检测和温室控病测试;并通过形态学、生理生化和分子分类的方法确定其分类地位。室内测定试验表明,菌株TA21对烟草根黑腐病菌的抑菌带宽达12.5mm;温室控病试验发现其对烟草根黑腐病防治效果达85.3%。无菌滤液试验表明,在试验浓度范围内无菌滤液均能有效抑制烟草根黑腐病菌菌丝生长、减少孢子萌发。根据菌株形态特征、培养性状、生理生化特性、细胞组分及16S rDNA序列分析,确定菌株TA21为链霉菌属吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus。

安徽省烟草根黑腐病病原鉴定及生物学特性分析

为了明确引起安徽省烟草根黑腐病的病原菌种类,选择具有典型症状的烟草根黑腐病烟株,采用胡萝卜圆片法对病原菌进行了分离。同时根据病原菌的培养形态和r DNA-ITS区序列对病原菌种类进行了鉴定,采用灌根法对病原菌进行致病性测定,并对病原菌的生物学特性进行研究。鉴定结果表明,分离得到的病原菌菌株为基生根串珠霉(Thielaviopsis basicola),对烟草品种云烟87有致病力。生物学特性分析表明,病原菌生长的最适培养基为V8,菌丝生长和孢子萌发最适温度为25℃、最适p H为6,分生孢子致死温度为53℃。该病原菌能有效利用淀粉、麦芽糖、葡萄糖等碳源以及尿素、硝酸锌等氮源。

皖南烟田三种土传病原物分子检测

为检测皖南烟田土传病害的分布,2011—2012年从皖南烟区烟田共采集土样51份,采用分子生物学方法对烟田土壤进行了烟草黑胫病、根黑腐病和青枯病检测。结果显示,烟田土壤中烟草黑胫病菌、根黑腐病菌和青枯病菌的阳性率分别为19.6%、41.2%和56.9%,3种烟草土传病原菌在皖南烟区多数烟田均有分布,其中青枯病菌检出率最高。本研究证明了应用分子生物学方法检测土传病原菌的可能性,生产上可为烟草种植提供理论依据。

烟草根黑腐病拮抗木霉菌株TB72的鉴定及抑菌作用

菌株TB72是针对烟草根黑腐病菌从烟草报际土壤中分离筛选出有较强拮抗作用的木霉菌,为进一步明确其抑菌能力、控病效果及其对烟草根黑腐病的生防潜能,本研究通过平板对峙培养法、抑菌活性检测和控病测试,结合菌株TB72的培养性状、形态特征和分子鉴定确定其分类地位。试验结果发现菌株TB72对烟草根黑腐病菌具有明显拮抗作用,抑菌率达52.3%;控病试验表明菌株TB72对烟草根黑腐病的防效达84.5%,能显著降低烟株接种病菌后的发病率和病情指数。抑菌活性检测菌株TB72无菌滤液在测试的各浓度下对病菌苗丝生长和孢子萌发均有较好的抑制效果。通过对菌株TB72的培养性状、形态特征及ITS序列分析,确定其为木霉属中的棘孢木霉Trichoderma asperellum。

宜宾烟区烤烟根黑腐病发生动态及主要影响因素

为有效防控烤烟根黑腐病害,于2019年和2020年采用普查和系统调查相结合的方法,对宜宾烟区烤烟根黑腐病发生动态及主要影响因素进行了研究。结果表明,苗期烤烟根黑腐病发病较轻或不发病;大田期于5月初开始零星发病,5月中旬至7月上旬进入发病高峰期,病害流行速度随降水量增加而增加,7月中旬至8月中旬,病害流行速度增长缓慢直至趋于零。前茬作物和栽培模式对烤烟根黑腐病发生均有较大影响,前茬为水稻的烤烟根黑腐病发病最轻,前茬为玉米的次之;栽培模式以全生育期覆盖地膜的地块根黑腐病发病较重。经普查发现,烤烟根黑腐病的发生随海拔升高呈加重趋势。聚类分析结果显示,宜宾烟区烤烟根黑腐病的发生可划分为较重发生区、中等发生区和轻或偏轻发生区,其中以中等、轻或偏轻发生区为主。综合普查和系统调查分析认为,宜宾烟区降水量、轮作方式、栽培模式是影响根黑腐病发生的主要因子,海拔高度是影响根黑腐病发生的次要因子。

黑腐病对花椰菜(Brassica oleracea L.var.botrytis)幼苗根系形态和生理的影响

阐明黑腐病对苗期花椰菜的根系形态和生理影响,为建立花椰菜抗黑腐病根系育种新途径提供依据,利用黑腐病菌感染花椰菜抗病品种雪峰的叶片后,研究植株根系发生的一系列形态和生理变化。结果表明,接种7天后的植株根长、根干重、地上部干重、根系活力比接种后2天的显著增加。接种处理的植株根长、根干重和地上部干重明显比未接种对照(CK)低,但是接种幼苗的根系活力比未接种对照的根系活力高。接种3天后,接种处理的根系可溶性蛋白质含量一直显著高于未接种对照;接种后0～4天,接种处理的根系超氧化物歧化酶(SOD)活性明显低于未接种对照,但到接种后5～7天,接种处理的根系SOD活性又显著高于未接种对照;根系多酚氧化酶(PPO)活性和脱落酸(ABA)含量在植株接种后都显著高于未接种对照。但是,黑腐病病原菌没有提高根系过氧化物酶(POD)活性。以上结果说明,黑腐病菌引起了花椰菜幼苗根部一系列形态变化,并通过诱导植株根系中防御酶活性和调控内源激素等抵御病原菌的进一步侵染。

烟草体内外拮抗细菌协同控制根黑腐病及诱导寄主抗性试验

烟草内生细菌T295和烟草土壤根际细菌R27均能有效抑制烟草根黑腐病,为探索烟草体内外拮抗细菌协同作用于烟株的防病效果及控病机理,测定了菌株T295和R27协同作用对烟草根黑腐病的防效和对菌丝、孢子的抑制作用,以及对烟草体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)等相关防御酶活性的影响。结果表明:内生细菌T295和土壤根际细菌R27协同作用于烟草能明显提高对烟草根黑腐病的控制效果,其无菌发酵液混合处理可以明显提高病原菌菌丝生长的抑制效果,但对孢子萌发抑制作用不明显。经内生细菌T295处理后的烟草,其体内5种酶活性高于R27处理,但混合菌液与T295处理的烟草酶活性变化差异不显著,内生细菌T295和土壤根际细菌R27两者诱导抗性未表现出累加效应,表明混合菌液处理的烟株诱导抗性主要与内生细菌T295能提高烟草中相关防御酶活性有关。

土壤抑制烟草黑根腐病的机制

能抑制植物病害的土壤称为抑病土．抑病土在世界上分布广泛，已报道了多种植物土传病害可被土壤抑制．在烟草黑根病抑病机制的研究方面也有许多报道，本文根据这些作者及自己的研究资料加以综述．

文山三七三种病原真菌的分离、鉴定及其体外生长速率的研究（英文）

[目的]分离、鉴定文山三七根腐病、黑斑病和圆斑病的主要病原真菌,并探明其体外生长速率。[方法]用马铃薯葡聚糖琼脂培养基分离、纯化病原真菌,以真菌体外培养时的菌落形态和回接试验中的病兆特征和再分离真菌的菌落形态进行形态鉴定,以真菌ITS序列扩增与比对进行分子鉴定,用体外培养时病原真菌菌落直径和厚度的增加速率来表征其生长速率。[结果]文山三七根腐病、黑斑病和圆斑病的主要病原真菌分别为双孢柱孢、人参链格孢和槭菌刺孢。体外培养时,双孢柱孢菌落的直径和厚度增大最快,其次为人参链格孢的,槭菌刺孢的则最慢;在同一培养时间,不同真菌的菌落直径、厚度间的各自差异仅达到显著水平。[结论]文山三七根腐病、黑斑病和圆斑病的主要病原真菌分别为双孢柱孢、人参链格孢和槭菌刺孢,当三种病害同时发生时,根腐病将蔓延最快,黑斑病次之,圆斑病则最慢。

土壤中烟草根黑腐病菌的real-time PCR分子检测

根据烟草根黑腐菌与其它近缘真菌在ITS序列上的差异,设计PCR检测引物TbF/TbR,并通过对各菌株基因组DNA扩增验证其特异性;以接种10倍浓度梯度的根黑腐菌孢子的土壤DNA为模板,建立土壤烟草根黑腐菌real-time PCR检测的标准曲线,得出每个反应体系中分生孢子数目的对数(x)和对应的Ct值(y)之间呈线性关系:y=-1.5373x+24.955,R2=0.9909(P<0.01)。通过对5块烟田土壤烟草根黑腐菌检测和烟田烟草根黑腐病的调查,证实上述方法可以准确检测土壤中烟草根黑腐菌孢子数量。

3种烟草根茎病害防治药剂的筛选

为了有效控制烟草根茎病害的发生和危害,通过田间小区试验,分别研究不同药剂对烟草青枯病、烟草黑胫病和烟草根黑腐病的防治效果。结果表明:不同药剂均能在一定程度上降低烟草根茎病害的发病率和病情指数,对于烟草青枯病,解淀粉芽孢杆菌的防效最佳,相对防效在70%以上,其次是中生菌素;对于烟草黑胫病,当发病较轻时,拜耳卓润和哈茨木霉菌有一定防效,相对防效在34%以上,但随着病情的加重,防治效果一般;对于烟草根黑腐病,枯草芽孢杆菌的防治效果最佳,相对防效达70%以上,其次是哈茨木霉菌。

萝卜抗黑腐病、黑斑病和根肿病育种相关基础研究

利用萝卜黑腐病菌株在42份萝卜种质资源苗期喷雾接种筛选获得6份抗病材料,18份中抗材料;萝卜块离体接种黑腐病菌株从13份高代自交系中筛选获得2份中抗材料。利用萝卜黑斑病孢子悬浮液喷雾接种于离体叶片,从13份高代自交系中筛选获得1份抗病材料,6份中抗材料。利用已知的根肿病4号生理小种从13份高代自交系中筛选获得2份感病备选材料,4份抗病备选材料。

烟草黑胫病和根黑腐病生防假单胞杆菌的筛选与鉴定

为获得对烟草黑胫病和根黑腐病具有双重防病效果且能够促进烟草生长的假单胞杆菌,采用稀释涂布法从40份土壤样品中分离出201株细菌,通过平板对峙和含毒介质法,筛选出对烟草黑胫病和烟草根黑腐病病原菌均具有良好拮抗作用的菌株PA2101和PG3402。盆栽促生试验表明,菌株PA2101和PG3402能协调地改善烟草地上部分的生长和烟草根系发育,均在一定程度上增加了烟草的株高、叶面积、株鲜重、根鲜重、叶片数和根长,提高了烟草的根冠比和根活力。盆栽试验结果表明,菌株PA2101对烟草黑胫病和根黑腐病的防效分别为70.11%和62.67%,均高于其对照药剂;菌株PG3402对两种病害的防效分别为60.92%和60.00%,与对照药剂相当。抗性标记菌株的定殖试验结果表明,菌株PA2101和PG3402在接种后第29 d能定殖于烟草根际土壤和根内,在烟草茎和叶内也能长时间存在,表明两菌株能够良好定殖。16Sr DNA序列、菌落形态和生理生化性状分析表明,菌株PA2101为铜绿假单胞杆菌Pseudomonas aeruginosa,菌株PG3402为格拉纳达假单胞杆菌Pseudomonas granadensis。综上所述,菌株PA2101和PG3402对烟草具有良好的促生作用,并对烟草黑胫病和根黑腐病有较好的防病效果,是具有生防潜力的菌株。