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应用组织工程口腔黏膜重建尿道的初步实验研究 被引量:6
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作者 李超 徐月敏 +2 位作者 宋鲁杰 崔磊 尹烁 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1242-1245,共4页
目的探讨兔口腔黏膜细胞的体外培养方法,并以其为种子细胞与异体膀胱黏膜下脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)复合,构建组织工程尿道。方法18只10周龄雄性新西兰大耳白兔,体重0.3~0.5kg。取其中12只兔口腔黏膜组织,分... 目的探讨兔口腔黏膜细胞的体外培养方法,并以其为种子细胞与异体膀胱黏膜下脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)复合,构建组织工程尿道。方法18只10周龄雄性新西兰大耳白兔,体重0.3~0.5kg。取其中12只兔口腔黏膜组织,分离获得口腔黏膜细胞。将口腔黏膜细胞分别接种于有3T3细胞及无3T3细胞的培养皿进行培养,接种后第2天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线,观察生长增殖情况,并行免疫荧光组织化学染色鉴定。取余6只兔膀胱,经脱细胞处理制备BAMG,随机取1cm×1cm组织行HE染色,观察脱细胞效果。将接种于有3T3细胞培养皿培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG上,培养1周后,行HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG的复合状况。结果倒置相差显微镜下观察,接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞可传至7~8代,其细胞形态均一,功能良好;无3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞形态多样,传至第2代时,即开始出现老化。细胞生长曲线显示,两种方法培养的口腔黏膜细胞均于第8天开始呈对数增长,第14天达峰值。接种于有3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞,培养至融合时所获得细胞数量明显多于接种于无3T3细胞培养皿的口腔黏膜细胞。两种方法培养的口腔黏膜细胞行免疫荧光染色,均呈绿色荧光。HE染色观察,BAMG经脱细胞处理后未见细胞,脱细胞效果良好。复合培养1周后,HE染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG复合良好。结论兔口腔黏膜细胞可在体外成功培养、扩增,与同种异体BAMG复合后生长良好,为构建组织工程尿道提供了一种新的选择。 展开更多
关键词 组织工程尿道 口腔黏膜细胞 膀胱黏膜下脱细胞基质 体外复合
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兔膀胱无细胞基质作为组织工程学细胞载体的评价 被引量:3
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作者 王涌泉 史学明 +1 位作者 甘秀国 安瑞华 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期29-31,共3页
目的评价膀胱无细胞基质移植物(BAMG)作为组织工程学细胞载体的可行性。方法10只兔行半膀胱切除术,切取的一半膀胱制备BAMG。另选择20只兔行半膀胱切除术后,用BAMG重建兔膀胱。测定术前和重建术后8周时的膀胱容量、压力和顺应性。HE染... 目的评价膀胱无细胞基质移植物(BAMG)作为组织工程学细胞载体的可行性。方法10只兔行半膀胱切除术,切取的一半膀胱制备BAMG。另选择20只兔行半膀胱切除术后,用BAMG重建兔膀胱。测定术前和重建术后8周时的膀胱容量、压力和顺应性。HE染色和透射电镜观察BAMG以及重建术后8、16周时的兔膀胱。结果BAMG中未见细胞成分。重建兔膀胱8周时,BAMG中除多层移行上皮外,其余组分还不成熟。16周时,重建膀胱和正常膀胱组织已无法区别。重建膀胱术后8周与术前比较,膀胱的容量、压力和顺应性无显著差异(P> 0.05)。结论BAMG是组织工程学技术中理想的细胞载体。 展开更多
关键词 膀胱无细胞基质 组织工程学 细胞载体
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人脂肪来源干细胞与膀胱脱细胞基质-丝素蛋白双层支架的生物相容性研究 被引量:3
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作者 赵阳 吴稼晟 +6 位作者 周哲 周娟 张明 李伟 王忠 孙康 卢慕峻 《组织工程与重建外科杂志》 2014年第6期309-313,共5页
目的观察人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,h ASCs)在膀胱黏膜下脱细胞基质-丝素蛋白(Bladder acellular matrix graft-silk fibroin,BAMG-SF)双层支架材料中的生长情况,分析其生物相容性。方法取h ASCs,置于BAMG-SF... 目的观察人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,h ASCs)在膀胱黏膜下脱细胞基质-丝素蛋白(Bladder acellular matrix graft-silk fibroin,BAMG-SF)双层支架材料中的生长情况,分析其生物相容性。方法取h ASCs,置于BAMG-SF浸提液中培养,CCK-8法检测其细胞活力,评价BAMG-SF支架的细胞毒性并绘制生长曲线。扫描电镜观察BAMG-SF双层支架材料的表面形貌。将h ASCs传代扩增后接种到BAMG-SF双层支架材料上,体外培养1周后,转至裸鼠皮下培养1周、2周,HE染色观察细胞在支架上的生长情况。HLA免疫荧光鉴定裸鼠皮下双层支架上细胞的种属来源。结果 h ASCs在BAMG-SF双层支架浸提液中可保持较高的增殖率,根据细胞相对增殖率与细胞毒性分级关系证实BAMG-SF双层支架浸提液无细胞毒性。由h ASCs在BAMG-SF浸提液和DMEM培养基中的生长曲线可知,BAMG-SF有利于h ASCs的生长。将h ASCs接种到BAMG-SF双层支架材料上,经过体外、内培养,h ASCs均能长入支架的空隙内,且体内培养比体外培养有更多的h ASCs细胞长入支架。HLA检测显示支架内细胞部分为h ASCs。结论新型BAMG-SF双层支架材料安全无毒,与h ASCs生物相容性好,可作为细胞载体应用于组织工程膀胱的研究。 展开更多
关键词 人脂肪来源干细胞 膀胱黏膜下脱细胞基质 丝素蛋白 双层支架材料 组织工程
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皮下预制膀胱脱细胞基质-丝素蛋白双层支架修复大鼠膀胱的实验研究 被引量:3
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作者 王琼 肖冬冬 +5 位作者 赵阳 周哲 周娟 王忠 张明 卢慕峻 《组织工程与重建外科杂志》 2016年第6期335-339,共5页
目的观察膀胱脱细胞基质-丝素蛋白(Bladder acellular matrix graft-silk fibroin,BAMG-SF)双层支架经皮下预制处理后,修复大鼠膀胱扩大术后膀胱缺损的效果。方法取BAMG-SF置于大鼠皮下,分别经1 d、3 d、7 d和14 d后,行组织学染色,评价... 目的观察膀胱脱细胞基质-丝素蛋白(Bladder acellular matrix graft-silk fibroin,BAMG-SF)双层支架经皮下预制处理后,修复大鼠膀胱扩大术后膀胱缺损的效果。方法取BAMG-SF置于大鼠皮下,分别经1 d、3 d、7 d和14 d后,行组织学染色,评价其体内情况;实验分4组:单纯BAMG-SF组,BAMG-SF皮下预制3 d组、预制7 d组、预制自体组织组(BAMG-SF皮下预制7 d后去除BAMG-SF,保留周围结缔组织),分别修复大鼠膀胱扩大术模型,术后4周行HE、Masson及相关免疫组化染色,评价其修复情况。结果皮下预制7 d,即有大量细胞长入;皮下预制14 d,材料可被自身组织包裹;皮下预制3 d组的血管及肌肉修复程度均优于其他组,自体组织组未见结石形成。结论 BAMG-SF双层支架材料可用于膀胱缺损修复,皮下预制3 d组织修复效果最好,而自体组织组可以避免结石形成。 展开更多
关键词 膀胱脱细胞基质 丝素蛋白 皮下预处理 膀胱扩大术模型
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无细胞基质移植物在动物膀胱重建中的应用 被引量:2
5
作者 王元天 许纯孝 《国外医学(生物医学工程分册)》 2000年第2期120-122,128,共4页
膀胱扩大术和替代术是治疗膀胱疾病的常用术式。通常用胃肠道作为替代材料 ,但常会带来营养、代谢和感染等方面的并发症。人们试图寻找其它材料 ,包括自体的和人工合成的材料 ,但均可出现包括感染、排斥、结石形成等方面的问题。最近 ,... 膀胱扩大术和替代术是治疗膀胱疾病的常用术式。通常用胃肠道作为替代材料 ,但常会带来营养、代谢和感染等方面的并发症。人们试图寻找其它材料 ,包括自体的和人工合成的材料 ,但均可出现包括感染、排斥、结石形成等方面的问题。最近 ,一种新型生物材料——无细胞基质作为膀胱的替代物被成功应用于实验动物模型 ,取得了满意结果。本文将目前国外无细胞基质移植物的制备、应用及结果作一介绍。 展开更多
关键词 无细胞基质移植物 动物模型 膀胱重建
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脂肪干细胞与不同脱细胞基质的组织相容性研究 被引量:2
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作者 白勇 武阳 +3 位作者 凯赛尔·阿吉 乔炳璋 王玉杰 木拉提·热夏提 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期7-12,共6页
目的研究SD大鼠脂肪干细胞与不同脱细胞膀胱基质(BAMG)的体外生物相容性,为进一步把细胞支架复合物回植动物体内提供有利的实验基础。方法取SD大鼠双侧腹股沟处脂肪组织经过相应处理后得到原代脂肪组织,进行成骨、成脂诱导染色及流式细... 目的研究SD大鼠脂肪干细胞与不同脱细胞膀胱基质(BAMG)的体外生物相容性,为进一步把细胞支架复合物回植动物体内提供有利的实验基础。方法取SD大鼠双侧腹股沟处脂肪组织经过相应处理后得到原代脂肪组织,进行成骨、成脂诱导染色及流式细胞术检测CD29、CD34、CD44及CD45,对脂肪干细胞进行鉴定,同时制备鼠及新西兰兔BAMG,采用2次沉淀法将脂肪干细胞静态接种于不同BAMG表面,观察细胞在材料表面的生长状况,并绘制细胞生长曲线。结果细胞材料体外复合培养5 d后行HE染色后观察可见SD大鼠脂肪干细胞在SD大鼠BAMG表面生长状态较其在新西兰兔BAMG表面生长状态好,且细胞形态舒展成长梭形,细胞生长曲线与SD大鼠原代脂肪干细胞基本一致。结论 SD大鼠脂肪干细胞接种于SD大鼠BAMG复合物表面生长状况相比于其接种于新西兰兔BAMG复合物表面更加良好,具有更好的生物相容性。为进一步把细胞支架复合物回植动物体内提供有利的实验基础。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 脱细胞膀胱基质 组织相容性 修复
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人骨髓间充质干细胞在兔膀胱脱细胞基质微环境中的生物学特性 被引量:1
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作者 谭云鹤 邢俊平 郭子宽 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期55-59,共5页
目的利用兔膀胱脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)构建微环境,从细胞增殖能力、表面标记物及分子蛋白水平探讨其对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived stem cells,hBMSCs)的影响。方法制备BAMG浸泡液培养基,... 目的利用兔膀胱脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)构建微环境,从细胞增殖能力、表面标记物及分子蛋白水平探讨其对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived stem cells,hBMSCs)的影响。方法制备BAMG浸泡液培养基,MTT法检测其对hBMSCs增殖的影响;流式细胞仪检测hBMSCs表面标志物CD44、CD45、CD73及PDGFRβ的表达;RT-PCR检测BAMG微环境对PPAR、OCN、α-SMA等基因表达的影响,Western blot检测不同处理方法 OCT-4蛋白的表达情况。结果 hBMSCs与BAMG有良好的相容性;实验组与对照组细胞曲线均呈"S"型增殖,于第3天进入快速增殖期,第7天趋于平稳;两组细胞CD44、CD45、CD73、PDGFRβ的表达量基本一致,差异不具有统计学意义;OCN、PPAR、α-SMA两组均表达目的基因;Western blot法检测亦显示OCT-4阳性表达。结论 hBMSCs在兔BAMG的微环境中仍能良好保持原有的生物学特性,将该种子细胞与基质材料结合可构建需要的组织材料,为泌尿系统组织工程修复提供可能。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 膀胱脱细胞基质 RT-PCR 生物学特性 OCT-4
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膀胱无细胞基质负载骨髓间充质干细胞体外构建组织工程膀胱复合物的研究 被引量:3
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作者 高红亮 易发现 《内蒙古医科大学学报》 2016年第3期189-194,199,共7页
目的:探索大鼠膀胱无细胞基质负载骨髓间充质干细胞体外构建组织工程膀胱复合物的可行性。方法:全骨髓贴壁培养法提取大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),物理和酶消化法相结合制备大鼠膀胱无细胞基质(BAMG),将分离纯化的P3代BMSCs接种在BAMG... 目的:探索大鼠膀胱无细胞基质负载骨髓间充质干细胞体外构建组织工程膀胱复合物的可行性。方法:全骨髓贴壁培养法提取大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),物理和酶消化法相结合制备大鼠膀胱无细胞基质(BAMG),将分离纯化的P3代BMSCs接种在BAMG上共同培养构建组织工程膀胱复合物,HE染色观察复合物的细胞生长情况,以P3代BMSCs的单独培养做对照,绘制两组细胞生长曲线图,对比评价BAMG对BMSCs生长有无影响。结果:(1)全骨髓贴壁培养法分离培养的BMSCs经流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD44抗原表达阳性,而CD34呈阴性表达。(2)应用物理法和酶消化法相结合成功制备BAMG,HE和扫描电镜均未见细胞残留,具有完整的胶原及纤维结构。(3)BMSCs与BAMG能黏附生长,体外成功构建组织工程膀胱复合物,其生长曲线和对照组基本相同。结论:全骨髓贴壁培养法能简单有效的增殖纯化BMSCs,物理法和酶消化法相结合可以成功制备BAMG,二者体外成功构建组织工程膀胱复合物。 展开更多
关键词 组织工程膀胱 骨髓间充质干细胞 膀胱无细胞基质
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Continued sustained release of VEGF by PLGA nanospheres modified BAMG stent for the anterior urethral reconstruction of rabbit 被引量:7
9
作者 Ji-Hong Wang Yue-Min Xu +4 位作者 Qiang Fu Lu-Jie Song Chao Li Qin Zhang Ming-Kai Xie 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2013年第6期481-484,共4页
Objective:To study the biocompatibility and neovascularization of the PLGA nanospheres wrapped with vascular endothelial growth factor(VEGF).which can improve bladder acellular matrix graft(BAMG) with local continuous... Objective:To study the biocompatibility and neovascularization of the PLGA nanospheres wrapped with vascular endothelial growth factor(VEGF).which can improve bladder acellular matrix graft(BAMG) with local continuous release of VEGF.Methods:A total of 18 rabbit model (length of stenosis:3cm) with anterior urethral stricture were used as experimental animals and divided into three groups.Group A as the control group:Simple BAMG scaffold materials for urethral reconstruction.Group B as the blank group:PLGA microspheres modified BAMG for urethral reconstruction.Group C:PLGA conjugated with VEGF and modified BAMG for the urethral reconstruction.All rabbits underwent urethral angiography after 7 days,15 days,1 month and 3 months after the operation,and one rabbit in each group was sacrificed to be prepared for the organization histologic examination,HE staining,masson staining,CD31,34 and a-SAM immunohistochemical detection in the repaired sites.Results:In group A,significant urethral restenosis occurred in two rabbits after 15 days of the operation,HE and masson staining showed a lot of collagen arranged in the repaired sites,and there were a large number of inflammatory cell infiltration,and there were also CD31,34 in the repaired sites.a-SAM microvascular tag count showed a small amount of microvascular;Croup B showed anastomotic restenosis,HE and masoon staining showed inflammatory cell infiltration and collagen deposition;Group C:urethrography showed lumen patency.There were a small amount of inflammatory cell infiltration after 7 and 15 days after the operation,and there were also CD31,34 in the repaired sites.The a-SAM microvascular tag count showed many microvascular.And the difference was significant.Conclusions:Anterior urethral reconstruction with sustained-release of VEGF by PLGA nanospheres modified BAMG stents can reduce postoperative restenosis.It can also reduce collagen deposition and scar formation,promote angiogenesis of the repair tissue;therefore it in valuable in the tissue-engineered urethral reconstruction. 展开更多
关键词 Vascular ENDOTHELIAL growth factor PLGA NANOSPHERES bladder acellular matrix graft
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口腔黏膜细胞与膀胱黏膜下脱细胞基质复合物构建组织工程化尿道的实验研究 被引量:37
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作者 李超 徐月敏 +3 位作者 宋鲁杰 傅强 崔磊 尹烁 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期368-372,共5页
目的探讨以兔口腔黏膜细胞与同种异体膀胱黏膜下脱细胞基质(BAMG)复合物构建组织工程化尿道的可行性。方法新西兰雄性兔24只,距尿道外口2.0cm剥离尿道黏膜(2.0cm×0.8cm)后,随机分实验组和对照组,每组12只。切取实验组兔... 目的探讨以兔口腔黏膜细胞与同种异体膀胱黏膜下脱细胞基质(BAMG)复合物构建组织工程化尿道的可行性。方法新西兰雄性兔24只,距尿道外口2.0cm剥离尿道黏膜(2.0cm×0.8cm)后,随机分实验组和对照组,每组12只。切取实验组兔口腔黏膜组织分离细胞,在有灭活的3T3细胞培养皿上进行培养扩增,将培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG(2.2cm×1.0cm)上,植入实验组兔尿道缺损区域;对照组单纯采用无细胞植入的BAMG修复尿道。分别于术后1、2、6个月观察动物排尿情况,行尿道造影,8F尿管插管确定有无狭窄;随后处死实验兔,取修复段尿道黏膜组织行组织学检查。结果细胞培养获得的口腔黏膜细胞形态均一,生长良好;组织形态学、扫描电镜观察见口腔黏膜细胞与BAMG具有良好的相容性。实验组兔术后1、2、6个月伤口愈合良好、排尿通畅,无尿瘘发生,组织学和尿道造影检查显示带细胞修复的尿道形态完整、清晰宽敞,无狭窄发生;术后6个月植入的口腔黏膜细胞仍然存在,并明显扩增。对照组兔则出现排尿困难、尿道狭窄,光镜下发现黏膜及黏膜下存在严重的炎症反应。结论兔口腔黏膜细胞与同种异体BAMG复合后,可成功用于尿道缺损的修复,构建组织工程化尿道。 展开更多
关键词 尿道 组织工程 口腔黏膜细胞 膀胱脱细胞基质
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脂肪干细胞复合膀胱脱细胞基质促进膀胱再生的实验研究 被引量:5
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作者 朱卫东 徐月敏 +2 位作者 冯超 傅强 宋鲁杰 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期111-116,共6页
目的探讨脂肪干细胞(adipose—derived stem cell,ADSC)在兔的组织工程膀胱重建中的应用。方法采用自体脂肪干细胞和膀胱脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)构建兔组织工程膀胱。应用酶消化法分离培养兔自体的ADSC... 目的探讨脂肪干细胞(adipose—derived stem cell,ADSC)在兔的组织工程膀胱重建中的应用。方法采用自体脂肪干细胞和膀胱脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)构建兔组织工程膀胱。应用酶消化法分离培养兔自体的ADSC,并进行流式细胞鉴定。对新鲜的兔膀胱组织进行脱细胞处理制得BAMG。将ADSC扩增后接种于BAMG表面并进行体外培养,获得组织工程膀胱。对24只雄性新西兰兔行40%~50%膀胱部分切除,分为实验组和对照组,每组12只。实验组采用自体培养的ADSC构建的组织工程膀胱对缺损膀胱进行修复,对照组采用单纯的BAMG进行修复。术后24周进行膀胱造影并取材观察组织修复再生情况。结果镜下观察ADSC贴壁后绝大多数为纺锤形,细胞之间以细丝拉网。流式细胞仪检测结果CD90、CD44、CD105、CD166、CD34表达均为阳性,CD106、CD45表达为阴性。ADSC种植于BAMG表面生长良好。修补24周后,对照组和实验组膀胱容量分别为术前的(69.33±5.05)%和(94.68±3.31)%。组织染色分析对照组显示上皮层正常,黏膜下纤维组织增生而肌层较薄;实验组则显示了与自体膀胱相似的正常的3层组织结构。结论采用ADSC和BAMG构建组织工程膀胱是理想的膀胱替代修补材料。 展开更多
关键词 组织工程 膀胱 干细胞 膀胱脱细胞基质
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兔膀胱脱细胞基质对人骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响 被引量:2
12
作者 谭云鹤 邢俊平 郭子宽 《中国临床研究》 CAS 2018年第5期589-592,共4页
目的研究兔膀胱脱细胞基质(BAMG)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖及分化能力的影响,并探讨其构建膀胱修复材料的可行性。方法采用正常人骨髓体外分离培养原代hBMSCs。用兔膀胱构建BAMG,制备BAMG浸泡液培养基,并以BAMG浸泡液培养基为... 目的研究兔膀胱脱细胞基质(BAMG)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖及分化能力的影响,并探讨其构建膀胱修复材料的可行性。方法采用正常人骨髓体外分离培养原代hBMSCs。用兔膀胱构建BAMG,制备BAMG浸泡液培养基,并以BAMG浸泡液培养基为基础配制成骨、成脂、成平滑肌分化的诱导剂。将hBMSCs分别用正常培养液、正常诱导液、BAMG浸泡液及BAMG诱导液培养。采用苏木素-伊红(HE)与Masson三色染色法进行组织形态鉴定。采用流式细胞术及活细胞荧光染料羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记法检测BAMG浸泡液培养基对hBMSCs的生长毒性;分别观察以BAMG浸泡液为基础的诱导剂对hBMSCs成骨、成脂、成平滑肌的分化能力的影响。结果成功构建BAMG标本,与未处理的膀胱组织相比,已去除绝大多数细胞核,组织结构更加疏松、多孔。BAMG浸泡液与正常培养基对hBMSCs增殖无差异。诱导后的hBMSCs仍能高效分化为成骨、成脂、成平滑肌细胞。结论 BAMG不影响hBMSCs的增殖和分化能力,可作为支架材料,应用于膀胱组织工程中。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 膀胱脱细胞基质 增殖 分化
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