荧光定量PCR检测膀胱癌患者尿沉淀细胞TWIST1基因启动子甲基化状态的临床价值

目的:评估尿沉淀细胞TWIST1基因启动子甲基化状态在膀胱癌诊断中的价值。方法 :用实时荧光定量PCR的方法,对50例临床确诊的膀胱癌患者、13例非肿瘤性尿路疾病患者、7例健康志愿者检测了尿沉淀细胞TWIST1基因启动子的甲基化状态;同时行尿脱落细胞学检查。结果:50例膀胱癌患者中尿脱落细胞TWIST1基因启动子甲基化阳性率为64.0%(32/50),对照组均未发现甲基化改变,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。TWIST1基因启动子甲基化率有随组织分期升高的趋势,但在不同分级、分期膀胱癌中的差异无显著性。实时荧光定量PCR法检测尿液中TWIST1基因启动子甲基化的敏感性和特异性分别为64.0%、100.0%。而尿脱落细胞学检查阳性率为48.0%(24/50),其敏感性和特异性分别为48.0%和100.0%。结论:尿脱落细胞TWIST1基因启动子的甲基化检测诊断膀胱癌敏感性和特异性均较高,且无创、无痛苦,可作为早期诊断膀胱癌的敏感指标。

实时荧光定量PCR检测CD44v8在膀胱及尿路上皮癌中的表达

目的探讨CD44v8在膀胱及尿路上皮癌的临床诊断价值。方法收集实验组患者膀胱及尿路上皮癌患者75例,采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）从病理和临床分期2个方面对CD44v8进行定量分析。对照组20例患者为正常膀胱黏膜组织。结果 CD44v8蛋白在对照组膀胱黏膜上皮无表达,拷贝数小于1×10^2拷贝/毫升。75例膀胱及尿路上皮癌患者阳性表达26例（34.7%）,CT值均小于35,基因拷贝数均大于1×10^4拷贝/毫升。阳性表达率与肿瘤病理分级、肿瘤分期（TNM）相关,与肿瘤复发和数量无相关性。结论 CD44v8可作为判断膀胱及尿路上皮癌分级、分期的参考指标,具有临床诊断意义。

实时荧光定量PCR检测CD44v2在膀胱及尿路上皮癌中的表达

目的探讨CD44变异体(CD44v)2在膀胱及尿路上皮癌中的表达及其在膀胱及尿路上皮癌诊断中的价值。方法选取膀胱及尿路上皮癌患者70例,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测,从病理分期和临床分期两个方面对患者癌组织标本进行CD44v2表达情况的分析。另外,收集20例正常膀胱黏膜组织标本作为对照。结果 CD44v2在正常膀胱黏膜上皮无阳性表达,拷贝数均小于1×102 copies/mL。在70例膀胱及尿路上皮癌组织中的阳性表达率为42.9%(30/70),Ct值均小于35,基因拷贝数均大于1×104 copies/mL。CD44v2的表达在膀胱及尿路上皮癌不同TNM分期和病理分级间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD44v2有助于膀胱及尿路上皮癌的早期评估。

尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)在人膀胱癌组织及膀胱癌细胞株中特异表达

UCA1(urothelial carcinoma antigen 1)为自主研发的1个尿路上皮癌基因.应用实时荧光定量PCR检测UCA1 mRNA在2种膀胱癌细胞系、11种非膀胱癌细胞系、18对膀胱癌组织和配对癌旁正常膀胱组织中的表达,对表达差异进行统计学分析.结果显示,UCA1在2种膀胱癌细胞系中显著高表达,而在其他11种非膀胱癌细胞系中表达水平很低或者不表达,二者表达差异达14～24 812倍,差异有统计学意义(P<0.001);在18例膀胱癌组织中,UCA1的平均表达水平是癌旁正常膀胱组织的12.4倍,表达差异有统计学意义(P<0.001).实时荧光定量PCR使UCA1在膀胱癌细胞系及组织中的特异性高表达得以量化.实验结果明确了UCA1作为潜在的肿瘤标记物在膀胱癌临床诊断中的意义,为定量检测尿液UCA1表达并确定诊断膀胱癌的参考值打下基础.

膀胱癌受体酪氨酸激酶基因及蛋白的表达

目的检测膀胱癌受体酪氨酸激酶(RTKs)mRNA和蛋白的表达,探讨有前景的膀胱癌生物标志物及可能的药物靶点。方法分别采用实时定量PCR芯片技术及蛋白芯片技术,检测浸润性膀胱尿路上皮癌组织中RTKs mRNA及蛋白的表达,以正常膀胱组织作为对照。使用生物信息学方法对检测结果进行比较分析。结果 RTKs家族中的TG-FA、STAB1、SERPINE1、ANGPT2、SPINK5、ANGPTL1、PROK1、MDK、CXCL9、GRN、RUNX1、VEGFA、TGFB1在膀胱癌组织中的表达显著上调,EDIL3、PTN、CCL2、PDGFD、FGF13、KITLG、FGF2、SERPINF1、TNF显著下调。ALK、Btk、EphB2、ErbB4、PDGFR-α、ROS、Tie-2、Tyk2、VEGFR3蛋白在膀胱癌组织中高表达,FRK、Fyn、IGF-IR、InsulinR、Itk、JAK1、JAK3、LCK蛋白低表达。结论靶向血管内皮生长因子/血小板衍生生长因子药物可能在治疗膀胱癌方面发挥积极作用。

膀胱尿路上皮癌中ATF3的表达及意义

目的探讨膀胱尿路上皮癌中转录因子ATF3的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测32例膀胱癌组织和14例正常膀胱粘膜中ATF3 mRNA和ATF3蛋白的表达,分析其表达与肿瘤病理分级、临床分期的关系。结果膀胱癌组织中ATF3 mRNA相对表达量稍高于正常膀胱粘膜组织,浸润膀胱癌组织中ATF3 mRNA相对表达量稍高于浅表膀胱癌组织,但差别均无显著性。ATF3蛋白在膀胱癌组织和正常膀胱粘膜中的阳性表达率分别为93.7%(30/32)、21.4%(3/14),差异有显著性。结论ATF3表达参与了膀胱尿路上皮癌的发病过程,进一步研究其功能有可能揭示膀胱癌的发病机制。

E2F3在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的:通过检测E2F3mRNA在膀胱移行细胞癌组织及正常膀胱移行上皮组织中的表达,探讨其与膀胱移行细胞癌发生发展的关系。方法:通过RT-PCR方法检测34例膀胱移行细胞癌组织及19例正常膀胱移行上皮组织中E2F3mRNA的表达情况。结果:E2F3mRNA在膀胱移行细胞癌及正常膀胱移行上皮组织中的阳性表达率分别为47.1%(16/34)和0%(0/19)。膀胱移行细胞癌组织中E2F3mRNA的表达率明显高于正常膀胱移行上皮组织(P<0.005)。其中膀胱移行细胞癌组织中E2F3mR-NA的表达率随肿瘤分级、分期增高而相应增高(P<0.05)。结论:E2F3基因可能通过参与细胞周期调控,在膀胱移行细胞癌的发生发展中起到促进作用。

膀胱尿路上皮癌中miRNA-300的差异表达

目的探讨miRNA-300在膀胱尿路上皮癌中的差异表达与其生物学行为的关系。方法常规提取30例膀胱尿路上皮癌及5例正常膀胱黏膜组织中总RNA,应用荧光定量RT-PCR方法检测标本中miRNA-300的表达情况。结果与正常膀胱黏膜上皮组织相比,膀胱尿路上皮癌中miRNA-300表达明显下调(P<0.01)。结论 miRNA-300的差异表达极可能为促进膀胱尿路上皮癌的发生及发展因素之一。

TNFAIP3 mRNA及其蛋白在尿路上皮乳头状癌组织中的表达与临床意义

目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)在膀胱尿路上皮乳头状癌(UPC)组织中的表达及临床意义。方法用实时荧光定量PCR方法和免疫组化Envision法分别检测62例UPC组织及20例正常膀胱组织标本中TNFAIP3 mRNA和蛋白的表达情况,ROC曲线对TNFAIP3 mRNA诊断UPC的价值进行分析,并结合患者的临床资料分析TNFAIP3的表达与UPC临床参数的关系。结果 TNFAIP3 mRNA及其蛋白在UPC中的表达均高于正常组织(P均【0.05)。TNFAIP3 mRNA ROC曲线下面积(AUC)为0.811,当TNFAIP3 mRNA/GAPDH mRNA×10~4的cutoff为0.89时,TNFAIP3 mRNA诊断UPC的敏感度和特异度分别为72.6%和85.0%;另外,TNFAIP3 mRNA及其蛋白的表达与UPC的病理分级,肿瘤浸润及淋巴结转移密切相关(P均【0.05),但与患者的性别,年龄无关(P均】0.05)。结论 TNFAIP3 mRNA及其蛋白在膀胱UPC组织中表达上调,并与肿瘤的分级,浸润和转移相关,提示其可能参与了膀胱肿瘤的发生和发展,是有价值的膀胱肿瘤新的标记物。

定量检测膀胱尿路上皮癌患者手术前后外周血中survivin mRNA的临床意义

目的:研究膀胱移行细胞癌患者手术前后全血中survivin mRNA表达变化及其临床意义。方法:采用qRT-PCR检测47名非肌层浸润膀胱癌患者与25名正常人群手术前后外周血中survivin mRNA表达量并构建受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线。结果:术前膀胱癌患者survivin mRNA表达水平是正常人群的4.06倍(P<0.0 5),经ROC曲线分析,区别膀胱癌患者与正常人群的sur vivin表达临界值为1.4×10^(-2),患者组术后各时间点survivin表达水平明显低于术前水平(P<0.05),survivin mRNA水平高于临界值的术后患者较低于临界值的患者复发率高(P<0.05)。结论:qRT-PCR可简单敏感地检测全血中survivin mRNA水平,survivin可作为用于膀胱癌诊断及复发判断的标志物。

hTERTmRNA在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨端粒酶逆转录酶 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTERT)mRNA的表达在膀胱移行细胞癌诊断中的价值及临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR检测 5 5例膀胱移行细胞癌组织、2 8例癌旁组织及 9例正常膀胱组织中hTERTmRNA的表达情况。结合临床资料分析评价其表达与膀胱癌临床生物学行为的关系。结果 5 5例膀胱移行细胞癌中hTERTmRNA的阳性率为 92 .7% (5 1 5 5 ) ,2 8例癌旁组织中hTERTmRNA的阳性率为 17.9% (5 2 8) ,9例正常膀胱组织中没有表达。hTERTmRNA的表达与患者的年龄、性别、肿瘤数目、大小及病理分级无关 (P >0 .0 5 ) ,不同的临床分期与肿瘤发病情况间的差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论 hTERT mRNA的表达与膀胱移行细胞癌组织的恶性行为密切相关 ,提示hTERT在膀胱移行细胞癌的发生及恶化过程中或许发挥重要作用。hTERTmRNA是一种有价值的肿瘤分子标记物 ,运用实时荧光定量PCR对其表达的检测有助于膀胱移行细胞癌的早期诊断。

吲哚胺2,3-二氧化酶在膀胱尿路上皮癌中表达及意义

目的探讨吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义。方法所有新鲜标本作荧光定量PCR,石蜡标本采用SP法进行免疫组化染色检测IDO的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 IDO m RNA与IDO蛋白在正常膀胱组织中表达明显低于膀胱尿路上皮癌组织中表达,差异有统计学意义。在膀胱尿路上皮癌组织IDO表达强度与患者年龄、性别无关,与组织学分类、组织分级及UICC分期有相关性:浸润型与非浸润型之间差异有统计学意义(χ2=5.60,P=0.018);随着组织分级增高IDO阳性表达率增高,差异有统计学意义(χ2=20.27,P=0.000);随着UICC分期增高IDO阳性表达率增高,差异有统计学意义(χ2=12.08,P=0.007)。IDO m RNA表达与组织分级及UICC分期有相关,随着组织分级及UICC分期增高,表达水平增高,差异有统计学意义(t=2.73,P=0.011;t=4.96,P=0.000)。结论 IDO表达与膀胱尿路上皮癌预后不良相关,提示IDO可能成为膀胱尿路上皮癌预后的预测因子及治疗靶点。

膀胱尿路上皮癌中DNMT1的表达及其临床意义

目的研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)在膀胱尿路上皮癌(BUC)中的表达,探讨DNMT1与膀胱癌生物学行为之间的关系。方法采用RT-PCR法和Western-blot技术,检测60例膀胱尿路上皮癌及12例正常膀胱黏膜组织中DNMT1的表达;并结合临床资料进行分析。结果①膀胱癌组织中DNMT1蛋白和mRNA的表达水平分别为0.628±0.245和0.774±0.083,显著高于正常膀胱黏膜组织的0.126±0.028和0.175±0.101(P=0.000);②DNMT1在膀胱癌中的表达水平与肿瘤的临床分期、分化程度、有无淋巴结转移等生物学行为显著相关。结论 DNMT1在膀胱尿路上皮癌中过度表达,在膀胱癌的发生发展中起重要作用。

动态检测尿Livin mRNA表达对膀胱癌早期诊断的临床价值

目的动态检测膀胱癌患者手术前、后尿Livin mRNA表达情况,探讨其对膀胱癌早期诊断的临床价值。方法采用实时荧光定量PCR方法检测30例膀胱移行细胞癌患者术前、术后1周、1个月、3个月、6个月至18个月及30例非泌尿系统肿瘤患者及30例健康志愿者尿Livin mRNA表达情况,并结合临床资料进行分析。结果 Livin mRNA在30例病例组术前尿液中出现高表达,相对拷贝数为(96.33±35.79)/ul,且随着肿瘤临床分期、分级由低到高,其表达水平亦有随之增加的趋势;30例对照组中有2例出现较高表达,相对拷贝数分别为43.17和47.52,其余为低表达,相对拷贝数为(16.25±7.81)/ul;30例正常组为低表达,相对拷贝数为13.74±1.57。病例组术前尿Livin mRNA表达水平明显高于对照组和正常组,其差异有统计学意义(P <0.05);术后1周(27.35±2.21)/ul较术前显著下降(P <0.05);术后1个月(16.72±2.45)/ul、3个月(15.54±2.14)/ul、6个月(14.33±1.71)/ul与对照组和正常组相比差异无统计学意义(P> 0.05)。随访至术后18个月,5例复发者再次手术前(98.27±26.55)/ul与初次术后6个月相比差异有统计学意义(P <0.05)。结论动态检测尿Livin mRNA表达的高特异性、高敏感性,可作为膀胱癌早期诊断的一个无创性指标。

成纤维细胞生长因子受体突变与膀胱尿路上皮癌的关系

①目的探讨膀胱尿路上皮癌中成纤维细胞生长因子受体(FGFR3)突变分布特点与肿瘤病理分期分级之间的关系。②方法对56例膀胱尿路上皮癌应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测FGFR3基因突变,结合临床随访资料进行分析。③结果38例pTa期膀胱尿路上皮癌中有26例发生了FGFR3突变,8例pT1期中有2例发生了FGFR3突变,而在5例高分期肿瘤中未发现一例突变;在为期1年的随访中,28例FGFR3突变肿瘤中仅有5例发现复发,对应的23例非突变患者中13例发生了复发。按分期比较时,FGFR3突变是一个有力预测复发的因素。④结论FGFR3突变在低分期膀胱尿路上皮癌中突变率高,预期复发率低。

膀胱尿路上皮癌IDO和Bin1表达临床意义研究

目的探讨膀胱尿路上皮癌组织吲哚胺2,3一二氧化酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）和Bin1蛋白（bridging intergrator protein-1,Bin1）表达及意义。方法收集2007-01-12-2011-07-31昆明医科大学第三附属医院手术切除后石蜡标本84例和同期新鲜标本50例,同期远离癌组织的非肿瘤性膀胱组织为正常膀胱组织共22例,所有新鲜标本采用实时荧光定量PCR检测IDO表达,石蜡标本采用SP法进行免疫组化染色检测IDO和Bin1的表达,并分析其与临床病理特征的相关性。结果膀胱尿路上皮癌组织中IDO阳性表达率为57.14%,Bin1阳性表达率为46.43%。IDO在浸润型膀胱尿路上皮癌组织中表达率明显高于非浸润型,χ2=5.600,P=0.018;随着膀胱尿路上皮癌组织分级（χ2=20.268,P〈0.001）及TNM分期（χ2=12.075,P=0.007）增高,IDO阳性表达率增高;Bin1在浸润型膀胱尿路上皮癌组织中表达明显低于非浸润型（χ2=7.685,P=0.007）,随着膀胱尿路上皮癌组织分级（χ2=15.817,P〈0.001）及TNM分期（χ2=11.104,P=0.010）增高,Bin1阳性表达率降低,差异有统计学意义。膀胱尿路上皮癌组织中IDO表达强度与Bin1表达强度呈负相关（r=-0.306,P=0.003）,与组织学分类（r=0.258,P=0.018）、组织分级（r=0.491,P〈0.001）及TNM分期（r=0.365,P=0.001）呈正相关。Bin1表达强度与组织学分类（r=-0.302,P=0.005）、组织分级（r=-0.411,P〈0.001）及TNM分期（r=-0.302,P=0.005）呈负相关。实时荧光定量PCR检测结果显示,IDO mRNA在膀胱尿路上皮癌组织中的平均表达水平为7.696 1±1.745 28,明显高于正常膀胱组织的6.397 0±1.205 17,t=2.367,P=0.023;Ta和T1期IDO mRNA在膀胱尿路上皮癌组织中的平均表达水平为6.803 4±1.567 53,明显低于T2~T4期的9.183 8±0.690 32,t=4.955,P〈0.001;IDO mRNA在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级膀胱尿路上皮癌组织中的平均表达水平分别为7.058 7±1.771 57、7.9342±1.530 57和9.290 7±0.574 59,差异有统计学意义,F=4.675,P=0.017。结论 IDO高表达和Bin1低表达或表达缺失与膀胱尿路上皮癌病变进展及预后不良相关,提示IDO和Bin1可能成为膀胱尿路上皮癌患者的预后因子及治疗靶点。

膀胱移行上皮癌患者尿及癌组织中Survivin表达的临床意义

目的:探讨Survivin对膀胱癌早期发现、常规筛选且无损伤的方法,研究其与肿瘤病理分级(期)的相关性。方法:留取53例膀胱移行上皮癌、20例泌尿系其他疾病、10例健康志愿者新鲜中段晨尿,同上53例术后癌组织。利用巢式RT-PCR、实时定量PCR技术检测Survivin的表达,同时行尿脱落细胞学及膀胱镜病检。结果:53例膀胱癌患者尿及癌组织中Su rvivin均有表达,敏感性为100%,特异性为90%。与尿脱落细胞学敏感性比较两者差异有统计学意义(P<0.05),与膀胱镜检比较差异无统计学意义。三种方法特异性比较差异无统计学意义(P>0.05)。癌组织中Survivin的量与肿瘤病理分级(期)正相关(P<0.01)。结论:检测尿脱落细胞中Survivin的表达有望成为临床诊断、筛检膀胱癌的较可靠方法。Survivin在膀胱的演进过程中可能起重要作用,可望作为检测膀胱癌恶化进展的指标。

膀胱尿路上皮癌中LRIG3基因的表达及其临床意义

目的:探讨富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样多肽3(LRIG3)基因与膀胱尿路上皮癌(BUC)生物学行为的关系。方法:采用免疫组织化学SP法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测64例膀胱尿路上皮癌组织和12例正常膀胱黏膜中LRIG3蛋白及mRNA的表达情况,并结合临床资料进行分析。结果:膀胱癌组织中LRIG3蛋白和mRNA的表达水平显著低于正常膀胱黏膜组织,且分级和分期越高,LRIG3蛋白和mRNA的表达水平越低。结论:LRIG3基因在膀胱癌组织中存在表达缺失和低表达,提示LRIG3基因在膀胱癌的发生发展中可能具有抑癌基因的作用,有可能成为肿瘤基因治疗的又一靶点。

尿路上皮癌抗原1在子宫内膜异位症患者在位内膜中的表达及意义

目的检测子宫内膜异位症患者在位内膜中lncRNA尿路上皮癌抗原1(UCA1)的表达情况,探讨其在子宫内膜异位症病因学中的意义。方法选取2015年3-11月在中国医科大学附属盛京医院经病理证实为子宫内膜异位症患者的在位内膜标本30例(其中分泌期13例,增生期17例)为实验组,正常子宫内膜标本20例(分泌期7例,增生期13例)为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测两组子宫内膜组织中UCA1的表达。结果实验组在位内膜、增生期内膜和分泌期内膜中UCA1相对表达量明显高于相同时期对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。而两组组内增生期与分泌期的子宫内膜中UCA1的相对表达量比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论在位内膜中UCA1基因的高表达与子宫内膜异位症密切相关,可能参与子宫内膜异位症的发生发展。UCA1的表达水平可能不受内膜月经周期变化的影响。

KLF4、KLF6在人膀胱移行上皮癌组织中的表达及临床意义

目的:观察KLF4、KLF6在人膀胱移行上皮癌组织中的表达,并探讨其对膀胱癌发生、发展的影响。方法:采用实时定量荧光PCR技术检测49例膀胱癌手术切除标本癌组织与25例正常膀胱上皮组织内KLF4、KLF6mRNA的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系,采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果:实时定量荧光PCR结果显示KLF4在膀胱移行上皮癌组织中的相对含量为(0.218±0.046),在膀胱正常上皮组织中的相对含量为(0.311±0.056),二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。KLF6在膀胱移行上皮癌组织中的相对含量为(0.198±0.038),在膀胱正常上皮组织中的相对含量为(0.285±0.043),差异有统计学意义(P<0.05)。膀胱移行上皮癌组织中,KLF4与肿瘤的组织学分级、TNM分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05),与患者的性别、年龄无关(P>0.05);而KLF6表达与肿瘤的TNM分期有关(P<0.05),与肿瘤组织学分级、淋巴结转移及患者的年龄性别均无关(P>0.05)。结论:KLF4和KLF6表达降低可能与膀胱移行上皮癌的发生和浸润密切相关,通过干预KLF4和KLF6的活性可能成为治疗膀胱移行上皮癌的新靶点。