犬红细胞膜仿生纳米载体的制备和体外毒性及靶向初探

为了提高纳米颗粒的安全性和靶向性,试验采用低渗处理法制备犬红细胞膜(RBCM),双乳法制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒(BLANK-PLGA),并用脂质体挤出器挤出法制备犬红细胞膜囊泡(RBCM-NVE)和犬红细胞膜仿生纳米载体(PLGA-RBCM);采用透射电镜、动态光散射技术对不同纳米颗粒的结构、大小和电位进行表征鉴定;通过稳定性试验考察不同纳米颗粒的粒径及聚集性变化;采用SDS-PAGE和Western-blot法验证挤出前后细胞CD47膜蛋白表达情况;通过犬乳腺肿瘤细胞(CIPp)摄取BLANK-PLGA和PLGA-RBCM研究纳米颗粒的同源靶向性;通过体外试验探究BLANK-PLGA和RBCM-NVE纳米颗粒的细胞毒性。结果表明:BLANK-PLGA呈球形结构,RBCM-NVE呈杯状囊泡结构,PLGA-RBCM呈明显的“核-壳”结构;BLANK-PLGA平均粒径为(305.17±2.59)nm,聚合物分散性指数(polymer dispersity index, PDI)为0.10±0.01,平均电位为(-3.86±0.59)mV;RBCM-NVE平均粒径为(200.50±0.26)nm, PDI为0.22±0.02,平均电位为(-9.60±0.88)mV;PLGA-RBCM平均粒径为(274.16±2.11)nm, PDI为0.18±0.03,平均电位为(-6.03±0.64)mV;第0~25天,在PBS中PLGA-RBCM粒径保持在300 nm以下,PDI为0.2左右,随着时间推移,BLANK-PLGA的粒径与PDI均明显增大,粒径大小不均;BLANK-PLGA和PLGA-RBCM在胎牛血清中4 h内吸光度没有较大变化;RBCM在通过脂质体挤出器挤出前后均保持相同的蛋白条带并且均表达CD47膜蛋白;CIPp细胞对PLGA-RBCM的摄取量极显著多于对BLANK-PLGA(P<0.01);BLANK-PLGA和RBCM-NVE与CIPp细胞共孵育6,12,24 h后细胞活力差异不显著(P>0.05)。说明成功制备的PLGA-RBCM具有良好的稳定性、安全性及对同源细胞的靶向性。

PEG-PBLG纳米胶束体外释药及药动学和分布的研究

目的初步探讨PEG-PBLC纳米颗粒包裹药物的体外释放特性及体内药动学行为和分布。方法用阴离子聚合法合成聚合物;超微透析法制备胶束;透射电镜观察胶束的形态;制备3H-孕酮/PEG-PBLC纳米胶束考察药物从药库中释放特性以及胶束在兔体内药动学行为和各组织的分布。结果纳米胶束呈球形或椭圆形,其在体外释放符合纳米载药材料的释放模型, 药物在1 h产生突释,缓释可延长至48 h,48 h后仍有1/6药物被纳米胶束包裹。PEG-PBLC纳米胶束包裹药物后减少药物被肝脏的代谢,延长药物在血浆中的循环时间,增加药物向组织的转运。3H-孕酮/PEG-PBLC纳米胶束进入体内后在组织中的分布以脾脏、胃最多(分别为25.8%和20.0%),其次为小肠和淋巴结,肝脏最少,表明胶束能逃避肝脏的吸附并对胃可能具有靶向性。结论PEG-PBLC可成为易被肝脏代谢半衰期短的药物的优良新型的药物载体,具有良好的应用前景。

纤维素/甲壳素共混膜的结构表征与抗凝血性能

以 6wt %NaOH 4wt%尿素为纤维素的新溶剂 ,采用溶液共混法制备出纤维素 甲壳素共混膜 ,为甲壳素在碱性溶液中制膜提供了新的方法 .红外光谱、X 射线衍射、扫描电镜和力学性能、抗凝血性能测试结果表明 ,共混膜中甲壳素含量低于 4 0wt%时 ,纤维素与甲壳素分子间具有良好的相容性 ;在纤维素中引入适量甲壳素可提高共混膜的抗张强度 ,共混膜的干、湿态抗张强度在甲壳素含量 10wt%时最大 ,其值分别为 89 1MPa和 4 3 7MPa ,比纯态纤维素膜的干、湿态抗张强度分别提高了 6 7%和 11 5 % ;甲壳素的引入可明显降低血小板在共混膜表面的粘附、凝聚与变性 ,增大共混膜的抗凝血参数 ,甲壳素含量达到 5 0wt%时 。

“优鲈1号”大口黑鲈血细胞的形态特征及吞噬功能的研究

用Wright's染色及细胞化学方法,对"优鲈1号"大口黑鲈(Micropterus salmoides)外周血细胞形态特征进行观察,并通过吞噬实验分析其血细胞的免疫功能。结果表明血细胞可分为红细胞和白细胞,白细胞包括粒细胞(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型粒细胞)、单核细胞、淋巴细胞及血栓细胞;其中红细胞数最多,白细胞较少;白细胞中,淋巴细胞比例最大(62.73%)。通过过碘酸-雪夫氏反应(PAS)、苏丹黑B(SBB)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化物酶(POX)、酚氧化酶(PO)染色,红细胞染色均呈阴性,而白细胞除AKP、POX染色外,染色均呈阳性,且不同白细胞阳性染色程度不一致,其中血栓细胞染色均较强烈。吞噬实验表明,红细胞具有吞噬功能,吞噬率为(16.17±1.08)%;粒细胞和血栓细胞具黏附能力,且血栓细胞能形成黏附花环,这可能与血栓细胞形态多样性及糖原、脂类、ACP和PO有关。

纳豆+补气活血方药对气虚血瘀大鼠模型表征和组织血流量影响

目的 ：观察由纳豆和补气活血方药对气虚血瘀证大鼠表征和不同部位组织血流量的影响。方法 ：通过饥饿＋低温力竭游泳的方法复制大鼠气虚血瘀模型,将70只SPF级Wistar大鼠随机分为空白对照组,气虚血瘀模型组,阳性药组（14.0 g/kg）,纳豆组（1.875 g/kg）,纳豆＋补气活血方药高、中、低剂量组[（1.875＋12.5）、（1.875＋6.25）、（1.875＋3.175）g/kg],每组10只,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,阳性药组给予补养还五汤,纳豆＋补气活血方药高、中、低剂量组给予相应剂量纳豆＋补气活血方药,纳豆组给予纳豆冲剂灌胃,除空白组外,其余各组边造模边给药,连续60 d后,分别根据拟定的标准对各组大鼠表征进行观察评分,将大鼠麻醉后,用激光多普勒血流仪测定大鼠不同组织部位血流量变化情况,之后取材备用。结果 ：与空白组比较,模型组大鼠表征舌质由淡红转化为黯紫,精神状态不佳,便溏,毛发枯黄,易脱落,尾部和肾部的组织血流量显著下降（P〈0.01）,但肝部血流量显著升高（P〈0.01）。给药后,纳豆＋补气活血方药高、中剂量能显著改善大鼠精神不佳、舌质黯紫等表征（P〈0.05）,纳豆组、纳豆＋补气活血方药高、中、低剂量组对可以显著升高尾部、肾部血流量（P〈0.01）,纳豆组、纳豆＋补气活血方药高、低剂量组可以显著降低肝部血流量（P〈0.01）。结论 ：纳豆＋补气活血方药可以有效改善气虚血瘀证大鼠各部位组织血流量的异常,提示其能对气虚血瘀证大鼠有补气活血功效,纳豆对肝脏起到一定的保护作用。

复合酶水解法从罗非鱼血液中提取血红素及其性质研究

为更加科学有效地利用中国丰富的罗非鱼血液资源,本文建立了一套经复合酶水解、再通过酸沉淀和真空冷冻干燥等步骤,从罗非鱼血液中提取血红素的新工艺。在此条件下,血红素提取率达到80.9%,产品纯度为28.2%,同时对所得产品的光谱特征、分子量大小、铁离子价态和外观性状等物理性质进行了研究。结果分析表明:产品特征波长为385 nm,特征成分为血红素,产品中约20%的血红素以与大分子肽链结合的形式存在,相对分子量在5~10 ku范围内,而约75%的血红素则可能以单体或者与小分子肽链结合的形式存在,相对分子量小于5 ku;产品中二价铁残留率为37%,在提取过程中应加强二价铁的保护,相关研究结果可以为罗非鱼血液中血红素的开发应用提供重要的理论依据和技术支撑。

福州地区全血献血者感染性指标检测不合格人群特征分析

目的分析福州地区全血献血者血液检测感染性指标不合格人群特性,以期识别低风险人群,为制定献血者招募策略提供理论依据。方法回顾性分析本地区2012—2016年364 002份全血献血者血液检测标本中感染性指标,包括HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP、NAT不合格的人群特性,采用χ2检验和多因素Logistic回归分析进行统计学分析。结果 1） 2012—2016年全血献血者血液HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP、NAT阳性率和总不合格率分别为0. 98%、0. 18%、0. 12%、0. 63%、1. 03%、2. 20%,其中HBsAg、抗-TP、NAT阳性率和总不合格率呈逐年下降趋势; 2）女性HBsAg、NAT阳性率和总不合格率低于男性; HBsAg、抗-TP、NAT阳性率和总不合格率4项指标,18—25岁低于除≥56岁外其它年龄段献血者,高校献血低于其它献血点;不同性别、年龄段、献血地点来源血液抗-HCV、抗-HIV阳性率差异无统计学意义（P〉0. 05）;重复献血血液所有检测指标阳性率均低于初次献血,总不合格率（0. 90%）显著低于初次献血（3. 11%）。结论本地区献血者中女性、18—25岁、高校学生是相对低风险献血群体,而自愿无偿定期献血者血液感染发病率最低,是最安全献血人群,应着重做好献血者保留工作,鼓励更多适宜的献血者成为定期献血者,降低输血传播感染风险。

气虚血瘀证大鼠现代医学表征及免疫功能初探

目的:初步探讨气虚血瘀大鼠模型免疫学功能的变化。方法:复制大鼠气虚血瘀模型,动态监测动物表征及血液流变性、T淋巴细胞转化、T细胞亚型计数、肾上腺重量和肾上腺指数。结果:模型动物表征与气虚血瘀证临床表现一致;从造模中期开始出现血液黏、凝、聚状态(纤维蛋白原含量、红细胞聚集性增加和红细胞电泳时间延长);外周血T细胞亚型计数以CD8+T的减少更为显著;3H-TdR掺入量显著的降低;肾上腺皮质功能先亢进而后又转入了抑制状态。结论:气虚血瘀证动态演变过程中始终存在以T细胞数量、T细胞转化能力以及HPA轴免疫调节功能异常为主的免疫功能失衡。

乙肝疫苗免疫献血者人群HBV感染的分子生物学特性研究

目的探讨乙肝疫苗免疫献血者人群中HBV感染的分子生物学特性及其HBsAg＋／抗．HBs＋发生机制。方法从13504（人）份无偿献血者标本中，收集HBsAg＋／HBVDNA＋者58例，应用巢式．聚合酶链反应技术获得其中35例Pre—S／S基因片段并测序、基因分型；采用荧光定量聚合酶链反应技术测定58例阳性标本的病毒载量，通过咨询随访，确认其中的接种乙肝疫苗后HBsAg＋／抗-HBs＋／抗-HBc＋者，并与对应基因型的HBsAg＋／抗。HBs-／抗HBc＋毒株Pre—S／S序列比对，分析其变异特征。结果深圳地区无偿献血者HBV检出率为0．43％（58／13504），HBV感染率约为1．90％（26／13707）；35例Pre—S／S区扩增成功的标本基因型B、C构成比分别为42．86％（15／35）、57．14％（20／35），其中5例HBsAg＋／抗．HBs＋／抗-HBc＋标本均为基因曰型，抗-HBs滴度（10．45—88．76）（中位数21．54）mlU／mL，病毒载量为（3．8～5．5）X10’（中位数6．7x10。）IU／mL。HBsAg＋／抗一HBs＋组除了Pre—S1基因区，Pre．S／S、Pre．S2、S、MHRl、MHR2、a抗原决定簇基因的氨基酸置换率均明显高于HBsAg＋／抗HBs一组各区（P〈0．05），以主要亲水1区（MHRl）和Pre．s2区的氨基酸变异率最高（3．11％、4．36％），MHRl区出现少见的N40S、P62L变异，在主要亲水2区（MHR2）有60％（3／5）标本为高度保守，20％（1／5）标本在整个Pre-SIS区没发生变异。未发现a抗原决定簇常见G145R变异。结论接种乙肝疫苗后出现HBsAg＋／抗-HBs＋的机制与Pre-S／S区变异，特别是MHRl、Pre．s2区变异增多有重要关联，基因B型的HBVDNA可能在乙肝疫苗免疫压力下更易发生变异而导致抗-HBs与HBsAg不能中和。

鸡血多肽亚铁螯合物的制备工艺优化及结构表征

为了提高鸡血的产品附加值,制备易被人体消化吸收的铁补充剂,在单因素试验的基础上,采用响应面试验对鸡血多肽和FeCl2·4H2O的螯合工艺进行优化,并通过紫外光谱、荧光光谱、扫描电镜、红外光谱等表征分析,比较鸡血多肽与FeCl2·4H2O螯合前后的结构变化。结果表明:最佳螯合参数为鸡血多肽与铁的质量比6.3∶1.0,螯合时间30 min, pH值5.1,在此条件下螯合率达到73.27%;紫外光谱和荧光光谱分析结果表明,螯合反应产生了区别于多肽的新型螯合物;氨基酸组成分析结果表明,鸡血多肽与亚铁螯合后,螯合物中天冬氨酸、组氨酸、谷氨酸含量显著增加;扫描电镜结果显示,鸡血多肽为表面光滑的片状结构,鸡血多肽亚铁螯合物为表面粗糙的颗粒结构;红外光谱分析结果表明,鸡血多肽中的羧基、酰胺基参与了螯合反应。

血虚寒凝型糖尿病周围神经病变的表征特点

目的初步揭示血虚寒凝型糖尿病周围神经病变(DPN)的表征。目的将348例DPN患者根据证素辨证系统分为血虚寒凝型与非血虚寒凝型,其中,血虚寒凝型患者再分别分为夹痰组与非夹痰组、夹瘀组与非夹瘀组。分别记录其性别、年龄、体质量指数(BMI)、血压、糖尿病家族史、吸烟史、饮酒史,评估其并发症数量;检测空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、三酰甘油(TG)、尿酸(UA);测定运动神经传导速度;评定临床症状积分及Toronto临床评分。结果与非血虚寒凝型患者相比,血虚寒凝组女性构成比、HbA1c较高,吸烟史占比、舒张压较低,病程较长(P<0.05);同时,血虚寒凝组正中神经传导速度低于非血虚寒凝组(P<0.05);在Toronto评分方面,血虚寒凝组显著高于非血虚寒凝组(P<0.05)。血虚寒凝型夹痰组饮酒史占比、BMI、HbA1c、TC、TG、LDL-C及临床症状积分显著高于血虚寒凝型非夹痰组(P<0.05)。与血虚寒凝型非夹瘀组比较,血虚寒凝型夹瘀组吸烟史占比、SBP、HbA1c、TC、LDL-C、临床症状积分、Toronto评分明显较高(P<0.05);夹瘀组者病程较长且并发症数量较多(P<0.05);血虚寒凝型夹瘀组正中神经、尺神经的运动神经传导速度低于非夹瘀组(P<0.05)。结论与非血虚寒凝型患者相比,血虚寒凝型患者的主要表征为女性构成比、HbA1c、Toronto评分高,病程较长,舒张压(DBP)、正中神经传导速度低。血虚寒凝型夹痰者以饮酒史占比、BMI、HbA1c、TC、LDL-C、HDL-C、临床症积分高为其表征。血虚寒凝型夹瘀者的表征则为吸烟史占比、收缩压(SBP)、HbA1c、TC、LDL-C、临床症状积分、Toronto评分高,病程长、并发症数量多,正中神经、尺神经神经传导速度低。

不合格血液侵权的法律责任探讨

血液的定性将影响其归责原则及其适用。血液是特殊的医疗物质,较之其它产品有众多不同点,很难通过现在的法律条文来保护各方利益,针对当前法律对不合格血液侵权规定较为模糊,建议可以通过借鉴国外,建立补救机制来予以保障,并且完善弥补我国当前法律存在的漏洞和歧义,使得各方利益得到切实的维护。

中华按蚊八个羧肽酶基因的鉴定及其与吸血餐相关的表达分析（英文）

【目的】本研究旨在鉴定中华按蚊Anopheles sinensis 8个消化型羧肽酶基因,并分析这些羧肽酶基因在血餐前后的表达模式。【方法】通过生物信息学方法分析中华按蚊8个羧肽酶基因的特征,采用半定量PCR或定量PCR(qRT-PCR)方法分别分析这些基因在中华按蚊不同发育时期不同组织和在取食血液前后中华按蚊雌成虫中肠中的表达情况。【结果】通过生物信息学分析发现,8个羧肽酶基因中,6个编码羧肽酶A(AsCPA-I^AsCPA-VI),2个编码羧肽酶B(AsCPB-I和AsCPB-II)。表达分析发现,只有AsCPA-V在中华按蚊4龄幼虫中肠和中肠外组织(仅去掉中肠的虫体)中表达,可能为幼虫特异性表达的基因,其余7个羧肽酶基因既在幼虫期表达又在成虫期表达。取食血液后,AsCPA-I,AsCPA-II,AsCPA-III,AsCPA-IV,AsCPA-VI,AsCPB-I和AsCPB-II在中华按蚊雌成虫中肠中的表达明显受到血液的影响,但表达模式不一样,说明血液蛋白的消化是由多个基因协同作用的复杂生理过程。其中,AsCPA-I,AsCPA-III,AsCPA-IV,AsCPA-VI和AsCPB-II在取食血液后表达上调,且都在吸血后的24 h达到表达高峰。尤其是AsCPA-VI在吸血后24 h表达上调了约418倍,AsCPB-II上调了40倍,可能与血液蛋白的消化有关。而AsCPA-II和AsCPB-I基因的表达水平在中华按蚊取食血液后显著下调。【结论】本研究对中华按蚊8个消化型羧肽酶基因进行了鉴定和表达分析。AsCPA-I,AsCPA-III,AsCPA-IV,AsCPA-VI和AsCPB-II可能参与血液蛋白的消化,尤其是AsCPA-VI和AsCPB-II可能起着更为重要的作用。研究结果为深入剖析中华按蚊血液蛋白消化的分子机理奠定了基础。

LPS联合烟熏致COPD大鼠模型的证候判定

目的从大鼠宏观表征定量化分析入手,以"因脉证治"为探索思路,分析LPS联合烟熏造成大鼠慢性阻塞性肺疾病的证候归属。方法将SD大鼠随机分为空白组和模型组。模型组采用LPS联合烟熏造模,通过病理、血气判断其COPD病理状态,记录造模完成后大鼠宏观表征变化并将数据定量化、四诊合参其证候归属。结果模型组大鼠平静及游泳后呼吸频率加快;体重减轻且增幅小;力竭游泳时间距离缩短、活动能力不足、四肢抓力下降;毛色亮度值偏低;舌色、爪色偏红、舌质暗红、舌下脉络迂曲的宏观表征符合气虚血瘀证主症、次症及舌脉的诊断标准。结论LPS联合烟熏可以稳定、重复、持续地造成大鼠气虚血瘀COPD证候模型。

血液相容性材料表面表征手段

血液相容性主要是研究材料与血液直接接触后是否引发血小板聚集、凝血及血栓形成和溶血现象等问题。通常从抗凝血性能和保持血液成分完整性两方面对材料的血液相容性进行评价。文章研究了表面引发ATRP制备血液相容性材料主要的表征手段及其研究进展。

冻存脐带血中内皮祖细胞的分离培养及生物学特性鉴定

目的:建立和开发一种新型的从冻存脐带血中分离培养内皮祖细胞(EPC)的方法,探讨其生物学特性,提高冻存脐带血分离获得EPC的成功率。方法:自液氮罐中收集公共库中2000年至2001年保存的12例冻存脐带血,37℃水浴锅中快速复苏后,磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)洗涤,获得总有核细胞(TNCs),将TNCs接种至培养皿中诱导扩增EPC。使用流式细胞术和免疫荧光方法鉴定EPC并确定纯度。采用下列方法体外鉴定内皮祖细胞的功能:荧光显微镜观察细胞特异性摄取Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-I的功能、在基质胶中形成毛细管样结构的情况,ELISA法检测释放VEGF因子的功能。结果:培养3周后,出现1-5个鹅卵石铺路石样内皮祖细胞集落。体外培养第1-3代EPC,其表面CD31、CD34、CD144和VEGFR (CD309)标记阳性率分别为(92. 91±5. 20)%、(30. 0±23. 27)%、(88. 55±3. 83)%和(67. 21±12. 12)%。EPC细胞具有特异性内吞Dil-Ac-LDL和FITCUEA-I、形成毛细管结构,释放低浓度VEGF因子等功能。结论:采用本方法从冻存脐带血中分离EPC的稳定性与重复性高,从冻存的脐带血中分离EPC的成功率可提高至85%。该方法为临床应用丰富的内皮祖细胞奠定了基础。

血液中声速混合定则的可靠性验证

测量了猪、羊、牛全血及其脱水和稀释血的声速,对其主要成份含量作了测定、分析。结果表明,血液声速不单一遵从某一声速定则;不同血液服从不同实验规律。

《染血之室》中的坎普特质——从美学范畴体系的角度解读安吉拉·卡特的代表作《染血之室》

于世界文坛独树一帜的英国女作家安吉拉·卡特最受关注的作品《染血之室》改编自童话故事《蓝胡子》。卡特利用丰沛的想象力,糅合风格迥异的写作手法和技巧,赋予了小说内容和人物形象更丰富的内涵。从美学范畴体系的角度解读《染血之室》,分析小说中折射出的"坎普"风格。女主人公对物质狂热的追求过程和强烈的审美需求展示独特的美学风格和美感经验;她处于"被胁迫处境"下的"坏女人"形象是坎普在小说中的又一次回响;女主人公的母亲细腻敏感性格的令人难以忘怀的男性化勇敢坚毅品质也成了坎普感受力的意象代表。

Green recycling of chicken feather and sheep wool using the partially purified alkaline protease from <i>Bacillus circulans</i>L.

The previously optimized crude alkaline protease from the haloalkaliphilic Bacillus circulans L. was partially purified using ammonium sulphate fractionation and dialysis. The best specific activity (27.7 U/mg protein) was obtained at 80% saturation. The optimum reaction temperature and reaction pH was 47℃ and 9, respectively. The enzyme activity was enhanced with Ca and K chlorides but suppressed with HgCl2 and EDTA. The partially purified protease showed strong proteolytic activity on sheep wool and chicken feather. Also, the enzyme was compatible with the common detergent Tide and could improve its cleaning power in removing blood stain. These findings support the application of the present alka-line protease in biotechnological industries.

肝木曲直论

论述"肝木曲直"之说对于中医肝藏象理论及肝病临床的重要意义。认为"肝木曲直"应诠释为肝具有刚柔相济、体阴用阳、敷和收藏、化生升发的生理特性与功能;临床上面对复杂之肝病,在充分理解肝禀"类木""曲直"之性的基础上,当采用守恒(涵木体、达木用)而度奇(度病情、度时令、度干犯他脏)之法治之。