活血化瘀祛痰法对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响

目的:观察活血化瘀祛痰法对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压大鼠的影响,探讨其作用机制。方法:SD大鼠60只随机分为假手术组、模型组、中药复方组、法舒地尔组。采用MCT腹腔注射诱导肺动脉高压大鼠模型。观察大鼠一般状态,采用生物信号采集系统测定肺动脉压力,HE染色观察肺血管病理形态变化,Western blot法检测肺动脉组织ROCKⅠ、ROCKⅡ蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组右心肥大指数(RVHI)、肺动脉压力、肺血管增殖程度高于假手术组(P<0.05或P<0.01),中药复方组、法舒地尔组大鼠RVHI、肺动脉压力、肺血管壁厚度均低于模型组(P<0.05或P<0.01)。模型组ROCKⅠ、ROCKⅡ水平均较假手术组升高(P<0.05或P<0.01);中药复方组、法舒地尔组ROCKⅠ、ROCKⅡ水平低于模型组(P<0.05或P<0.01);中药复方组与法舒地尔组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活血化瘀祛痰法对MCT诱导的肺动脉高压具有一定疗效,可降低肺动脉压力、改善肺血管重构,其机制与调节Rho激酶信号通路有关。

水蛭素对高同型半胱氨酸大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的:观察水蛭素对高同型半胱氨酸(Hcy)大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)的作用机制。方法:50只SD大鼠,采用随机数字表法分为正常组、模型组和水蛭素3个不同剂量组(25、50、100 AT-U/mL),每组10只。正常组予以普通饲料喂养,模型组及水蛭素组大鼠予以普通饲料及DL-蛋氨酸灌胃,造模21周,测血脂4项、血清Hcy,水蛭素组皮下注射水蛭素,2周后测血脂和Hcy,取胸主动脉组织。采用苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色观察胸主动脉组织病理变化及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶3(Caspase3)表达;实时荧光定量(RT-qPCR)检测Bcl-2、Bax和Caspase3的mRNA表达。结果:水蛭素各剂量组三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量显著降低(P<0.01),水蛭素高剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量显著升高(P<0.01);水蛭素各剂量组主动脉内膜增厚、VSMC增生减轻;水蛭素高、中剂量组胸主动脉组织Caspase3、Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白的表达减少,水蛭素各剂量组Caspase3、Bax的mRNA不同程度降低,Bcl-2的mRNA表达显著降低(P<0.01),水蛭素高剂量组对胸主动脉组织Caspase3、Bcl-2、Bax的mRNA的调控最佳。结论:水蛭素可能通过调节脂质、促进Hcy诱导下异常增殖的VSMC凋亡,延缓动脉粥样硬化进展,而且可以通过Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有效促进高Hcy诱导的异常增殖的VSMC凋亡,为动脉粥样硬化的早期防治提供了新方向。

野百合碱诱导实验性肺动脉高压病理形态观察

目的 :30只Wistar大鼠一次性腹腔注射野百合碱 (monocrotaline ,MCT) (6 0mg kg体重 ) ,建立肺心病模型 ,观察野百合碱诱导肺动脉高压的机理。方法 :利用注射野百合碱方法建立肺动脉高压的动物模型 ,通过光学显微镜及电子显微镜观察野百合碱对肺动脉血管内皮细胞的损伤 ,和导致肺动脉血管平滑肌增生及右心室的变化 ,并分析病变之间的关系。结果 :野百合碱注射可使肺动脉血管内皮细胞损伤 ,并诱导肺动脉血管壁的重建 ,特别是平滑肌明显增生 。

β辐射致大鼠血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 观察放射性核素188Re辐射对平滑肌细胞凋亡的影响及其机制 ,探讨辐射所致平滑肌细胞凋亡在预防再狭窄中的作用。方法 应用188Re进行培养平滑肌细胞的内辐射。通过台盼蓝染色计数、流式细胞术、JAM法DNA碎裂量测定、透射电镜及免疫细胞化学检测等方法 ,研究辐射后平滑肌细胞的存活率、细胞凋亡率、DNA断裂量、细胞超微结构改变及相关基因表达。结果 放射性浓度 <2 .96GBq/L辐射 ,平滑肌细胞存活率、细胞凋亡率、DNA断裂量及细胞超微结构等未发生明显改变 ;高剂量辐射下 (放射性浓度 >2 .96GBq/L) ,平滑肌细胞存活率显著下降 ,细胞凋亡率明显上升 ,细胞DNA断裂量增加 ,细胞超微结构明显破坏。辐射诱导细胞凋亡过程中 ,p5 3、bax表达上调 ,而bcl 2 /bax比值下调。结论 能够明显抑制平滑肌细胞增殖的低剂量辐射对细胞存活及细胞凋亡无明显影响 ,未见细胞超微结构改变及DNA的严重破坏 ;吸收剂量大于 2 0Gy可导致平滑肌细胞大量凋亡 ;相关基因p5 3、bcl 2及bax参与调控辐射诱导细胞凋亡过程。低剂量及低剂量率辐射既能有效抑制细胞增殖 ,又不明显损伤细胞存活 ,是临床血管内放射治疗预防再狭窄的理想方法。

半边莲生物碱对高血压鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察半边莲生物碱对高血压鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用.方法：分别使用50、100和150mg/L不同剂量半边莲生物碱孵育高血压鼠脑基底动脉平滑肌细胞,以细胞计数试剂盒计数各组细胞个数、[3H]-TdR掺入检测各组DNA的合成量作为细胞增殖的指标.结果：各组细胞数量下降;各组血管平滑肌细胞DNA的合成量均下降,以100mg/L组下降最为明显.结论：半边莲生物碱可抑制高血压所诱导的脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖,提示半边莲生物碱可用于高血压诱发的脑血管重构.

^(103)Pd对血管平滑肌细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的 研究1 0 3Pd对血管平滑肌细胞 (SMC)增殖和凋亡的影响。方法 将不同剂量1 0 3Pd溶液加入SMC培养液中 ,72h时加入1 0 3Pd衰变液作对照 ;应用3H TdR参入实验研究1 0 3Pd对SMC增殖的影响 ,应用流式细胞仪检测1 0 3Pd对SMC凋亡的影响。结果 1 0 3Pd能明显抑制SMC增殖 ,并呈剂量依赖性。 1.85MBq1 0 3Pd对SMC增殖的抑制率为 2 .3% ,几乎不能抑制SMC增殖 ;1 0 3Pd剂量从 7.4MBq增加到 37.0MBq ,增殖抑制率从 4 1.6 %上升至 91.2 % ,SMC增殖受到明显抑制。 1.85～ 37.0MBq1 0 3Pd均不能诱导SMC的明显凋亡 ,其凋亡率均小于 4 .0 %。结论 1 0 3Pd在体外能有效抑制SMC增殖。1 0 3Pd抑制新生内膜形成的机制主要是抑制SMC增殖 ,而非诱导SMC的大量凋亡。

高胰岛素水平对血管平滑肌细胞NO生成的影响

培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC) ,检测高胰岛素 (HI)对VSMC膜蛋白激酶C(PKC)活性的影响 ;并采用硝酸还原酶法和免疫印迹法检测HI加或不加PKC抑制剂 -H7对脂多糖 (LPS) +γ -干扰素 (γ -IFN)诱导NO生成和一氧化氮合酶 (iNOS)表达的影响。结果 ,HI预处理的VSMC ,膜PKC活性明显高于对照 (P <0 .0 5 ) ;LPS +γ -IFN诱导NO生成显著低于对照 (P <0 .0 1) ,加H7培育 ,NO的生成量较HI处理组明显提高 ,但低于对照 (P <0 .0 1)。免疫印迹示HI处理的VSMC ,iNOS表达下降。提示 :高胰岛素血症可能通过激活VSMC膜PKC ,部分抑制iNOS表达 ,减少NO产生。

胰岛素对离体大鼠胸主动脉血管张力的影响

制备离体大鼠胸主动脉环,分有内皮组和去内皮组,采用离体血管灌流技术,观察胰岛素对去氧肾上腺素(PE)和氯化钾(KCl)预收缩的胸主动脉环收缩张力的影响。结果表明胰岛素对PE预收缩的胸主动脉环产生浓度依赖性的舒张作用,且有内皮组和去内皮组间无显著差异。胰岛素对KCl预收缩的胸主动脉环没有显著影响。胰岛素对PE预收缩的胸主动脉环有非内皮依赖性舒张作用。

犬颈部模拟爆炸条件下颈总动脉的病理改变

目的 探讨在一种新的颌面颈部致伤模型的作用下 ,颈部大血管 (颈总动脉 )受爆炸伤后的病理变化 .方法 采用雷管置于面部咬肌上方 10 cm处引爆模拟爆炸冲击波 ,同时 ,颈部用五三式滑膛弹道枪致颈部切线伤或贯通伤模拟爆炸时破片致伤作用 .结果 致伤后距伤道中点 1,3和 5 cm的颈总动脉均有不同程度的损伤 .光镜下均可见血管内皮粗糙、血栓形成、中膜弹力纤维断裂以及中外膜大量炎细胞浸润 .电镜下内皮细胞、平滑肌细胞的表现以变性坏死为主 .结论 颈总动脉间接火器性损伤后血栓形成以 2 4 h为高峰( P<0 .0 5 ) .在上述模型作用下 ,除距伤道 1cm处的动脉内皮损伤较重外 ,其他距离的内皮细胞和中膜损伤程度均未发现明显差异 .说明爆炸 +破片复合伤 (简称破 -冲复合伤 )的作用较单纯的破片损伤程度为重 .另外 ,致伤后的内膜及中膜的断裂有使外膜疝出的趋势 ,为研究临床上间接性火器损伤所致的假性动脉瘤的形成机制提供了理论依据 .

β射线内照射抑制血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖的研究

目的 探讨β射线对血管内皮细胞和平滑肌细胞的细胞效应。方法 培养人脐静脉内皮细胞和牛主动脉平滑肌细胞,接受0、1.25、2.5、5.0、10、20、40 Gy β射线后,以四唑盐(MTT)比色实验评价剂量-效应关系,用划痕实验研究β射线对两种细胞增殖的影响。血管内皮细胞经0、2.5、5.0、10、20 Gy照射后,进行透射电镜超微结构观察和使用流式细胞仪进行DNA倍体及凋亡率分析。结果 血管内皮细胞在照射后2、24 h,在1.25～40 Gy其增殖呈剂量依赖性抑制;在照射后48、72 h,其剂量依赖性抑制在10 Gy时处于平台期。血管平滑肌细胞在照射后2、24和48 h,其增殖抑制在10Gy时处于平台期;在照射后72h,其增殖抑制在5 Gy时处于平台期。在照射后72 h,吸收剂量为5 Gy时,血管平滑肌细胞和内皮细胞的抑制率分别为27.9％和19.0％(P=0.016);吸收剂量为10 Gy时,血管平滑肌细胞和内皮细胞的抑制率分别为33.7％和20.9％(P=0.002)。划痕实验示吸收剂量为5Gy时血管内皮细胞几乎完全充填裂隙,而平滑肌细胞较少充填裂隙;10 Gy照射后,内皮细胞充填裂隙数量减少,而平滑肌细胞几乎未充填裂隙。透射电镜未发现典型的凋亡征象,流式细胞仪检查各实验组和对照组的凋亡率均<4.4％。DNA倍体分析发现对照组G_2/M期细胞数百分比为13.09％,各照射组依次为16.

壳聚糖-生物蛋白胶用于工程化血管构建的初步研究

目的探讨壳聚糖管和生物蛋白胶作为工程化血管支架的可行性。方法血管内皮细胞和平滑肌细胞取自大鼠主动脉,体外扩增后,血管内皮细胞被接种在壳聚糖管的内表面;平滑肌细胞与生物蛋白胶混合后接种在壳聚糖管的外表面构建工程化血管。采用倒置显微镜观察、免疫组化染色和扫描电镜观察方法对工程化血管进行评价。结果血管内皮细胞在壳聚糖管的内壁形成连续的单层细胞层,覆盖在壳聚糖支架管腔内壁。平滑肌细胞在生物蛋白胶中成活生长,并形成三维的立体结构。结论壳聚糖生物蛋白胶可潜在地作为工程化血管支架。

两种木贼提取物对AS早期大鼠血管平滑肌细胞形态学影响

目的研究木贼正丁醇提取物及提取剩余物对大鼠高脂血症及动脉粥样硬化早期主动脉平滑肌病变的影响。方法选用雄性SD大鼠,随机分为正常对照、病理模型、阳性药、木贼正丁醇提取物、提取剩余物组。复制食饵性早期动脉粥样硬化模型,用木贼提取物预防性给药,以吉非罗齐为阳性药对照。实验9周,测定血脂,光镜及电镜下观察主动脉平滑肌细胞形态学变化。结果木贼正丁醇提取物及提取剩余物组血清TG,VLDL较模型组显著降低。提取物两组平滑肌病变较模型组明显减轻。结论木贼两种提取物均有降低血脂,影响动脉粥样硬化早期血管平滑肌细胞转型的作用。

应用脂肪干细胞构建组织工程化小口径血管平滑肌层的实验研究

目的探索利用脂肪干细胞在生物反应器内构建组织工程血管平滑肌层的可行性。方法用抽吸的脂肪获取脂肪干细胞,在生长因子TGF-β1和BMP4作用下诱导成平滑肌细胞,然后将诱导的平滑肌细胞接种于PGA上,将细胞-材料复合物置于生物反应器内进行培养,在模拟胚胎发育血流动力学的刺激下(搏动频率:75次/分;扩展量<5%),构建小口径的血管平滑肌组织。培养8周后,取材行组织学和生物力学检测并与正常血管对比。结果脂肪干细胞在TGF-β1和BMP4的诱导下,细胞呈现平滑肌细胞特有的"波峰-波谷"样生长特点,并表达平滑肌细胞的特异性标记物α-SMA、SM22α、calponin和SM-MHC;反应器内培养8周后,构建的管状组织胶原分泌旺盛,具有一定的力学强度和弹性。结论利用脂肪干细胞可在体外生物反应器内构建组织工程化小口径血管平滑肌层,为临床上小血管病变的修复提供了一种新的可能的途径。

联合培养的内皮细胞对平滑肌细胞增殖和形态的影响

目的探索体外培养和扩增同一来源内皮细胞和平滑肌细胞的有效方法,研究联合培养的内皮细胞对平滑肌细胞形态和增殖的影响。为研究内皮细胞和平滑肌细胞相互关系和体外构建组织工程血管提供理论和实践基础。方法在体外用酶消化法和组织块贴壁法分别建立内皮细胞和平滑肌细胞的原代,并应用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸钠传代培养。应用光镜、透射电镜、细胞计数和MTT法对内皮细胞和平滑肌细胞的形态和代谢进行研究。模拟血管壁的内层结构及内皮细胞和平滑肌细胞间的相互影响途径,建立以聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜为介质的内皮细胞与平滑肌细胞联合培养模型。分3组:内皮细胞,平滑肌细胞、平滑肌细胞/平滑肌细胞和空白/平滑肌细胞,应用3H-TdR掺入法研究联合培养的内皮细胞对平滑肌细胞增殖的影响。结果酶消化法和植块培养法可以有效地建立起内皮细胞和平滑肌细胞的原代。内皮细胞对联合培养的平滑肌细胞早期增殖有促进作用,晚期则增殖缓慢。结论以PET膜为介炙联合培养同一来源的内皮细胞和平滑肌细胞的新模型是研究两者间相互影响的良好模型。内皮细胞和平滑肌细胞作为血管构成的基本细胞,对于它们的形态学、体外培养和扩增以及相互关系的研究具有重要的意义。

益气活血法与血管平滑肌细胞基因表达调节

多种心血管疾病的发生发展都与血瘀证有关 ,采用益气活血法作为治疗该类疾病的主要治则已广泛用于临床。研究证实 ,益气活血中药可调整舒缩血管活性肽在血管平滑肌细胞中的表达活性 ;并通过抑制血管平滑肌细胞表型转化和细胞增殖相关基因表达而减缓血管内膜增生程度。该类药物还具有调节细胞外基质代谢从而抑制基质重构和血管平滑肌细胞黏附与迁移的作用。本文将近年有关益气活血中药调节血管平滑肌细胞行为及其分子机制的研究作一评述。

^(103)Pd支架对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 研究10 3 Pd支架预防血管成形术后再狭窄的作用机理。方法 将雄性新西兰大白兔 50只随机分为普通支架组及10 3 Pd支架组 ,各组再分 5个亚组 ,设正常对照。分别于术后第 3、7、14、2 8、56天取材 ,进行病理形态学、细胞凋亡定量研究 ,用原位杂交法测定凋亡相关基因bcl 2mRNA及baxmRNA的表达。结果 光镜下发现 ,10 3Pd支架组管腔狭窄程度明显低于普通支架组 ,术后第 56天最显著 (P <0 0 1)。末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记 (TUNEL)法检测发现术后 3～ 2 8d ,10 3 Pd支架组的平滑肌细胞凋亡较普通支架组明显 ,术后第 7天达峰值 (P <0 0 1)。原位杂交显示术后 3～ 2 8d 10 3Pd支架组bcl 2mRNA的表达较普通支架组降低 ,术后第 2 8天达峰值 (P <0 0 1)。而baxmRNA的表达 ,术后 3～ 2 8d10 3 Pd支架组较普通支架组显著增加 ,术后第 7天达峰值 (P <0 0 1)。术后 3～ 2 8d ,10 3 Pd支架组的bcl 2mRNA与baxmRNA比值均小于普通支架组(P <0 0 5)。直线相关分析示 ,bcl 2mRNA与TUNEL法测定的凋亡阳性率呈明显负相关 ,而baxmRNA与之呈明显正相关 (P <0 0 1)。结论 10 3 Pd支架通过诱导凋亡相关基因的表达 ,导致明显的中膜平滑肌细胞凋亡 ,使凋亡细胞比例增加 。

环磷腺苷信号通路与血管重塑关系的研究进展

环磷腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)信号通路作为一种重要的细胞内信息传递系统参与调节了多种生物活动。近期研究发现,c AMP通路的激活可有效抑制心脑血管疾病进程中的血管重塑,c AMP通路有望成为治疗上述疾病的新的靶目标。本文从c AMP通路抑制血管内皮炎症、内膜增生和血小板异常激活等方面阐述c AMP信号通路与血管重塑的关系。

麦冬对诱导性血管平滑肌细胞增殖的拮抗作用

目的 :探讨麦冬对高胰岛素、高脂血清诱导血管平滑肌细胞 ( VSMC)增殖的拮抗作用。方法 :通过 MTT比色测定及形态学方法观察麦冬药物血清的作用效果。结果 :麦冬组有较明显的抗VSMC增殖作用 ,显著缓解高胰岛素、高血脂造成的形态学改变。结论 :麦冬药物血清治疗瘀血的机制与血管平滑肌细胞有密切联系。

胚胎血管发育早期PDGF-BB对血管平滑肌细胞趋化的影响

目的:建立胚胎血管发育早期血管平滑肌细胞(VSMCs)趋化模型,并观察胚胎血管发育早期血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对VSMCs趋化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子控制下表达增强型绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体的胚胎干细胞制备拟胚体,然后接种于under-agarose凝胶作为平滑肌细胞趋化模型。用慢速视频显微摄像技术观察拟胚体分化后表达GFP的VSMCs,分析比较不同浓度PDGF-BB对VSMCs分化和移行的影响。结果:在under-agarose凝胶中,拟胚体在无外源性生长因子存在的条件下可自发向心肌细胞、内皮细胞和VSMCs分化。拟胚体贴壁分化20 d时,对照组及4种浓度PDGF-BB(5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L)组VSMCs的平均迁移速率分别为(94.07±23.80)μm/h、(118.08±31.63)μm/h、(173.53±24.58)μm/h、(380.74±39.56)μm/h和(335.62±32.16)μm/h,峰值浓度为20μg/L。经浓度大于10μg/LPDGF-BB处理后,VSMCs向PDGF-BB孔方向移行,对照组、低浓度PDGF-BB组VSMCs呈不规则性迁移。结论:该模型能够模拟胚胎血管发育早期全过程,可用于研究不同生长因子对VSMCs趋化的影响。外源性PDGF-BB能定向诱导胚胎血管发育早期VSMCs迁移,其定向趋化作用在一定浓度范围内呈量效关系。

气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞bcl-2及bax相关凋亡因子的表达

目的观察气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及bcl-2、bax相关凋亡因子的表达。方法采用饥饿、疲劳、寒冷、惊吓等综合因素方法复制气虚血瘀证大鼠模型,观察大鼠胸主动脉血管内膜形态学,检测血管平滑肌细胞的凋亡指数及bcl-2、bax蛋白的表达。结果气虚血瘀大鼠血管内膜明显增殖,血管平滑肌细胞bcl-2蛋白表达增高(96.15±0.02vs21.13±0.05);bax蛋白表达降低(1.05±0.12vs68.06±0.06);bcl-2/bax增高(2.92±0.67vs0.01±0.01)(P<0.05)。结论气虚血瘀证大鼠存在血管平滑肌细胞增殖和凋亡严重失调等病理生理基础。