草苁蓉颗粒提取和成型工艺优化

为了提高草苁蓉颗粒的均一性和稳定性,本试验对其提取和成型工艺进行优化,以提取时间、料液比和提取次数作为关键工艺参数,以浸膏得率为关键质量属性,通过Box-Behnken设计响应面法建立模型,考察关键工艺参数与关键质量属性之间的交叉作用,优化草苁蓉提取工艺的设计空间。以填充剂配比、浸膏用量和润湿剂浓度为考察因素,以颗粒合格率、溶化性、吸湿率和感官评价的总评归一值(OD值)作为评价指标,采用单因素试验结合Box-Behnken设计响应面法优化草苁蓉颗粒成型工艺。结果显示,草苁蓉最佳提取工艺为:提取时间60 min,液料比10∶1,提取次数2次。最佳成型工艺为:辅料乳糖∶糊精=3∶1,浸膏用量为7%,润湿剂为75%乙醇。该方法稳定可行且重复性好,可用于草苁蓉颗粒的提取和成型工艺。

草苁蓉乙醇提取物对NAFLD大鼠肝脏炎性因子表达的影响

目的探讨草苁蓉乙醇提取物(BREE)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织羟脯氨酸和炎性因子的影响。方法采用高脂饲料喂养构建大鼠NAFLD模型,大鼠被随机分为正常对照组、NAFLD模型组和BREE治疗组(500 mg·kg-1·d-1)。在用药8 w末,处死动物,留取血清,采用ELSIA法检测肝组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6水平;采用HE染色和免疫组化法分别观察大鼠肝脏病理学变化和检测肝组织NF-kB/p65表达。结果 BREE治疗组大鼠血清ALT[(39.47±20.26)U/L]和AST[(46.48±18.52)U/L]水平较模型组显著下降[(79.32±19.05)U/L和(88.35±17.46)U/L,P<0.01],而血清还原性谷胱甘肽[(349.43±45.52)mg/L]水平较模型组明显升高[(265.38±28.57)mg/L,P<0.01];BREE治疗组大鼠肝组织NF-kB/p65阳性表达[(15.49±4.78)%]和羟脯氨酸含量[(14.28±3.08)mg/g]均较模型组显著下降[分别为(87.54±6.59)%和(35.47±4.53)mg/g,P<0.01],同样,IL-1β、TNF-α和IL-6水平[分别为(34.51±5.61)pg/mL、(45.37±7.03)pg/mL)和(18.98±5.04)pg/mL]均较模型组显著降低[分别为(78.25±6.51)pg/mL、(85.64±6.25)pg/mL、(29.19±4.82)pg/mL,P<0.01];BREE处理组动物肝组织病理学损害程度明显减轻。结论 BREE能明显改善NAFLD大鼠肝功能和肝组织胶原沉积,其机制可能与通过下调NF-κB/p65和炎症细胞因子表达有关。

应用划痕标记染料示踪技术检测草苁蓉甲醇提取物对大鼠肝癌细胞功能的影响

目的：通过划痕标记染料示踪实验,初步筛选出对大鼠肝癌细胞G JIC功能有较强恢复和促进作用的草苁蓉甲醇提取物药物终浓度。方法：大鼠肝癌细胞随机分为5个组：分别为1个对照组、4个实验组。4个实验组加入草苁蓉甲醇提取物药物终浓度分别达到0.25g/L、0.5g/L、0.75g/L、1.0g/L。结果：大鼠肝癌细胞经草苁蓉甲醇提取物（BR）0.75g/L、1.0g/L作用48h后的细胞中,荧光染料出现在划痕的附近细胞内至划痕以外的5~6列甚至7~8列细胞内,半定量为（）,形成连片状的荧光染色,荧光亮度明显增加,细胞间染料传输功能显著增强。结论：通过划痕标记染料示踪实验,初步筛选出草苁蓉甲醇提取物0.75、1.0g/L对细胞G JIC功能有较强恢复和促进作用。

草苁蓉甲醇提取物(BR)对大鼠肝癌细胞功能的影响

目的:M TT比色法检测草苁蓉甲醇提取物(BR)对大鼠肝癌细胞功能的影响和倒置显微镜下观察形态学改变情况。方法:将大鼠肝癌细胞随机分为5个组:分别为1个对照组、4个实验组。4个实验组加入草苁蓉甲醇提取物,使药物终浓度分别达到0.25g/L、0.5g/L、0.75g/L、1.0g/L;对照组除加等体积的生理盐水代替用药外,其余步骤与用药组完全相同。每组设3个复孔。应用M TT比色法检测对大鼠肝癌细胞的抑制率和倒置显微镜下观察各组细胞数目和形态。结果:草苁蓉甲醇提取物(BR)对大鼠肝癌细胞株的生长有抑制作用,0.25g/L、0.5g/L、0.75g/L、1.0g/L草苁蓉甲醇提取物(BR)的24h体外细胞抑制率分别达到37.71%、50.28%、64.40%、98.58%。结论:实验结果表明,草苁蓉甲醇提取物(BR)对对大鼠肝癌细胞有较强的细胞毒性,只有在高浓度(0.75g/L和1.0g/L)时才对大鼠肝癌细胞有明显的抑制生长和杀伤作用。

不同草苁蓉提取物中化学成分及药理作用的研究进展

草苁蓉(Boschniakia rossica)为列当科植物,具有抗肿瘤、抗肝损伤、增强免疫力、抗炎、抗疲劳等多种生物活性。在此主要对不同草苁蓉提取物中化学成分及其药理作用的研究进展进行综述,以便为草苁蓉的开发利用提供理论依据。

利用在线加压溶剂提取-超高效液相色谱-离子肼-飞行时间-质谱法直接分析中药草苁蓉的化学成分组

构建了在线加压溶剂提取-超高效液相色谱-离子肼-飞行时间质谱(online PLE-UHPLC-IT-TOF-MS)系统,并将其应用于草苁蓉化学组的快速、直接分析。将微量草苁蓉粉末(0.5 mg)置于空预柱芯中,空隙用正相硅胶填充,作为提取池;提取池置于预柱套内,将其放入柱温箱(70℃),预柱套通过金属管线连接至UHPLC-IT-TOF-MS系统。通过引入一个二位六通阀将整个分析过程分为提取和洗脱两个阶段。以0.1%(v/v)甲酸水为溶剂,提取3 min。在洗脱阶段,以0.1%(v/v)甲酸水-0.1%(v/v)甲酸乙腈为流动相,梯度洗脱,将色谱柱前端所富集的提取物洗脱至IT-TOF-MS中进行检测。从草苁蓉中检测到48个化合物,结合对照品、文献、数据库以及质谱裂解规律,初步鉴定了其中的45个,包括10个苯乙醇苷类、14个环烯醚萜苷类以及21个苯丙醇苷类化合物。该研究为草苁蓉化学成分组成的阐明以及质量评价提供了可靠信息。同时,构建的online PLE-UHPLC-IT-TOF-MS系统为中药化学成分的快速、直接表征提供了有效方案。

不老草黄酮提取工艺及其抗氧化功效研究

采用超声波辅助提取法制备不老草黄酮。在单因素试验的基础上,通过正交试验方法进行四因素三水平的正交优化,确定最佳提取工艺条件为:提取溶剂为50%乙醇,超声提取时间为1.5 h,提取温度为70℃,料液比为1︰60,超声功率380 W,粗提取液浓缩除醇,经D4020大孔树脂纯化,流速2 mL/min,上样量2.09 BV,解析液60%乙醇。在此条件下总黄酮提取率为(3.00±0.04)%,冻干粉的黄酮含量为(34.60±1.63)%。通过DPPH·清除试验、ABTS+·清除试验、FRAP总抗氧化对不老草总黄酮的抗氧化活性进行考查,结果显示,在所设浓度范围内,随着质量浓度的增加,其DPPH·清除能力、ABTS+·清除能力及铁氰化钾还原能力均逐渐增强。不老草总黄酮对DPPH·清除的半最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50))值为0.0404 mg/mL,对ABTS+·清除的EC_(50)值为0.97 mg/mL。试验结果证明不老草提取物具有较好的体外抗氧化性活性。

草苁蓉提取物对阿尔茨海默病大鼠行为学及额叶小胶质细胞的影响

目的:探讨草苁蓉提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆影响的机制。方法:Meynert核注射微量Aβ1-40制备动物模型,随机分成:正常组、假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。以Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,免疫组化法观察海马区胶质细胞的活性。结果:模型组额叶胶质细胞活化数量增多,学习记忆能力减退。各治疗组胶质细胞数量较模型组减少,学习记忆能力增强,且以高剂量组最显著。结论:草苁蓉提取物可减少胶质细胞的活化,从而对神经元发挥保护作用,增强学习记忆能力。

草苁蓉乙醇提取物对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉提取物对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)生长抑制及诱导凋亡的影响。方法:选用大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)进行体外培养,用MTT比色法测定不同浓度、不同时间段草苁蓉乙醇提取物对该细胞的抗增殖作用;应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色荧光显微镜及扫描电镜技术观察药物作用后的细胞形态学改变;应用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测细胞周期及细胞凋亡率的变化。结果:(1)MTT实验表明:草苁蓉乙醇提取能抑制HSC-T6细胞增殖,并表现出浓度、时间依赖性关系。(2)HE染色、AO/EB荧光染色以及扫描电镜观察发现草苁蓉乙醇提取物作用于HSC-T6细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变:细胞表面微绒毛消失,细胞体积变小,细胞质浓缩,核染色质边集、细胞核固缩、核碎裂、出泡等现象。(3)流式细胞仪检测,草苁蓉乙醇提取物处理后大鼠肝星状细胞(HSC-T6)被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率上升,与对照组相比有统计学差异,并随药物浓度的升高呈增高趋势。结论:(1)草苁蓉乙醇提取物在体外可明显抑制HSC-T6细胞的增殖。(2)草苁蓉乙醇提取物在体外可诱导HSC-T6细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期。

草苁蓉乙醇提取物对大鼠肝星状细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉乙醇提取物对体外培养的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)生长抑制及诱导凋亡的影响。方法:选用大鼠HSC-T6进行体外培养,用MTT法测定0.25,0.5,0.75,1.0 g·L-1草苁蓉乙醇提取物作用12,24,36,48 h后对细胞增殖的抑制作用;应用Annexin V与碘化丙啶(PI)双染色荧光显微镜及透射电镜技术观察药物作用后细胞形态学改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率的变化。结果:①MTT实验表明草苁蓉乙醇提取物能抑制HSC-T6细胞增殖,并显出量效和时效关系。0.75 g·L-1草苁蓉刺激12,24,36,48 h对HSC-T6增殖的抑制率分别为(44.58±1.42)%,(51.56±1.34)%,(63.83±0.99)%,(74.77±3.40)%(P<0.05)。②荧光显微镜及透射电镜观察发现草苁蓉乙醇提取物作用于HSC-T6细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变,细胞表面微绒毛消失,细胞体积变小,细胞质浓缩,核染色质边集、细胞核固缩、核碎裂、出泡等。③草苁蓉处理后HSC-T6被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率上升,且表现出明显量效关系。0.75 g·L-1草苁蓉乙醇提取物改变HSC-T6周期分布,使G0/G1期细胞由(50.33±0.80)%增至(61.46±1.07)%,表现出G0/G1期阻滞;同时诱导HSC-T6凋亡,凋亡率由(1.44±0.43)%增至(14.20±0.98)%(P<0.05)。结论:草苁蓉乙醇提取物可明显抑制HSC-T6细胞增殖,其作用可能与诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期有关。