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Decoding bovine coronavirus immune targets:an epitope informatics approach
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作者 Swati Rani Mehnaj Khatoon +6 位作者 Jagadish Hiremath Kuralayanapalya Puttahonnappa Suresh Jayashree Anandakumar Nagendra Nath Barman Sheethal Manjunath Yamini Sri S Sharanagouda S.Patil 《Animal Diseases》 CAS 2024年第2期138-153,共16页
Bovine coronavirus(BCoV)poses a significant threat to the global cattle industry,causing both respiratory and gastrointestinal infections in cattle populations.This necessitates the development of efficacious vaccines... Bovine coronavirus(BCoV)poses a significant threat to the global cattle industry,causing both respiratory and gastrointestinal infections in cattle populations.This necessitates the development of efficacious vaccines.While several inactivated and live BCoV vaccines exist,they are predominantly limited to calves.The immunization of adult cattle is imperative for BCoV infection control,as it curtails viral transmission to calves and ameliorates the impact of enteric and respiratory ailments across all age groups within the herd.This study presents an in silico methodology for devising a multiepitope vaccine targeting BCoV.The spike glycoprotein(S)and nucleocapsid(N)proteins,which are integral elements of the BCoV structure,play pivotal roles in the viral infection cycle and immune response.We constructed a remarkably effective multiepitope vaccine candidate specifically designed to combat the BCoV population.Using immunoinformatics technology,B-cell and T-cell epitopes were predicted and linked together using linkers and adjuvants to efficiently trigger both cellular and humoral immune responses in cattle.The in silico construct was characterized,and assessment of its physicochemical properties revealed the formation of a stable vaccine construct.After 3D modeling of the vaccine construct,molecular docking revealed a stable interaction with the bovine receptor bTLR4.Moreover,the viability of the vaccine’s high expression and simple purification was demonstrated by codon optimization and in silico cloning expression into the pET28a(+)vector.By applying immunoinformatics approaches,researchers aim to better understand the immune response to bovine coronavirus,discover potential targets for intervention,and facilitate the development of diagnostic tools and vaccines to mitigate the impact of this virus on cattle health and the livestock industry.We anticipate that the design will be useful as a preventive treatment for BCoV sickness in cattle,opening the door for further laboratory studies. 展开更多
关键词 IMMUNOINFORMATICS bovine coronavirus Multiepitope vaccine Molecular docking In silico cloning
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Prevalence of coronavirus from diarrheic calves in the Republic of Korea 被引量:1
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作者 Jinho Park Du-Gyeong Han +4 位作者 Su Hee Kim Jeong-Byoung Chae Joon-Seok Chae Do-Hyeon Yu Kyoung-Seong Choi 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2018年第1期1-6,共6页
Objective: To investigate the prevalence of bovine coronavirus(BCo V), bovine rotavirus, and bovine viral diarrhea virus in the feces of normal and diarrheic Korean native calves aged 1-81 days between April and Octob... Objective: To investigate the prevalence of bovine coronavirus(BCo V), bovine rotavirus, and bovine viral diarrhea virus in the feces of normal and diarrheic Korean native calves aged 1-81 days between April and October of 2016 in the Republic of Korea. Methods: Samples were obtained from 50 normal and 93 diarrheic(56 semi-formed, 28 loose, and 9 watery feces) calves in six different regions of northern and southern Korea. These fecal samples were tested for BCo V, bovine rotavirus, and bovine viral diarrhea virus by RT-PCR. Results: Among the three pathogens examined, infection with BCo V was especially prominent in relation to diarrhea among calves aged 1-21 days [odds ratio(OR)=9.3, 95% confidence interval(CI): 1.1-78.9; P=0.02). Infection with BCo V alone(OR=2.9; 95% CI: 1.1-7.6; P=0.03) or coinfection of BCo V with bovine viral diarrhea virus(OR=3.6; 95% CI: 1.0-12.4; P=0.04) was significantly associated with the development of loose feces. Grazing and colostrum intake strongly reduced the occurrence of diarrhea as compared to housed calves(OR=0.2; 95% CI: 0.1-0.4; P=0.00) and calves that had not been fed colostrum(OR=0.2; 95% CI: 0.1-0.7; P=0.02), respectively. Conclusions: The present study suggests that BCo V is involved in calf diarrhea in the Republic of Korea. Therefore, grazing and colostrum intake is recommended for preventing and controlling calf diarrhea caused by BCoV. 展开更多
关键词 Calf diarrhea bovine coronavirus bovine viral diarrhea virus Loose feces GRAZING
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牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 蒲鹏 李晨露 +2 位作者 张琪 吴发兴 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期7-10,共4页
为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan... 为建立牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据GenBank收录的牛冠状病毒AKS-01株N基因序列(KU886219)保守区设计特异性引物和探针,构建重组质粒并进行反应条件优化、特异性试验、重复性试验以及敏感性试验,建立一种检测BCoV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,建立的牛冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性、敏感性和重复性均良好。该方法BCoV重组质粒标准品在5.75×10^(7)~5.75×10^(3)copies/μL时与Ct值呈现良好线性关系,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛副流感病毒3型均无交叉反应,特异性良好;该方法对BCoV重组质粒标准品最低检测限为5.75×10^(1)copies/μL;批内和批间重复性试验结果稳定,变异系数均小于2%。利用所建立的TaqMan荧光定量PCR方法对收集的132份样品进行检测,与常规PCR相比,两者符合率为96.21%,可为BCoV的临床检测和流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 TaqMan荧光定量PCR 检测方法
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河北省廊坊市牛主要病毒性腹泻病原感染状况检测及牛冠状病毒演化分析 被引量:2
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作者 李思远 付新成 +10 位作者 袁雪松 毛立 蔡旭航 孙心如 黄金 谢玲玲 王府 周华 张琪 李基棕 李彬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期649-659,共11页
牛病毒性腹泻病原严重危害畜牧业生产,BVDV、BoAstV、BCoV、MRV、BKoV、BoNeV、BNoV、BRV、BToV被认为是引起牛群腹泻的病原,不仅如此,BVDV、BCoV和BToV除了能引起消化道症状外还能引起呼吸道症状,BVDV不仅能引起消化道和呼吸道症状,还... 牛病毒性腹泻病原严重危害畜牧业生产,BVDV、BoAstV、BCoV、MRV、BKoV、BoNeV、BNoV、BRV、BToV被认为是引起牛群腹泻的病原,不仅如此,BVDV、BCoV和BToV除了能引起消化道症状外还能引起呼吸道症状,BVDV不仅能引起消化道和呼吸道症状,还会导致母牛生殖功能异常,这些疾病对畜牧业造成巨大的经济损失。为了解牛主要病毒性腹泻病原流行情况,本次试验通过PCR检测方法对我国河北地区323份腹泻牛粪样品进行常见9种病毒性牛腹泻病原进行检测。结果显示,BVDV阳性检出率1.85%(6/323)、BCoV阳性检出率14.24%(46/323)、BRV阳性检出率57.89%(187/323)、BoAstV阳性检出率0.31%(1/323)、BoNeV阳性检出率10.84%(35/323)、BNoV阳性检出率4.33%(14/323)、MRV阳性检出率2.48%(8/323)、BToV阳性检出率4.64%(15/323)、BKoV阳性检出率11.76%(38/323)。混合感染共有76份,占比23.53%(76/323)。HBLF2302株的全基因序列、S、HE、N、M和E基因进行同源性和遗传进化分析发现,HBLF2302与BCoV/NMG1/2022基因同源性最高,为GIIb亚型。基于氨基酸序列比对和HBLF2302的S蛋白三级结构预测发现,在S蛋白中157号位突变为157T,854号位点突变为854I。318V为独特突变,改变了与侧链残基的作用力,与631C形成氢键连接。并发现中国株区别于其它地区的GⅡb亚型,位于ORF1a区域有三个独特位点。本研究丰富了牛腹泻病原的流行病学数据,为牛腹泻病的防控奠定基础。 展开更多
关键词 病毒性腹泻 牛冠状病毒 流行病学调查 腹泻病原
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牛冠状病毒刺突蛋白研究进展 被引量:2
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作者 刘强 牛小霞 +6 位作者 方敏 刘艳玲 高辉 陈吉祥 加华才让 张思浓 李勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期944-956,共13页
牛冠状病毒(bovine coronavirus, BCoV)是一种能感染牛肠道、呼吸道引起新生犊牛腹泻、成年牛冬季痢疾和各年龄段的牛呼吸道疾病的重要病原体,严重危害着养牛业的发展。刺突(spike, S)蛋白是该病毒主要的结构蛋白和免疫原性蛋白,在病毒... 牛冠状病毒(bovine coronavirus, BCoV)是一种能感染牛肠道、呼吸道引起新生犊牛腹泻、成年牛冬季痢疾和各年龄段的牛呼吸道疾病的重要病原体,严重危害着养牛业的发展。刺突(spike, S)蛋白是该病毒主要的结构蛋白和免疫原性蛋白,在病毒初始感染和诱导保护性免疫中发挥重要作用。本文就该病毒刺突蛋白的结构特征、生物学功能及应用研究、免疫原性、变异原因和潜在双受体系统的最新研究进展做一阐述,期望为新型疫苗研制和靶点治疗药物开发提供科学依据,以便制定快速有效的安全防治对策应对预出现的新毒株。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 刺突蛋白 生物学功能 蛋白变异
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杆状病毒表达系统表达BCoV纤突蛋白及其对小鼠的免疫原性 被引量:1
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作者 喻琦胜 朱庆 +6 位作者 周群 宋鑫 张家祺 陈涛云 徐林 张朝辉 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期640-648,共9页
旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH1... 旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rpFastBac-S,利用基因组PCR、免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验对其进行鉴定,测定杆状病毒滴度。优化和筛选感染剂量对蛋白表达的影响,超速离心纯化蛋白,免疫小鼠和评估其免疫效果。结果显示:优化后全长4108 bp的BCoV S基因CAI(密码子适应指数)从0.39调整为0.87,平均GC含量从35.8%调整为50.6%。经双酶切、PCR验证,重组质粒与重组杆粒均构建成功。用5μg重组杆粒Bacmid-S转染Sf9细胞并传代至第四代后细胞病变趋于稳定,感染杆状病毒约20 h后产生典型病变,收获重组杆状病毒进行鉴定。PCR电泳结果显示重组杆粒携带S目的蛋白基因;间接免疫荧光试验显示,试验组观察到特异性绿色荧光;Western blot结果显示重组杆状病毒rpFastBac-S所表达的蛋白为S目的蛋白,目的条带位于250 ku左右,感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高。将50μg蛋白、20μg CpG免疫增强剂与等体积MF59佐剂充分混合乳化后,肌肉注射免疫小鼠,间接ELISA试验结果显示,小鼠免疫蛋白后产生了IgG特异性抗体,且抗体水平高于佐剂对照组(P<0.001),最高抗体效价达1∶12800;微量中和试验结果显示,小鼠血清中和效价最高达1∶224,试验组中和效价平均值高于灭活病毒组,但统计学差异不显著(P>0.05)。本研究利用杆状病毒表达系统表达了牛冠状病毒S蛋白,并对S蛋白免疫保护效果做了进一步评价,为后续牛冠状病毒疫苗研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 S蛋白 杆状病毒表达系统 免疫原性
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我国部分省份牛冠状病毒HE基因遗传变异分析
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作者 罗健丹 张欣怡 +5 位作者 房琳琳 刘爽 郑辉 魏荣 董雅琴 肖啸 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期81-87,共7页
2020-2023年收集我国14个省份78个临床发病牛群的肛拭子、粪便、组织等样品1819份,用实时荧光RT-PCR方法进行牛冠状病毒(BCoV)检测,并选取部分核酸阳性样品进行HE基因全长的扩增、测序与遗传变异分析。78个发病牛群中,BCoV阳性场占56.4... 2020-2023年收集我国14个省份78个临床发病牛群的肛拭子、粪便、组织等样品1819份,用实时荧光RT-PCR方法进行牛冠状病毒(BCoV)检测,并选取部分核酸阳性样品进行HE基因全长的扩增、测序与遗传变异分析。78个发病牛群中,BCoV阳性场占56.41%,共获得35条HE基因全长序列,与参考序列相比,核苷酸同源性为97.0%~100.0%,氨基酸同源性为97.0%~99.8%。系统进化分析表明,BCoV毒株HE基因在进化上呈现典型的地域性特点,亚洲毒株和美国毒株进化上较为接近,而欧洲毒株位于另一个分支,所测毒株与中国参考毒株处于亚-美型毒株分支中,位置相对较为集中。所测35个HE序列中,有34个没有发生插入或缺失突变,来自宁夏的BCoV/NX13/CHN/2023毒株其HE基因存在12个核苷酸的插入突变,证实了BCoV HE基因插入变异株在我国的存在。基因重组分析显示,该毒株与BCoV/HeB120/CHN/2021的HE基因可能发生了重组,预测重组值分别为0.797和0.759。说明了我国部分省份临床发病牛群BCoV感染及BCoV HE基因的遗传变异,为明晰我国BCoV流行毒株分子特征提供参考。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 HE基因 系统进化分析 变异株 基因重组
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牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用
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作者 黄金 李思远 +6 位作者 毛立 蔡旭航 谢玲玲 王府 周华 李基棕 李彬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2050-2060,共11页
为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫Hi... 为建立一种检测牛冠状病毒(BCoV)的抗体间接ELISA检测方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白,并作为包被抗原,建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法,应用于临床样品检测。结果显示,S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫High5细胞培养基上清,经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好;经反应条件优化,确定抗原包被浓度为0.125μg·mL^(-1),血清稀释度为1∶200;采用1%明胶,于37℃封闭3 h;血清样品于37℃孵育30 min;酶标二抗的稀释度1∶25000,37℃孵育45 min;37℃避光显色13 min;临界值为0.297;经检验,该方法特异性良好;批间及批内变异系数均小于10%。当临界值为OD_(450 nm)为0.297时,若以IFA为标准,ELISA的敏感性为96.88%(31/32),特异性为87.50%(7/8),与IFA具有很强的一致性(κ=0.844,P<0.01);若以中和试验为标准,ELISA的敏感性为100.00%(31/31),特异性为88.89%(8/9),与血清中和试验具有很强的一致性(κ=0.925,P<0.01)。采用该方法对303份牛血清进行检测,BCoV阳性率为74.91%。由此说明,本研究建立的ELISA方法特异性强,敏感性高,重复性好,可用于BCoV的血清学调查和临床诊断,并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 昆虫杆状病毒表达系统 S1蛋白 间接ELISA
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一株牛呼吸道冠状病毒的分离鉴定及部分生物学特征
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作者 班玛王清 陈曦 +3 位作者 岳怡 苏玉蓉 岳华 汤承 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3094-3104,共11页
牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒(BRCV)并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子,经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种... 牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒(BRCV)并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子,经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种人盲肠腺癌细胞(HCT-8),分离纯化后,对引起细胞病变的病毒分离株的S和HE基因进行序列测定和系统发育分析,并将病毒分离株接种BALB/c小鼠进行致病性研究。结果显示,成功分离到1株致细胞病变的毒株,经荧光定量PCR、间接免疫荧光和电镜观察鉴定为BRCV,蚀斑纯化后计算病毒TCID_(50)为10^(-8.46)·0.1 mL^(-1)。S基因和HE基因序列分析表明两种基因均发生重组事件;S蛋白具有2个独特的氨基酸突变(A33G和A975V),分别位于S1亚基的受体结合域和S2亚基;HE基因具有2个独特的氨基酸突变(L235R和L365F),分别位于凝集素域和近膜端域。分离株对4周龄BALB/c小鼠具有较强的致病性,能够引起小鼠呼吸加快和腹泻等临床症状,剖检和组织病理学显示肺和肠道出血,病毒主要分布在肺和肠组织,以肺组织中病毒载量最高。本研究首次在国内肉牛中分离到1株BRCV,S和HE基因分子有独特氨基酸突变,成功建立了小鼠感染模型,为进一步研究BCoV的生物学特性和遗传进化提供了参考。 展开更多
关键词 牛呼吸道冠状病毒 S基因 HE基因 小鼠 致病性
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内蒙古牛冠状病毒全基因组测序与遗传进化分析
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作者 其勒木格 王旭芬 +4 位作者 侯琳 张嘉磊 马聿田 张志丹 周伟光 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4984-4995,共12页
【目的】了解内蒙古地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)流行毒株的全基因组特征和遗传进化情况,为有效防控BCoV感染提供参考。【方法】本研究对疑似感染BCoV的犊牛脾脏进行宏病毒组测序和步移RT-PCR扩增,获得BCoV全基因组序列,并... 【目的】了解内蒙古地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)流行毒株的全基因组特征和遗传进化情况,为有效防控BCoV感染提供参考。【方法】本研究对疑似感染BCoV的犊牛脾脏进行宏病毒组测序和步移RT-PCR扩增,获得BCoV全基因组序列,并对其进行生物信息和遗传进化分析。利用Oligo 7.0软件设计特异性引物扩增S基因,并对其进行遗传进化、氨基酸序列变异、抗原表位预测及三级结构预测分析。【结果】本研究从疑似感染BCoV的犊牛脾脏中成功获得大小为30971 bp的BCoV全基因组序列,NCBI登录号为PP352170.1,该全基因组核苷酸序列与BCoV爱尔兰株ABGEB0-62相似性最高,为99.2%,并与该株亲缘关系最近,同时与BCoV法国株BCoV_2014_13和挪威株Nes_2012-01-03属于同一进化分支;扩增出的S基因核苷酸长度为4092 bp,与BCoV爱尔兰株ABGEB0-62 S基因序列亲缘关系最近,处于同一进化分支,但核苷酸序列与BCoV内蒙古株NMG1 S基因相似性最高,为99.4%;S基因编码的氨基酸与Mebus株比对发现,有15个氨基酸变异位点(S1亚基12个,S2亚基有3个),其中变异的氨基酸残基154、260、499-520、718、1192、1344位氨基酸处于抗原表位区,并导致S蛋白三级结构发生改变。【结论】本研究利用宏病毒组测序和基因组5′-端步移RT-PCR法获得内蒙古BCoV株全基因组序列,其S蛋白抗原表位区氨基酸位点发生变异和三级结构改变,预示S蛋白抗原性发生了改变;S1亚基的多态性区域氨基酸位点的变异预示S蛋白的致病性发生变化。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(BCoV) 全基因组 宏病毒组 S基因 遗传进化
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新疆南疆牛冠状病毒BCV-Aks-01株分离及基因型鉴定 被引量:5
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作者 张莹钰 张迎春 +5 位作者 王青青 胡建军 王娜 彭安业 张婉琪 崔鑫 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期12-14,18,F0002,共5页
将疑似感染牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)病死犊牛的粪便样品,滤菌处理后接种于HCT-8细胞,盲传数代,出现细胞病变后收获细胞液。提取病毒RNA,依据NCBI登录的牛冠状病毒高度保守N基因设计1对特异性引物,对N基因进行RT-PCR扩增、... 将疑似感染牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)病死犊牛的粪便样品,滤菌处理后接种于HCT-8细胞,盲传数代,出现细胞病变后收获细胞液。提取病毒RNA,依据NCBI登录的牛冠状病毒高度保守N基因设计1对特异性引物,对N基因进行RT-PCR扩增、测序及序列分析。结果显示,BCV-Aks-01毒株与牛冠状病毒参考株N基因核苷酸同源性为97.5%~98.6%,同BCoV参考毒株Mebus同源性为97.8%,N基因遗传进化树表明,BCV-Aks-01毒株与BCoV参考株亲缘关系较近,处于遗传进化树中同一分支上,属于冠状病毒Betacoronavirus,证实该分离株为牛冠状病毒。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 病毒分离 鉴定 N基因
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一例牛冠状病毒引起犊牛急性腹泻的分子生物学诊断与治疗
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作者 聂江江 雷祖建 +3 位作者 吴虹瑾 胡颖 邬向东 吴欢生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第20期81-85,128,共6页
2020年8月初,江西省宜春市某牛场4~5月龄犊牛暴发以急性腹泻、食欲减退并伴随便血为主要症状的传染性疾病,使用抗菌药物和驱虫药未能有效控制病情。为了确定腹泻的病原及其分子特征,试验无菌采集腹泻犊牛粪便样本,对牛冠状病毒(BCoV)、... 2020年8月初,江西省宜春市某牛场4~5月龄犊牛暴发以急性腹泻、食欲减退并伴随便血为主要症状的传染性疾病,使用抗菌药物和驱虫药未能有效控制病情。为了确定腹泻的病原及其分子特征,试验无菌采集腹泻犊牛粪便样本,对牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRoV)、口蹄疫(FMDV)病毒、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛流行热病毒(BEFV)5种常见导致牛腹泻的病原进行PCR检测,并对检测到的病原PCR产物进行序列分析,最后选用适宜的方案进行对症治疗,观察治疗效果。结果表明:腹泻犊牛粪便样本均检测出BCoV,其他病原均未检出。所测序列与BCoV N基因的核苷酸相似性在97.2%以上,将检出的病原命名为BCoV-JX。BCoV-JX株N基因的氨基酸序列与12株BCoV参考株的N基因氨基酸序列相似性均在98.9%及以上,其中与美国牦牛源分离株7-16-23、中国牦牛源分离株SWUN/A1/2018和我国奶牛源分离株DB2的N基因氨基酸序列相似性最高,均为99.8%。BCoV-JX株与美国牦牛源分离株7-16-23和我国牦牛源分离株SWUN/A1/2018处于同一分支上,亲缘关系较近。经补液、注射中药强心剂和抗菌药物,病牛逐渐康复,未见新增病例。说明导致该养牛场犊牛腹泻的病原为BCoV,该BCoV流行株可能由牦牛源BCoV变异而来。 展开更多
关键词 犊牛 急性腹泻 牛冠状病毒 N基因 进化分析 变异
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牛冠状病毒感染新生犊牛肺上皮细胞模型的建立
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作者 陈秋会 蒋珊珊 +4 位作者 高萌萌 夏立勇 张国华 任亚超 周玉龙 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3577-3584,共8页
[目的]牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是犊牛腹泻和上呼吸道疾病的主要病原,目前缺少敏感的适合BCoV体外培养的本动物细胞,限制了BCoV致病机制的深入研究。因此,本研究拟从犊牛肺脏组织中分离出牛肺上皮细胞(bovine lung epitheli... [目的]牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是犊牛腹泻和上呼吸道疾病的主要病原,目前缺少敏感的适合BCoV体外培养的本动物细胞,限制了BCoV致病机制的深入研究。因此,本研究拟从犊牛肺脏组织中分离出牛肺上皮细胞(bovine lung epithelial cell,BLEC)建立BCoV体外感染本动物细胞模型。[方法]采用胰蛋白酶和Ⅰ型胶原蛋白酶两步酶消化法对新生犊牛肺脏组织进行肺上皮细胞初步提取,再利用上皮细胞贴壁时间不同的差异贴壁法纯化BLEC。通过间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)检测纯化后细胞中标志细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK-18)的表达来鉴定BLEC,并通过PCR方法对细胞进行病原纯净性检测,包括牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)、BPIV5、牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、BCoV和支原体(Mycoplasma)。通过PCR和IFA检测BCoV对BLEC的易感情况,并绘制BCoV在BLEC上的一步生长曲线。[结果]分离纯化培养的BLEC形态均匀稳定、呈菱形或砖块状,无常见病原BRV、BVDV、BPIV3、BPIV5、IBRV、BCoV和支原体污染,上皮细胞标志CK-18呈阳性表达。犊牛腹泻来源的BCoV HLJ-325毒株感染BLEC 24 h后可观察到明显的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);PCR能扩增出BCoV N基因;IFA结果显示,BCoV感染BLEC呈现特异性红色荧光。通过实时荧光定量PCR检测BCoV含量建立病毒生长曲线,BCoV在感染BLEC后20 h时病毒载量最高,为4.46×10^(5)拷贝/mL。[结论]本研究成功分离制备了BLEC,证明BCoV易感染BLEC,构建了BCoV体外感染BLEC模型,为研究BCoV引起牛呼吸道疾病的致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(BCoV) 牛肺上皮细胞 分离纯化 感染模型
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牛冠状病毒S和HE蛋白研究进展
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作者 靳双媛 杜家伟 +2 位作者 王雪妍 郭雪莲 许立华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3118-3127,共10页
牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是引起新生犊牛腹泻、牛的呼吸道感染和成年牛冬痢的一种病原,主要通过粪-口感染和呼吸道气溶胶传播。研究表明,BCoV在亚临床感染的成年牛体内可持续存在,这可能是BCoV在牛群中广泛存在且能长期循... 牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是引起新生犊牛腹泻、牛的呼吸道感染和成年牛冬痢的一种病原,主要通过粪-口感染和呼吸道气溶胶传播。研究表明,BCoV在亚临床感染的成年牛体内可持续存在,这可能是BCoV在牛群中广泛存在且能长期循环的原因。因此,BCoV的流行会对集约化牛场造成巨大的经济损失,BCoV的防控形势极其严峻。BCoV S蛋白包含主要的抗原位点,可与宿主表面的唾液酸(SA)结合,且S蛋白参与病毒与宿主细胞的吸附和膜融合过程,能促进宿主产生有效的中和抗体。BCoV HE蛋白具有乙酰酯酶活性和血凝活性,能与S蛋白协同附着于细胞表面并启动感染。S和HE蛋白均在病毒的组织或宿主嗜性及毒力等方面发挥重要作用,这些作用也为进一步开展BCoV病原研究及后续疫苗和药物的研制提供参考。笔者重点阐述了BCoV S和HE蛋白的分子结构及功能,以及BCoV基于S和HE蛋白的受体识别作用(包括利用N-乙酰-9-O-乙酰神经氨酸为糖结合受体,利用人类白细胞抗原Ⅰ类分子为蛋白结合受体)。受体识别是冠状病毒感染和致病的重要决定因素,也是宿主免疫监视和人类干预策略最重要的靶标之一。因此,充分了解BCoV S和HE蛋白的结构功能和受体识别作用对于了解病毒的致病机制及抗病毒药物、疫苗的研发具有重要意义。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(BCoV) S蛋白 HE蛋白 受体识别
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1株牛源冠状病毒的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 刘文锴 汪萍 +8 位作者 金映红 薛晶 李月 梁纤纤 李晓卓 韩翔舒 郑启铭 蒋松 夏俊 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3100-3108,共9页
【目的】获得新疆地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)毒株,探究BCoV体外分离的最佳条件,了解BCoV新疆株的遗传进化情况,为BCoV疫苗候选株提供研究基础。【方法】通过RT-PCR对来自新疆地区7个牛场的腹泻犊牛小肠及其内容物(n=185)... 【目的】获得新疆地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)毒株,探究BCoV体外分离的最佳条件,了解BCoV新疆株的遗传进化情况,为BCoV疫苗候选株提供研究基础。【方法】通过RT-PCR对来自新疆地区7个牛场的腹泻犊牛小肠及其内容物(n=185)进行BCoV检测,将阳性样本经过处理后接种HCT-8细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和透射电镜对分离的病毒进一步鉴定,通过Reed-Muench法测定分离株的半数组织培养感染剂量(TCID50),将分离毒株进行全基因组测序,并对测序结果进行遗传进化分析。【结果】腹泻样品BCoV检出率为64.9%,接种HCT-8细胞后成功分离到1株BCoV,命名为XJ-SHZ-37(GenBank登录号:OR750853);IFA可观察到孵育病毒的细胞有绿色的特异性荧光,而对照组没有;Western blotting检测结果显示,该分离株与BCoV N蛋白多克隆抗体发生特异性反应;透射电镜可观察到呈皇冠状的病毒颗粒;Reed-Muench法测定分离株的TCID50为10-7.9/0.1 mL;基因组测序及遗传进化结果表明,XJ-SHZ-37与从牛中分离到的冠状病毒科冠状病毒属的BCoV分离株ZJNB2106相似性最高。【结论】新疆地区7个牛场有较高的BCoV检出率,成功分离出1株能稳定遗传且能与BCoV N蛋白多克隆抗体特异性结合的分离株,该分离株有较高的病毒滴度,且通过遗传进化关系表明与中国牛源毒株ZJNB2106株进化亲缘关系最近。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(BCoV) 分离鉴定 全基因测序 遗传进化
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牛冠状病毒、牛轮状病毒和致病性大肠杆菌混合感染致犊牛腹泻的研究
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作者 曹兴旺 付祥益宁 +3 位作者 陈扬 高恒赟 王丹 蒋松 《中国牛业科学》 2024年第2期51-58,62,共9页
为了明确新疆石河子某规模化奶牛场犊牛腹泻病死率较高的原因。本研究对腹泻犊牛的粪样及病死犊牛肠道内容物进行病原检测,并对分离菌株进行毒力基因检测、耐药基因检测、动物致病性试验及药敏试验。最终明确病因主要由牛冠状病毒(BCoV... 为了明确新疆石河子某规模化奶牛场犊牛腹泻病死率较高的原因。本研究对腹泻犊牛的粪样及病死犊牛肠道内容物进行病原检测,并对分离菌株进行毒力基因检测、耐药基因检测、动物致病性试验及药敏试验。最终明确病因主要由牛冠状病毒(BCoV)和牛轮状病毒(BRV)和大肠杆菌混合感染引起。药敏试验表明,分离到的大肠杆菌对28种抗生素产生了严重的耐药,仅对多粘菌素和呋喃妥因敏感,并且发现该菌同时携带2种毒力基因和10种耐药基因。本研究分离的一株大肠杆菌携带有丰富的耐药基因,具有多重耐药性,为该奶牛场上临床治疗加大了难度。而本试验结果为该养殖场提供科学的临床药物指导,为该牛场治疗此次犊牛腹泻提供了依据,同时为新疆犊牛腹泻混合感染的防控提供了病例参考和技术资料。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 牛轮状病毒 牛冠状病毒 大肠杆菌 混合感染
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致牛腹泻主要病毒四重PCR检测方法的建立与初步应用
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作者 李沫萱 钟林翰 +6 位作者 韩言言 张晓梅 刘伊湄 张梦媛 王美 徐义刚 李园 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期67-75,共9页
为了建立能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)和牛细小病毒(BPV)的四重PCR方法,试验首先分别以BVDV 5′-UTR、BCoV Nsp10、BRV VP6和BPV VP2为靶基因设计检测引物,然后通过优化退火温度、Mg^(2+)体积... 为了建立能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)和牛细小病毒(BPV)的四重PCR方法,试验首先分别以BVDV 5′-UTR、BCoV Nsp10、BRV VP6和BPV VP2为靶基因设计检测引物,然后通过优化退火温度、Mg^(2+)体积、rTaq酶体积、dNTPs Mix体积和上下游引物体积建立致牛腹泻主要病毒的四重PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、灵敏度和重复性评价,最后应用该方法对临床样本进行检测。结果表明:所建立的四重PCR方法的最优退火温度为55.2℃,最优Mg^(2+)体积为3.0μL,最优rTaq酶体积为0.8μL,最优dNTPs Mix体积为2.5μL,BVDV、BRV、BcoV和BPV对应基因最优的上下游引物分别为1.3μL/1.3μL、0.7μL/0.7μL、1.3μL/1.3μL和0.8μL/0.8μL。该方法仅对靶标病毒检测为阳性,对其他牛源病毒[牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)]和口蹄疫病毒(FMDV)灭活疫苗检测均为阴性;对BVDV、BCoV、BRV和BPV的最低检出限分别为1.0×10^(3)copies/μL、1.0×10^(3)copies/μL、1.0×10^(4)copies/μL和1.0×10^(3)copies/μL;对3个批次样本的各个重复均能扩增出目的基因;可准确检测出牛粪便样本组合中已知的病毒;对临床样本中4种病毒的检出率与商品化病毒核酸检测试剂盒的检测结果具有较好的一致性。说明本研究建立的致牛腹泻主要病毒四重PCR检测方法能同时检测BVDV、BCoV、BRV和BPV,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于临床样本的检测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 牛轮状病毒 牛细小病毒 四重PCR检测方法
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河南省2021-2022年犊牛腹泻主要病原流行情况调查
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作者 王向佩 周峰 +8 位作者 薛永康 秦帅 张洋 闫磊 闫跃飞 刘晓曼 孙贝贝 谷淑华 张震 《中国奶牛》 2024年第2期25-30,共6页
为了解河南省2021-2022年犊牛腹泻病原流行情况,利用犊牛腹泻病原微生物核酸检测试剂盒(荧光PCR法)分别对2021年河南省20余家牧场送检的170份犊牛腹泻样品,2022年送检的112份犊牛腹泻样品进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)及大肠杆... 为了解河南省2021-2022年犊牛腹泻病原流行情况,利用犊牛腹泻病原微生物核酸检测试剂盒(荧光PCR法)分别对2021年河南省20余家牧场送检的170份犊牛腹泻样品,2022年送检的112份犊牛腹泻样品进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)及大肠杆菌K99^(+)(E.coli K99^(+))荧光PCR检测,并对检测结果采用SPSS 27.0软件进行数据统计以及显著性差异分析(Pearson卡方检验)。结果显示:2022年BRV检出率为50.00%、BCoV检出率为41.00%,相比2021年均显著增高(P<0.01),E.coli K99^(+)检出率与上一年相比基本持平,无明显差异(P>0.05),说明2022年BRV、BCoV流行情况愈加严重。进一步分析发现,2022年腹泻病原单一感染检出率为26.79%,其中主要是BRV感染,与2021年单一感染检出率25.29%基本持平,差异不显著(P>0.05)。2022年腹泻病原混合感染检出率为35.71%,且主要以BRV、BCoV混合感染为主。相比2021年的12.94%明显上升,差异显著(P<0.01),说明2022年混合感染情况愈加严重。建议针对河南省腹泻流行情况有针对性地开展防控与净化。本检测初步摸清了2021年、2022年河南省不同地区犊牛腹泻主要病原流行情况,可为河南省制定犊牛腹泻病综合防控措施提供数据支撑。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 病原检出率 牛轮状病毒 牛冠状病毒 牛大肠杆菌K99^(+)
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牛病毒性腹泻病毒与冠状病毒混合感染的PCR诊断
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作者 李云龙 李召英 《中国乳业》 2024年第7期49-53,共5页
[目的]建立1种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与冠状病毒(BCoV)混合感染的PCR诊断方法。[方法]选择山东省某奶牛场内发生BVDV和BCoV混合感染的98头奶牛作为研究对象,采集其粪便和组织脏器,提取病毒基因组RNA,经反转录后,设计引物,进行PCR检测,... [目的]建立1种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与冠状病毒(BCoV)混合感染的PCR诊断方法。[方法]选择山东省某奶牛场内发生BVDV和BCoV混合感染的98头奶牛作为研究对象,采集其粪便和组织脏器,提取病毒基因组RNA,经反转录后,设计引物,进行PCR检测,分析检测情况及特异性、重复性。[结果]BVDV和BCoV混合感染病例40份(40.82%),其中粪便样本33份(40.27%),组织脏器样本7份(43.75%)。BVDV单一感染病例27份(27.55%),其中粪便样本21份(25.61%),组织脏器样本6份(37.50%)。BCoV单一感染病例32份(32.65%),其中粪便样本28份(34.15%),组织脏器样本4份(25.00%)。[结论]本研究中BVDV和BCoV混合感染的PCR诊断方法准确,具有良好的特异性和重复性,为今后临床正确诊断这两种病毒提供参考,也为后续精准科学防控奠定基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 冠状病毒(BCoV) PCR 诊断
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牦牛腹泻病毒BVDV、BCV、BRV流行病学调查 被引量:11
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作者 赵霞玲 牛家强 +4 位作者 次仁央金 次仁央宗 索朗卓嘎 温东旭 索朗斯珠 《高原农业》 2020年第3期298-302,共5页
引起牛腹泻性病毒病的病原主要有牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCV),牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV),牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)。该病在临床上主要表现为腹泻,严重脱水,呕吐。为了解西藏林芝市波密县牦... 引起牛腹泻性病毒病的病原主要有牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCV),牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV),牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)。该病在临床上主要表现为腹泻,严重脱水,呕吐。为了解西藏林芝市波密县牦牛腹泻性病毒病(BCV、BRV、BVDV)的流行现状,主要采用胶体金免疫层析技术法(GICA)、酶联免疫吸附法(ELISA)分别对210份腹泻牦牛血样、粪便进行了BCV、BRV抗原检测及BVDV抗体检测。结果显示,从210份待检样品中分别检出BCV、BRV抗原阳性75份、0份,其抗原阳性率分别为35.70%、0%;BVDV抗体阳性165份,抗体阳性率为78.60%,且平均抗体含量为60.13 pg/mL,中位数值为64.79,最低含量为11.68 pg/mL,最高含量为74.45 pg/mL,68.57%的样品抗体浓度大于55 pg/mL。结果表明,波密县牦牛群体中存在BCV、BVDV感染,应引起重视,进一步加强对牦牛腹泻性病毒病的防控。 展开更多
关键词 牦牛 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 牛轮状病毒 流行病学调查
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