新生大鼠原代心肌细胞分离方法的改进

目的对传统的原代乳鼠心肌细胞分离方法进行改良,获得活性好、纯度高、反应性好的原代乳鼠心肌细胞。方法利用断头开胸取心法取新生24 h内的Wistar大鼠心肌组织,无菌剪碎后用0.25%不含EDTA胰酶混合II型胶原酶消化法,采用自制消化组合装置分离消化细胞。逐日在倒置相差显微镜下观察细胞状态。采用心肌细胞特异性蛋白α-横纹肌肌动蛋白（α-actin）单克隆抗体对培养的心肌细胞进行免疫荧光鉴定。另外使用异丙肾上腺素和去甲肾上腺素作用于细胞,观察细胞反应情况。结果培养后24 h即可观察到部分细胞搏动,可初步确定为心肌细胞;48 h后细胞逐渐展开,连续观察20 d,发现心肌细胞在3～14 d期间搏动频率与形态无明显变化。对比观察发现断头开胸取心法获取的原代心肌细胞中红细胞数量明显减少。免疫荧光鉴定发现,本方法获得的心肌细胞纯度高达95%。此外,分离的原代乳鼠心肌细胞对异丙肾上腺素和去甲肾上腺素反应灵敏。结论断头开胸取心法配以混合酶液消化心脏组织分得的原代乳鼠心肌细胞反应性好、纯度高、有活力,可满足大多数实验的要求。