蟾皮中蟾毒配基类成分的分离与鉴定

目的研究中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizansCantor)皮中的蟾毒配基类成分。方法利用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备高效液相色谱、重结晶等手段分离纯化蟾皮中的蟾毒配基类成分,根据化合物的理化性质和各种波谱学数据鉴定其化学结构。结果分离得到11个蟾毒配基类化合物,分别鉴定为脂蟾毒配基(resibufogenin,1)、华蟾毒精(cinobufagin,2)、蟾毒灵(bufalin,3)、远华蟾毒精(telocinobufagin,4)、蟾毒它灵(bufotalin,5)、去乙酰华蟾毒它灵(desace-tylcinobufotalin,6)、嚏根草苷元(hellebrigenin,7)、沙蟾毒精(arenobufagin,8)、日蟾毒它灵(gam-abufotalin,9)、11β-羟基脂蟾毒配基(11β-hydroxylresibufogenin,10)、华蟾毒它灵(cinobufotalin,11)。结论化合物10和11为首次从中华大蟾蜍皮中分离得到。

本底校正分光光度法测定蟾酥及其制剂中蟾毒内酯的含量

本文利用蟾毒内酯类成分结构相似，其乙醇溶液加碱水解导致其紫外吸收光谱发生显著变化，可在波长２９７ｎｍ处测定水解前后的吸收度差值△Ａ与脂蟾毒配基的浓度呈线性关系，据此对蟾酥及其制剂（牙痛－粒丸、六神丸、喉症丸）中蟾毒内酯进行了定量，并对各处方中的其它成分进行了试验，排除了水解对其影响，当碱浓度为４％，在室温下水解４０ｍｉｎ的△Ａ稳定，测定方法简单、结果准确。

安替可胶囊的质量标准研究

目的：建立安替可胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法对方中的当归、蟾皮进行定性鉴别；采用HPLC法对制剂中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基进行定量分析。结果：薄层色谱鉴别分离效果好，专属性强；华蟾酥毒基在50-250mg·L-1范围内线性关系良好（r=0．9999）；脂蟾毒配基在44-220mg·L-1范围内线性关系良好（r=0．9999）；华蟾酥毒基平均加样回收率为99．79％，RSD％=0．56％；脂蟾毒配基平均加样回收率为100．08％，RSD％=0．47％。结论：该方法简单、准确、专属性强、重复性好，可有效控制安替可胶囊的质量。

花背蟾蜍耳后腺分泌物化学成分的研究[Ⅰ 脂溶性部分]

花背蟾蜍的耳后腺分泌物为黄色浆液,它的脂溶性部分通过薄层层析发现有四种蟾蜍配基,较蟾酥为少,对蟾酥的脂溶性部分用硅胶 G 以干法柱层析洗脱,获得两种结晶,经薄层层析,紫外和核磁共振光谱法鉴定分别确定为残余蟾蜍配基和华蟾蜍它灵。它们也含于花背蟾蜍的耳后腺分泌物中。

蟾毒配基磺酸化及基于自制串联固相萃取对磺酸化产物富集的研究

关于抗癌活性的蟾蜍二烯内酯的结构修饰化合物已达到100多个。甾体母核3位磺酸化的蟾蜍二烯内酯是从蟾蜍皮中分离得到的一类具有抗癌活性的微量成分,但目前尚无关于蟾蜍二烯内酯磺酸化修饰的报道。该文以沙蟾毒精为例,首次发展了一种高效的3位磺酸化沙蟾毒精的合成方法,对目标产物进行了结构鉴定。基于自制亲水性材料Click TE-Cys,发展了反相/亲水串联固相萃取的反应产物后处理方法,用于磺酸化沙蟾毒精的富集。依此法对总蟾毒配基进行了磺酸化和目标产物的富集及LC-MS定性分析,实现了大量具有潜在抗癌活性的新化合物的制备和富集,为进一步实现高效低毒化合物的筛选提供了物质基础。

六应丸中脂蟾毒配基的HPLC测定法

用反相HPLC法测定六应丸中脂蟾毒配基的含量。样品用氯仿抽提,外标峰面积标准曲线法定量。色谱柱:ODS,60％甲醇为流动相。检测波长298nm,回收率97.7％,CV=0.5％。

反相高效液相色谱法测定六神丸中蟾毒内酯的含量

本文首次采用ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定六神丸中蟾毒内酯的含量，固定相为Ｓｐｈｅｒｉ－５，２２０ｍｍ×４．６ｍｍ，ＯＤＳ柱；流动相为甲醇－水（６０：４０）；流速１ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长２９９ｎｍ；外标法；回收率为９８．４％；在１８．９～９４．５μｇ／ｍｌ浓度范围内线性良好，ｒ＝０．９９９４。

HPLC法同时测定蟾酥中11个蟾毒配基成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定蟾酥中11个蟾毒配基成分(伪异沙蟾毒精、日蟾毒它灵、沙蟾毒精、蟾蜍它里定、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、脂蟾毒精、南美蟾毒精、蟾毒灵、脂蟾毒配基和华蟾酥毒基)的含量。方法:采用Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18色谱柱(150 mm×3.0 mm 2.7μm),以0.3%乙酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为296 nm。结果:11个蟾毒配基成分的线性范围分别为2.024~20.24μg·mL^(-1)(r=0.9998)、18.44~184.4μg·mL^(-1)(r=0.9999)、12.40~124.0μg·mL^(-1)(r=0.9995)、3.720~37.20μg·mL^(-1)(r=0.9995)、10.28~102.8μg·mL^(-1)(r=0.9998)、22.16~221.6μg·mL^(-1)(r=0.9997)、3.280~32.80μg·mL^(-1)(r=0.9994)、5.440~54.40μg·mL^(-1)(r=0.9997)、28.84~288.4μg·mL^(-1)(r=0.9998)、32.76~327.6μg·mL^(-1)(r=0.9997)、71.28~712.8μg·mL^(-1)(r=0.9996),方法的精密度(RSD≤1.3%)、重复性(RSD≤4.4%)、稳定性(RSD≤3.3%)良好,平均加样回收率为95.6%~102.4%,RSD为0.98%~4.4%。18批次蟾酥样品中伪异沙蟾毒精、日蟾毒它灵、沙蟾毒精、蟾蜍它里定、远华蟾蜍精、蟾毒它灵、脂蟾毒精、南美蟾毒精、蟾毒灵、脂蟾毒配基和华蟾酥毒基的含量范围分别为0.2850~1.018、11.89~14.12、9.246~10.98、2.260~2.739、6.813~8.093、15.33~18.20、0.5280~1.178、1.492~2.403、17.79~26.17、18.75~29.94、43.12~60.81 mg·g^(-1)。聚类分析结果表明,18批次蟾酥样品可分为2类。结论:该方法简便易行,重复性好,灵敏度高,可用于蟾酥的质量控制和品质评价。

蟾酥的研究进展

蟾酥由蟾蜍表皮腺体的分泌物经干燥而成。作为一种传统中药,其所含化学成分复杂,能清热解毒、醒脑开窍、化结溃坚;具有降压、增强心肌收缩力、增加冠状动脉流量、抗肿瘤、麻醉等药理作用。临床中广泛用于心血管系统、呼吸系统、五官、外科等疾病的治疗;作为有毒中药,其量效关系、毒性成分、中毒剂量和毒理机制等问题亦不容忽视。试从蟾酥的化学成分、药理作用及其机制、毒理作用、不良反应、炮制工艺、药动学等方面对其进行初步总结,为深入研究蟾酥的药理作用及复方制剂提供参考。

利用UPLC-TQ-MS比较蟾酥鲜品和蟾酥商品化学成分

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans或黑框蟾蜍B.melanostictus等近缘种的耳后腺分泌的白色浆汁加工而成,近年来多用于治疗各种癌症,有一定的攻毒抗癌、消肿止痛作用。研究表明其主要抗肿瘤成分为蟾蜍二烯内酯类。蟾蜍二烯内酯有游离型和结合型2种结构。该文通过超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC-TQ-MS)对中华大蟾蜍的蟾酥鲜品中蟾蜍二烯酸内酯类成分进行研究。采用UPLC-TQ-MS的正离子多反应监测(MRM)模式。色谱条件:ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),柱温35.0℃,流速0.4 m L·min-1,流动相0.1%甲酸超纯水溶液-乙腈溶液。最终结合相关文献推导出蟾酥鲜品的37种蟾蜍二烯内酯成分,其中26种为游离型结构,11种为结合型结构。与蟾酥商品比较,二者之间有18种化合物存在显著差异,研究发现蟾酥的部分化学成分经加工处理后有很大的变化,7种结合型蟾蜍二烯内酯大量减少,11种游离型蟾蜍二烯酸内酯含量也随之明显改变,可能是在加工处理过程中蟾蜍二烯酸内酯部分结合型转化成了游离型。

高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析蟾酥有效成分

目的采用高效液相色谱-高分辨电喷雾飞行时间质谱(HPLC-DAD/ESI-TOF-MS)联用技术,对蟾酥中的部分有效成分进行初步分析,探讨HPLC-DAD/ESI-TOF-MS联用技术作为蟾酥质量控制方法的可行性。方法采用Agilent C18色谱柱,以乙腈和水(含体积比0.1%醋酸)为流动相,采用梯度洗脱,流速为0.8mL·min-1,室温,DAD检测器检测波长为291nm,ESI-TOF-MS采用正离子模式。通过HPLC-ESI-TOF-MS在线测定部分化合物的精确分子量,结合文献报道,对蟾酥毒素进行鉴别。结果结合文献报道,在色谱峰当中对12个主要色谱峰进行鉴定。结论高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用技术是蟾酥质量控制的有效方法。

灵猫香解毒丸的质量标准研究

目的:制定灵猫香解毒丸的含量测定标准。方法:采用反相高效液相色谱法测定蟾酥中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基。结果:华蟾酥毒基和酯蟾毒配基分别在48.84～784.44,50.28～804.48ng与峰面积呈良好线性关系,平均回收率100.5%,100.3%。结论:本实验定量方法简便、实用,重复性好,能够较好控制灵猫香解毒丸的质量。

蟾酥鲜浆中蟾毒配基类成分的动态变化规律探索

目的:研究蟾酥鲜浆在不同温度放置时蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基随放置时间延长的变化规律,以指导蟾酥的加工。方法:采用HPLC测定在常温、冷藏和冷冻条件下贮存不同时间的蟾酥鲜浆中蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量。结果:常温和冷藏下贮存,3种成分的含量随放置时间的延长而升高,前24 h内升高的幅度较大,3种成分间的组成比例亦发生较大的变化。结论:蟾酥鲜浆加工成蟾酥前应先在常温下放置>24 h,再进行干燥加工。

不同产地中华大蟾蜍浆液中蟾毒配基类成分含量对比研究

目的调研不同产地中华大蟾蜍浆液有效成分含量差异,分析蟾酥药材的区域特征性。方法采用HPLC测定不同产地的蟾蜍浆液中7种主要活性成分含量,并采用层次聚类分析和雷达图探究样本的产地规律。结果不同产地蟾酥浆液中蟾毒配基类成分含量差异显著,华蟾酥毒基和酯蟾毒配基为华东地区蟾酥原料的主导成分,2种成分含量之和在6.95%~11.15%,而华中和西南地区2种成分含量之和在0.17%~4.17%;远华蟾蜍精和华蟾毒它灵为华中和西南地区的主导成分,2种成分含量之和在5.66%~11.37%,而华东地区2种成分含量之和在1.22%~2.26%。结论蟾酥原料质量主要受产地因素影响,该调研结果为完善蟾酥药材的质量控制提供参考。