基于高通量测序的北柴胡根转录组SSR位点信息分析

以北柴胡根为试材,采用高通量转录组测序方法,获得uingene序列信息,研究分析SSR分布、基元特征,设计、验证EST-SSR引物的有效性,为开发、丰富EST-SSR分子标记奠定基础。结果表明:从北柴胡根转录组中共筛选到31176个SSR位点,分布于21732条unigenes,出现的频率为20.08%,分布密度为3.20个/10 kb,主要重复基元类型以二核苷酸最为丰富,共21056个,占SSR位点总数的67.54%;其次是单核苷酸和三核苷酸,分别占总SSR的19.05%和12.07%;四核苷酸~六核苷酸重复基元数量均较少。不同核苷酸基序类型共有131种基元,重复基元次数在5~11次的数量最多,占SSR总数的91.7%,且长度基本小于15 bp,其中AT/AT和AC/GT这两种基元在二核苷酸中出现频率最高。2064条和1004条含有SSR位点的unigenes分别注释到GO和KEGG通路,获得注释的基因功能主要与基础代谢相关。从22090对具有潜在多态性的EST-SSR引物中,随机挑选20对引物对3个北柴胡种质DNA进行PCR扩增,扩增成功率最高达85%。北柴胡根转录组SSR位点丰富、可用性较强,将促进柴胡的种质资源评价及分子标记辅助育种等工作。

庆阳地区柴胡根腐病病原物的分离与鉴定

为明确引起柴胡根腐病的主要致病菌,有效防治柴胡根腐病,采用组织分离法对感染根腐病的柴胡病原菌进行分离纯化,按照离体根部接种法,采用刺伤和无刺伤接种两种方式进行致病性测定,结合形态学观察和分子生物学方法鉴定致病菌的种类。结果表明,庆阳地区柴胡根腐病致病菌主要有尼伦伯格镰刀菌、尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、锐顶镰刀菌和燕麦镰刀菌,且存在复合侵染的现象。在柴胡种植栽培过程中,尽量保持植株的完整性有利于降低柴胡根腐病发病率。

腐植酸水溶肥对柴胡Bupleurum chinense幼苗生长及其生理特性的影响

该研究以“中柴1号”为实验材料,应用盆栽方式研究腐植酸水溶肥对柴胡苗期生长及生理特性的影响。采用单因素试验设计,柴胡苗龄为60 d时分别设腐植酸水溶肥稀释倍数1200(T1)、1500倍液(T2)、1800倍液(T3)、2100倍液(T4)对幼苗进行处理,以清水为对照(CK),处理30 d后分析各处理对柴胡幼苗形态指标、生物量积累、根系活力、抗氧化酶活性、膜脂过氧化作用以及光合特性等的影响。结果表明:与CK相比,T3处理的株高、叶片数、根粗、根长分别显著增加了36.82%、37.03%、42.78%、22.38%,根鲜重、叶鲜重、根干重、叶干重相较CK分别极显著增加了90.36%、98.68%、123.84%、104.38%。此外,腐植酸水溶肥还增强柴胡幼苗根系2,3,4-氯化三苯四氮唑(TTC)还原活力,抑制丙二醛(MDA)含量,增加超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)及过氧化氢酶(CAT)等酶活性,增加叶绿素含量,提升Pn、Gs、Tr等光合参数。综上可知,施用腐植酸水溶肥1800倍液可显著促进柴胡幼苗生长、增强根系活力、提高幼苗抗逆能力、增强光合作用,该研究结果可为柴胡苗期施肥提供理论依据。

银州柴胡根的发育解剖学研究

为进一步揭示银州柴胡药用部位根的发生发育特点,以银州柴胡药用部位根为研究对象,采用常规石蜡切片结合荧光显微镜技术对银州柴胡根的发育解剖学进行了研究,为柴胡属药用植物的分类鉴定及有效成分积累的研究等提供科学依据。结果表明,(1)银州柴胡根顶端分生组织由原分生组织及其衍生的初生分生组织组成。原生分生组织细胞体积小、排列紧密、细胞质浓厚、细胞核大而明显,具有典型的分生组织的特点;(2)初生分生组织由根冠原、表皮原、皮层原和中柱原组成。在根发育过程中,表皮、皮层和维管柱共同组成其初生结构。银州柴胡根初生木质部为二原型或三原型,外始式;同时在根表皮细胞的径向壁观察到径向壁的细胞壁加厚;(3)在根次生生长过程中,位于初生木质部和初生韧皮部之间的原形成层恢复分裂能力产生维管形成层,维管形成层不断地向外产生次生韧皮部,向内产生次生木质部;同时位于根内皮层内方的中柱鞘细胞恢复分裂能力产生木栓形成层,木栓形成层向外形成木栓层,向内形成栓内层。在维管形成层和木栓形成层分裂的过程中,在次生韧皮部和中柱鞘组织中产生形态大小不同的分泌道,均为次生的裂生型分泌道。研究认为,银州柴胡根的结构类似于药典收录的北柴胡和红柴胡根的结构特点,但其根表皮细胞径向壁加厚、木纤维的分布、分泌道的大小和数量等有别于柴胡属其他植物,可作为柴胡属植物重要的分类鉴定依据。

促根肥料对柴胡苗期生长的影响

为了提高柴胡(Bupleurum chinense DC.)地下部分的产量,使用9种促根肥料对柴胡幼苗进行灌溉施肥处理,研究不同促根肥料对柴胡株高、根干重、叶绿素含量等18个农艺性状以及柴胡皂苷含量和产量的影响。结果表明,微补精力提高了地上部干重;根多乐抑制株高增长趋势,延缓了叶绿素含量的衰减和增长趋势;海博氏促长精华增加了株高,但抑制了株高的增长趋势;其中5种肥料降低了柴胡皂苷的产量。柴胡生产栽培中,合理地施肥抑制地上器官生长,促进根系生长和柴胡皂苷合成积累极为重要。

Auxin induces lateral root formation in Bupleurum: A heme oxygenase dependent approach

Objective: The content of saikosaponins in genus Bupleurum is increased with numbers of lateral root, but the genetic mechanisms are largely unknown. This study aims to identify the heme oxygenase(HO) gene family members of B. chinense and B. scorzonerifolium, and assess their role in the root development in Bupleurum.Methods: The gene sequences of HO family were selected from iso-seq full-length transcriptome data of B. chinense and B. scorzonerifolium, and were analyzed in physicochemical properties, conserved domains,motifs and phylogenetic relationship. In addition, the expression patterns of HO gene in different parts of roots were compared via transcriptome sequencing and qRT-PCR in the two species.Results: Five Bupleurum HO genes(BcHO1-BcHO5) belonging to the HO1 subfamily were identified from the transcriptome data, whereas the HO_(2) subfamily member was not identified. The expression levels of BcHO1 and BcHO_(2) were significantly higher than those of other three HO members in the transcriptome analysis. In addition, the expression profile of BcHO1 showed consistency with lateral root development in B. chinense and B. scorzonerifolium.Conclusion: Hos might participate in the auxin-induced morphogenesis of lateral roots. The yield of saikosaponin may be improved by manipulating expression of these genes.

柴胡 黄芩 炙甘草对小鼠CVB3心肌炎治疗作用的研究

目的 探讨单剂柴胡、黄芩、炙甘草对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。方法 用CVB3感染Balb/C小鼠造成病毒性心肌炎模型 ,分别用生理盐水、柴胡、黄芩、炙甘草灌胃治疗 ,观察病毒感染后不同时间点的心肌组织病理变化。结果 柴胡组小鼠在感染后第 5 ,7,10天心肌病理积分为 1.33±0 .82 ,1.6 0± 0 .6 3和 1.87± 0 .74 ,明显低于对照组 (2 .2 2± 1.37,3.2 7± 0 .96 ,2 .6 0± 1.0 6 ) (P <0 .0 5或 0 .0 1)。炙甘草组小鼠在感染后第 5 ,7天心肌病理积分为 1.2 6± 0 .88和 1.80± 0 .6 8,明显低于相应对照组 (P <0 .0 5或0 .0 1)。黄芩组小鼠在感染第 14 ,2 1天后心肌病理积分 (1.5 3± 0 .74 ,0 .80± 0 .5 6 )与对照组 (2 .33± 0 .98,1.4 0±0 .83)比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 单剂柴胡、黄芩。

小柴胡汤和柴胡—黄芩含药血清对CCl_4损伤肝细胞的影响

目的 建立CCl4肝细胞损伤模型 ,考察小柴胡汤及柴胡—黄芩配方含药血清对CCl4损伤肝细胞的保护作用。方法 制备小柴胡汤及柴胡—黄芩配方的大鼠含药血清 ,体外10mol·L-1CCl4诱导肝细胞损伤模型 ,观察体积分数为 0 1的含药血清对损伤肝细胞增殖率、GPT、细胞形态学以及凋亡率的影响。结果 与正常组比较 ,模型组肝细胞增殖率降低 (P <0 0 1) ,细胞培养上清液中GPT含量升高 (P <0 0 1) ;与模型组比较 ,小柴胡汤及柴胡—黄芩配方组的肝细胞增殖率提高 (P <0 0 1) ,细胞培养上清液中GPT含量降低 (P <0 0 1)。倒置显微镜和Giemsa染色观察到模型组肝细胞存在着明显的坏死和凋亡 ,小柴胡汤及柴胡—黄芩配方的凋亡细胞明显减少。与正常组比较 ,CCL4模型组细胞凋亡增高 (P <0 0 1) ;与模型组比较 ,柴芩组和小柴胡汤全方组的细胞凋亡率降低 (P <0 0 1)。结论 小柴胡汤及柴胡—黄芩配方含药血清对体外CCl4诱导的肝细胞损伤有保护作用。CCl4引起的肝损伤同时存在着明显的凋亡和坏死 ,小柴胡汤及柴胡 -黄芩配方可能具有抗CCl4诱导的肝细胞凋亡的作用。

柴芩合煎液与分煎液对LPS诱导的大鼠发热模型的影响

柴胡、黄芩是古方小柴胡汤“和解少阳”的核心药对。本实验通过观察柴 芩合煎液 (CQHJ)与分煎液 (CQFJ) (剂量为10g kg)对 2 0 μg kg和 80 μg kgLPS诱导的大鼠发热模型的影响 ,考察了它们的解热作用。结果发现 ,CQHJ与CQFJ对不同剂量的LPS诱导的大鼠发热均有显著的解热作用 ;但CQHJ与CQFJ在起效时间和作用效度上有所区别 ,总体上以CQHJ更具优势。

柴胡、黄芩及其配伍提取物含药血清对CVB3m感染乳鼠心肌细胞的保护作用研究

目的:探讨柴胡、黄芩及其配伍提取物保护细胞的不同作用环节和机制。方法:应用"通法"制取3种提取物含药血清,体外培养乳鼠心肌细胞,观察其形态学变化,细胞病变及搏动百分比;MTT法检测CVB3m感染的心肌细胞保护率;检测3天、5天各孔上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放量。结果:3组含药血清均不同程度的减轻心肌细胞病变,提高搏动百分比;OD值均明显高于正常对照组(P<0.05);感染CVB3m后3～5天,空白血清组各孔培养液中LDH及AST的释放量迅速上升,含药血清组其释放量明显降低(P<0.05)。结论:3种含药血清均有不同程度的保护细胞作用,黄芩和配伍提取物含药血清对病毒感染后的细胞具有明显保护作用。等量配伍提取物含药血清在体外保护细胞方面没有表现出作用增强的优势。

柴胡对癫痫模型电活动的调制

目的 :研究柴胡对癫痫发作的影响。方法 :以家兔和大鼠为实验对象 ,用毛果芸香碱致痫 ,采用脑电图和细胞外玻璃微电极记录技术 ,观察柴胡对癫痫模型大脑皮层放电及海马脑片场电位的影响。结果 :腹腔注射柴胡后可使癫痫发作次数及发作持续时间显著减少 ,发作间隔时间显著延长 ,(P <0 .0 5 ) ,脑片旁滴注柴胡后使致痫大鼠海马脑片诱发场电位幅度平均降低 2 0 .4 1% ,恢复时间平均为 6 .86min ,(P <0 .0 1)。结论 :柴胡注射液能明显抑制癫痫模型电活动 。

摘花序、打顶对北柴胡生育性状及根部产量的影响

对引自甘肃北柴胡在孕蕾期采用摘花序、打顶的处理方法,研究其对北柴胡生育性状及根部产量的影响。结果表明:摘花序后的植株生长健壮、叶面积指数大、光合能力强、干物质积累多、根部产量高;打顶后植株生长旺盛,但结实率低,根部增产效果不明显。

柴胡、赤芍与醋柴胡、杭白芍对大鼠高脂血症作用的实验研究

目的 :观察药对柴胡、赤芍与醋柴胡、杭白芍 ,对高脂血症大鼠脂质代谢、血小板功能影响 ,比较它们作用环节的差异。方法 :本实验采用高脂应激造成大鼠高脂血症血瘀模型方法 ,观察大鼠血瘀模型脂质代谢、血小板功能的变化。结果 :醋柴胡、杭白芍、柴胡、赤芍对TC(cholesterol)均有显著降低作用 ,醋柴胡、杭白芍强于柴胡、赤芍 ,而两者对LDL C(lowdensityli poprotein)、Lp(a) [lipoprotein(a) ]也有显著降低作用 ,但柴胡、赤芍作用较强 ,和模型组比较有明显差异 (P <0 0 5和P <0 0 1) ;醋柴胡、杭白芍对TG (triglyceride)有显著降低作用 ,和模型组比较有明显差异 (P <0 0 1) ;柴胡、赤芍对血小板聚集率和活化阳性率均有显著降低作用 (P <0 0 5 )。结论 :柴胡、赤芍与醋柴胡、杭白芍可作用于引起动脉粥样硬化的不同环节 ,柴胡、赤芍药对在抑制血小板聚集、降低血小板活化率方面优于醋柴胡、杭白芍。

HPLC法测定柴胡不同部位4种黄酮类成分

目的定量测定开封市场上不同部位和不同产地柴胡中4种黄酮(芦丁、槲皮素、山柰素、异鼠李素)。方法以ODS2色谱柱、乙腈-0.12%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1 mL/min,检测波长为360 nm。结果样品间的黄酮成分的量存在明显差异。叶片中芦丁、槲皮素、山柰素、异鼠李素的总量远远高于柴胡根中。结论柴胡茎和叶中4种黄酮总量远远高于传统的入药部位根中的量,有必要对柴胡茎、叶进行进一步的研究和开发。

北柴胡根的发育解剖学研究

应用常规石蜡切片方法对北柴胡(B up leurum ch inense DC.)1年生主根的中部和2年生主根的根尖和中部进行了横向与纵向解剖观察,研究根的发育过程,并对其1年生与2年生主根中部的结构进行了比较分析.结果表明,北柴胡根的发育包括原分生组织、初生分生组织、初生结构和次生生长4个发育阶段.原分生组织由3群原始细胞组成,其细胞具有典型分生组织的细胞学特征;初生分生组织包括根冠原、表皮原、皮层原和中柱原.初生结构由表皮、皮层和中柱组成.初生木质部为二原型.次生生长主要是依靠维管形成层和木栓形成层的活动来完成.其木栓形成层由中柱鞘细胞恢复分裂能力而形成.2年生北柴胡主根的基本结构与1年生的相同,但与1年生的相比,其周皮、次生韧皮部和木质部面积均增加.不同点具体表现在:2年生主根的周皮增厚;分泌道数量增加;次生木质部中木纤维成群分布,在横切面上连接成一个圆环,其维管射线明显,多为多列射线.分泌道主要分布在中柱鞘薄壁组织和次生韧皮部中,均是裂生方式发生,属次生分泌道,初生结构中无分泌道存在.

氮、磷、钾预防柴胡根腐病初步研究

在本试验条件下,施用氮、钾肥都显著降低了柴胡对根腐病的抗性。施中低量磷肥时,柴胡对根腐病的抗性降低,但大量施用磷肥可降低柴胡根腐病的病情指数。柴胡得到较佳的产量时,其施肥措施并未增强柴胡对根腐病的抗性。从预防柴胡根腐病的角度,在第二年拔节前应多施磷肥,适量施用氮钾肥。

肝郁模型大鼠行为学与脑单胺递质的变化及柴胡的干预作用

目的:观察慢性束缚致肝郁模型大鼠行为学及脑内单胺递质的变化以及柴胡对该模型的干预作用,探讨肝郁模型大鼠行为学变化特征以及柴胡疏肝解郁的部分机制。方法:取体质量为200-220g的Wistar大鼠,随机分成正常组、模型组、柴胡疏肝散组(8.50g生药/kg)、柴胡小、中、大剂量组(0.81、2.43、4.86g生药/kg)。除正常组外,其他各组动物采用慢性束缚法,束缚大鼠3h/d,连续束缚3w,制备肝郁模型。从第2w开始按剂量灌胃给药,连续2w。应用Open-field-test试验仪测定大鼠不同造模时间的行为学变化;采用HPLC法测定造模3w后海马组织中NA、5-HT含量。结果:与正常组比较,造模1w后的大鼠水平爬行格数有增加趋势(P>0.05),造模1w-3w后大鼠体质量降低(P<0.05),水平爬行格数显著性减少(P<0.05),海马组织中NA和5-HT含量明显升高(P<0.05)。与模型组比较,柴胡不同剂量组大鼠的体质量均有不同程度增加,爬行格数明显增加(P<0.05)、海马组织中NA、5-HT含量显著性降低(P<0.05)。结论:慢性束缚法诱导的肝郁模型大鼠存在自主性活动和海马单胺递质的异常变化;柴胡能明显改善该模型大鼠行为学异常,其机制可能与调节脑内单胺递质的平衡有关。

柴胡愈伤组织生长和不定根诱导的研究

目的探讨柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的适宜培养条件。方法以无菌苗为外植体诱导获得愈伤组织后,对不同种类和不同质量浓度的生长素进行实验,并对光和温度对柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的影响进行了研究。结果柴胡的愈伤组织适宜于在MS+NAA4mg/L+KT0.2mg/L培养基或MS+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培养基上继代培养。诱导其不定根时宜采用的培养基为MS+IBA2mg/L+KT0.2mg/L。25℃条件下,黑暗培养既有利于柴胡愈伤组织的生长又有利于其不定根的诱导。结论比较适宜于柴胡愈伤组织生长的生长素为NAA,而有利于不定根诱导的生长素为IBA。温度对愈伤组织的生长影响非常明显,光照是其发根的限制因素。

北柴胡生长发育规律的研究

在不同试验区对引种野生北柴胡的物候期及各器官生长发育规律进行了调查研究。结果表明:北柴胡个体发育可划分营养生长期和生殖生长期;物候期为返青期、苗期、抽茎拔节期、孕蕾期、开花期、座果期、果熟期、枯萎期;年生育期为180～200d;植株呈单茎或丛生,株高65～90 cm,总叶面积随株高的增高而增加,盛花期株叶面积最大,叶面积指数最高;开花特性为有限花序,无限分枝型植株,其根长、根重在开花盛期和座果初期后呈快速增长;根长在土壤结冻前基本趋于最大;而根重增长至10月上中旬基本趋于最大,以后呈直线下降趋势。

紫花大叶柴胡根、茎、叶的结构及与药效成分积累关系

目的揭示紫花大叶柴胡Bupleurum longiradiatum Turcz.var.porphyranthum Shan et Y.Li根、茎、叶的结构及与药效成分柴胡皂苷和黄酮类物质的积累关系。方法采用植物解剖学、组织化学以及植物化学方法对紫花大叶柴胡根、茎、叶的解剖结构、柴胡皂苷和黄酮类物质的分布以及含有量进行研究,并探讨其结构与主要成分积累关系。结果紫花大叶柴胡根由内到外主要由初生木质部、次生木质部、维管形成层、次生韧皮部、中柱鞘组织及周皮组成,在中柱鞘位置还分布有由3~30个分泌细胞组成的大小不等的分泌道;茎主要由表皮、皮层和维管柱组成,在紧贴韧皮部外方和髓周围还分布有分泌道;叶由表皮、叶肉组织和叶脉维管束组成,在紧贴韧皮部以及木质部上方分别分布有分泌道和纤维束;根茎过渡区兼有根和茎的结构特点。组化定位表明柴胡皂苷和黄酮类物质主要分布于根的周皮、中柱鞘组织、次生韧皮部、维管形成层以及次生木质部薄壁细胞、茎的表皮、皮层、韧皮部薄壁细胞、叶的表皮、叶肉组织及叶脉韧皮部中。植化结果表明,紫花大叶柴胡根茎叶中柴胡总皂苷含有量较高,分别为0.68%、0.15%和0.99%,总黄酮的含有量分别为0.61%、0.09%和0.85%。结论紫花大叶柴胡营养器官中均分布有柴胡皂苷和黄酮类物质;其中根和叶中柴胡总皂苷和总黄酮的含有量均较高,具有非常好的开发利用潜力。