c-KIT受体蛋白在犬皮肤肥大细胞瘤中的作用及其应用

皮肤肥大细胞瘤(MCT)是犬发生率较高的皮肤肿瘤类型之一,多发于老年犬,是危害犬类健康的重要疾病之一。c-KIT受体蛋白是一种跨膜蛋白,具有酪氨酸激酶活性,可调控肥大细胞的生长和分化。本文旨在阐明c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT中的作用及其应用,总结了c-KIT受体蛋白在肥大细胞增殖调控中的作用,深入探讨了c-KIT受体蛋白检测在犬皮肤MCT诊断中的应用价值,明确了c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT发生发展中的作用,同时也为进一步研究c-KIT受体蛋白在犬皮肤MCT中的发病机制提供了重要参考。

温胃阳汤对功能性消化不良大鼠肥大细胞活化及SCF/c-Kit信号通路的影响

目的:基于肥大细胞活化及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/受体酪氨酸激酶c-Kit信号通路探讨温胃阳汤治疗大鼠功能性消化不良的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为空白组,模型组,雷尼替丁组及温胃阳汤低、中、高剂量组,每组10只。空白组大鼠不予造模,其他各组采用夹尾刺激加不规则喂养复合番泻叶法建立大鼠功能性消化不良模型,模型建立后,空白组及模型组灌胃给予生理盐水,温胃阳汤低、中、高剂量组和雷尼替丁组则分别用温胃阳汤(0.743 g/mL、1.485 g/mL和2.970 g/mL)及盐酸雷尼替丁胶囊(3 g/L)灌胃。治疗结束后,以碳墨推进法测定小肠推进率;采用甲苯胺蓝染色观察大鼠十二指肠组织肥大细胞并计数;ELISA测定大鼠十二指肠中肥大细胞类胰蛋白酶(mast cell tryptase,MCT)和组胺(histamine,HA)的含量;RT-qPCR检测十二指肠中SCF和c-Kit mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测十二指肠中SCF和c-Kit蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,温胃阳汤治疗显著提高大鼠的小肠推进率(P<0.05);ELISA结果显示,温胃阳汤治疗可减少大鼠十二指肠黏膜组织肥大细胞数量及MCT和HA含量(P<0.05);Western blot和免疫组化结果表明,温胃阳汤治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF蛋白的表达水平(P<0.05),增加SCF和c-Kit阳性细胞数(P<0.05);RT-qPCR结果显示,WWYD治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF mRNA的表达(P<0.01)。而且,小肠推进率分别与MCT和HA含量呈负相关,与SCF和c-Kit的表达呈正相关。结论:温胃阳汤能促进大鼠十二指肠动力,其作用机制可能与抑制大鼠十二指肠MCT和HA的生成,及激活SCF/c-Kit信号通路有关。

基于drop-off ddPCR方法检测急性髓系白血病C-KIT基因N822位点突变及其临床应用

目的:建立急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者C-KIT基因N822位点突变的drop-off微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法,并评价其临床应用价值。方法:针对C-KIT基因第17外显子设计一对引物及探针,优化drop-off ddPCR反应条件及体系,评价该方法的特异性、灵敏度、重复性,使用所建立的方法对140例已行Sanger测序的AML初诊患者骨髓标本进行检测,并用二代测序(next generation sequencing, NGS)验证结果;用drop-off ddPCR对3例阳性患者化疗后C-KIT突变频率进行动态监测。结果:drop-off ddPCR检测C-KIT基因N822位点突变的最适退火温度为54℃,空白检测限为1.62拷贝数/μL,最低检测下限为10.12拷贝数/μL,线性良好。140例AML初诊患者样本中Sanger测序检出2例阳性(1.4%),而ddPCR共检出突变7例(5.0%),突变频率为0.29%~7.41%;进一步应用常规NGS方法对ddPCR阳性样本进行验证,共检出阳性3例(2.1%),等位基因频率为1.26%~8.00%。动态监测3例阳性患者C-KIT突变频率,结果显示治疗达完全缓解时C-KIT突变频率明显下降甚至降低至0。结论:本研究建立了检测C-KIT基因N822位点突变的drop-off ddPCR技术,具有良好的方法学检测性能,其灵敏度高于Sanger测序和NGS,有望用于阳性患者缓解后的可检测残留疾病监测及治疗指导。

SCF/c-Kit在小鼠隐睾模型中的表达变化及意义

目的:观察干细胞因子(SCF)与原癌基因c-Kit在小鼠隐睾模型睾丸组织中的表达变化。方法:将妊娠BALB/c小鼠随机分成A、B、C、D、E五组;在妊娠第12~21天持续10 d经给予氟他胺灌胃,剂量依次为0 mg/kg、150 mg/kg、300 mg/kg、500 mg/kg、700 mg/kg,在子代小鼠出生后第8周时采用Real-Time PCR法检测其睾丸组织SCF mRNA的相对表达量,运用量子点技术检测c-Kit在组织中的表达情况。结果:小鼠隐睾模型诱导成功。五组中小鼠睾丸组织SCF mRNA的相对表达量分别为1.00±0.01、0.78±0.04、0.61±0.03、0.45±0.05、0.35±0.03,SCF mRNA的表达依次降低,与A组相比(P<0.05)。c-Kit在实验组的表达明显少于对照组。结论:在氟他胺诱导的小鼠隐睾模型中,小鼠睾丸组织SCF mRNA与c-Kit表达的下降可能是隐睾小鼠生精功能受损的重要原因之一。

哺乳动物毛色候选基因c-KIT的研究进展

哺乳动物的皮毛颜色主要受毛发中黑色素的种类和数量影响。c-KIT基因编码一种酪氨酸激酶跨膜受体,被称为肥大/干细胞生长因子受体,与黑色素生物合成相关。c-KIT基因突变会抑制干细胞生长因子受体功能,导致黑色素细胞的生成、成熟、增殖、分化和迁移等过程受到影响。本文就哺乳动物毛色形成的机制和主效基因、c-KIT基因的作用机理及其对哺乳动物毛色的影响进行综述,以期为深入研究哺乳动物毛色遗传机制以及不同毛色的选种和选育提供参考依据。

基于SCF/c-kit信号通路探讨理气通便方对气滞型慢传输型便秘大鼠肠道动力的影响

目的 基于SCF/c-kit信号通路探讨理气通便方对气滞型慢传输型便秘(STC)大鼠肠道动力的影响。方法 将36只Wistar雌性大鼠按随机数字表法分为对照组6只和造模组30只。造模组采用“洛哌丁胺混悬液+夹尾刺激”复制气滞型STC大鼠模型,连续刺激14 d。当大鼠表现出激惹、易怒、烦躁等情况,正常喂养饲料时出现大便干硬、排便数量减少等表现时,说明气滞型便秘模型造模成功。将造模成功的大鼠按照随机数字表法分为模型组、西药组、低剂量组、中剂量组和高剂量组各6只,低、中、高剂量组分别按5.15、10.3、20.6 g/(kg·d)给予理气通便方药液灌胃;西药组按0.18 mg/(kg·d)给予琥珀酸普芦卡必利片混悬液灌胃;对照组和模型组按10 mL/(kg·d)给予无菌水灌胃,每日1次,连续灌胃14 d。比较6组末次给药后6 h的粪便排出量、粪便含水量和小肠推进率;HE染色观察结肠组织病理变化;免疫组化检测结肠组织c-kit蛋白表达水平;Western blot检测结肠组织c-kit、SCF蛋白表达量。结果 HE染色显示:对照组大鼠结肠黏膜完整,杯状细胞和腺体排列整齐,未见炎症细胞聚集;模型组结肠黏膜出现肠腺排列欠整齐,黏膜下层间质血管扩张;各给药组结肠黏膜肠腺排列整齐,未观察到明显上皮损伤。与对照组比较,模型组粪便排出量、粪便含水量和小肠推进率均明显降低(P<0.05),结肠组织c-kit蛋白表达水平和c-kit、SCF蛋白表达量均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,西药组、中剂量组、高剂量组粪便排出量、粪便含水率和小肠推进率均明显提高(P<0.05),低剂量组粪便排出量和粪便含水率均明显提高(P<0.05);给药组结肠组织c-kit蛋白表达水平均明显提高(P<0.05);低、中、高剂量组结肠组织c-kit蛋白表达量均明显提高(P<0.05),高剂量组SCF蛋白表达量明显提高(P<0.05)。结论 理气通便方可提高气滞型STC模型大鼠结肠组织中ICC的表达及调控SCF/c-kit信号通路,恢复对胃肠道节律的正常调控来改善便秘的症状。

基于SCF/C-kit信号通路探讨益髓破血方改善脑出血小鼠肠动力“通腑”作用机制

目的观察益髓破血方对脑出血小鼠排便情况与结肠组织干细胞因子(stem cell factor,SCF)/酪氨酸激酶受体(kit proto-oncogene,C-kit)信号通路的影响,探讨益髓破血方调节脑出血小鼠肠动力通腑作用机制。方法将54只SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠随机均分为假手术组、模型组与方剂治疗组,采用鼠尾自体血注入法制作实验性脑出血模型,假手术组只进针不注射。方剂治疗组给予1 g/mL益髓破血方悬浊液灌胃,假手术组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,每天1次。观察各组小鼠排便情况,记录第1天、第3天、第7天同时段6 h内的排便量以及末次灌胃后首次排便间隔时间,并于相同时间分段点处死小鼠取材,采用免疫组化和Western Blot法检测小鼠结肠组织中的SCF、C-kit蛋白。结果与假手术组比较,模型组小鼠第1天、第3天、第7天各6 h内排便量显著减少(P<0.05),末次灌胃首次排便时间明显滞后(P<0.05),结肠组织中SCF、C-kit蛋白表达显著减少(P<0.05),且随周期延长呈逐渐降低趋势;与模型组比较,方剂治疗组第1天、第3天、第7天各6 h内排便量相对增多(P<0.05),首次排便时间缩短(P<0.05),SCF、C-kit蛋白表达水平升高(P<0.05),且随时间推移逐渐向正常量恢复。结论益髓破血方干预治疗脑出血小鼠,可以增加肠动力,促进排便,发挥通腑作用使肠功能恢复,改善脑出血后便秘,其机制可能与SCF/C-kit信号通路有关。

二陈汤通过调控SCF/C-kit通路介导的痰湿型脑出血急性期胃肠功能障碍的研究

目的通过观察二陈汤对痰湿证脑出血急性期大鼠胃肠组织干细胞因子(stemcellfactor,SCF)/干细胞因子受体(C-kit)信号通路的动态变化的影响,探讨痰湿型体质与脑出血急性期胃肠功能障碍的关系及二陈汤的作用机制。方法将60只SD大鼠随机均分为空白组、假手术组、模型组、莫沙必利组(0.27 mg/d)、二陈汤低剂量组和二陈汤高剂量组(217、434 mg/d),每组10只。除空白组、假手术组外其余各组均采用自体血注入法制备大鼠脑出血模型,各组按剂量给予灌胃,空白组、假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,每天2次,于给药7天处死大鼠,采用苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察大鼠胃肠黏膜细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法和蛋白印迹(Western blot,WB)法检测大鼠胃、小肠组织中的SCF、C-kit蛋白及mRNA的表达水平。结果光镜下见空白组、假手术组大鼠胃肠黏膜细胞结构完整、形态规则,偶见轻微充血现象;模型组见组织细胞充血、水肿、炎性细胞浸润明显、组织糜烂;莫沙必利组及二陈汤低、高剂量组胃肠黏膜各层次欠清晰、排列不规则,部分组织可见组织细胞充血、水肿、炎性细胞浸润,此3组中以二陈汤低剂量组胃肠黏膜表现最为严重。模型组大鼠胃肠组织中SCF、C-kit mRNA表达水平较空白组、假手术组显著降低(P<0.05),莫沙必利组、二陈汤低剂量组、二陈汤高剂量组的表达增加(P<0.05),莫沙必利组和二陈汤高剂量组大鼠胃组织中的SCF mRNA表达显著增加(P<0.05),二陈汤高剂量组C-kit mRNA表达显著增加(P<0.05);小肠组织中的SCF、C-kit mRNA含量随二陈汤浓度提高而增加(P<0.05)。与模型组相比,莫沙必利组、二陈汤低、高剂量组大鼠胃肠组织中SCF、C-kit蛋白表达水平较模型组显著升高(P<0.05),三组中以莫沙必利及高剂量二陈汤效果更佳(P<0.05)。结论脑出血急性期痰湿型胃肠黏膜损伤及功能障碍的作用机制与SCF/C-kit信号通路相关蛋白及mRNA的表达降低有关,二陈汤可通过此机制进行有效干预,上调相关蛋白及mRNA的表达,有利于脑出血急性期胃肠功能障碍恢复。

鼠性成熟前期睾丸扭转对性成熟期健侧睾丸C-kit、PI3K表达的影响研究

目的 探究鼠性成熟前期睾丸扭转后,对处于不同状态的扭转睾丸,特别是扭转疑似坏死睾丸,采取何种手术方式(复位/切除),可最大限度地降低性成熟期健侧睾丸生精功能的损害。方法 采用Turner法制作鼠性成熟前期的睾丸扭转模型,56只3周龄雄性SD鼠,随机分成7组,每组8只。任选一组行假手术,作为对照组(CG);余6组分别制作扭转未坏死睾丸复位组(NNTR)/切除组(NNTO),扭转疑似坏死睾丸复位组(SNTR)/切除组(SNTO),以及扭转坏死睾丸复位组(NTR)/切除组(NTO)。术后饲养6周至性成熟期,脱颈法处死大鼠,切取对侧睾丸石蜡包埋行免疫组化SP法检测睾丸精原干细胞因子受体(C-kit)、磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)的表达。结果 鼠性成熟期健侧睾丸组织生精细胞及间质细胞C-kit、PI3K的积分光密度(IOD)值:NNTR和NNTO组C-kit、PI3K的IOD值组间比较差异无统计学意义(P>0.05);SNTR和SNTO组C-kit、PI3K的IOD值组间比较差异也无统计学意义(P>0.05);NTR和NTO组C-kit、PI3K的IOD值组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与CG组C-kit、PI3K的IOD值比较,NNTR、NNTO及NTO组中C-kit、PI3K的IOD值均无统计学意义(P>0.05);而SNTR、SNTO及NTR组中C-kit、PI3K的IOD值均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 鼠性成熟前期扭转疑似坏死睾丸、无论切除与复位,对性成熟期健侧睾丸仅轻微损害,应予以保留;性成熟前期扭转坏死睾丸的切除,对性成熟期健侧睾丸具有保护作用,应尽可能切除。

基于SCF/C-kit通路探讨三焦针法对腹泻型肠易激综合征大鼠的影响

目的 观察三焦针法对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with diarrhea, IBS-D)大鼠胃肠动力异常及结肠组织干细胞因子(stem cell factor, SCF)、酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor, C-kit) mRNA和蛋白表达的影响,探讨三焦针法治疗IBS-D的作用机制。方法 wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和三焦组,每组6只。除空白组外,其余各组采用“冰醋酸灌肠+束缚应激”建立IBS-D大鼠模型。西药组予匹维溴胺灌胃(15 mg/kg),三焦组针刺膻中、中脘、气海、血海(双侧)及足三里(双侧),诸穴行捻转补法30秒,1次/d,均治疗14天。观察大鼠一般状态;测定体质量、旷场实验(大鼠横向运动和纵向运动)、稀便率、腹壁撤退反射(abdominal retraction reflex, AWR)3分阈值时注水量;RT-PCR法、Western blot法检测结肠组织SCF、C-kit mRNA及蛋白表达。结果 与空白组相比,IBS-D模型大鼠一般状态较差,体质量显著降低(P<0.01),旷场实验检测横向运动距离与纵向运动次数显著降低(P<0.01),稀便率显著增高(P<0.01),AWR3分时注水量显著降低(P<0.01),结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,西药组、三焦组大鼠体质量显著升高(P<0.01,P<0.05),横向运动距离与纵向运动次数均显著升高(P<0.05,P<0.01),稀便率显著下调(P<0.01),AWR3分时注水量显著提升(P<0.01),三焦组大鼠结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白水平表达均显著降低(P<0.01),而西药组SCF、C-kit mRNA及蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。结论 三焦针法可改善IBS-D大鼠症状,可能是与调节结肠组织中SCF、C-kit mRNA及蛋白表达水平有关。

推中脘联合参香散贴敷通过SCF/C-kit信号通路对胃食管反流的作用研究

目的:探讨推中脘联合参香散贴敷通过干细胞因子(stem cell factor,SCF)/C-kit信号通路对胃食管反流(Gastroesophageal reflux,GER)的调控作用。方法:通过饮食不节法和导尿管球囊扩张法构建GER动物模型,分别用推中脘、参香散贴敷以及推中脘联合参香散贴敷治疗GER模型兔子。苏木精-伊红染色观察胃窦组织病理损伤。免疫荧光检测C-kit荧光强度。RT-qPCR检测SCF和C-kit mRNA相对表达。Western blot检测SCF、C-kit和连接蛋白43(Connexin 43,CX43)蛋白表达。结果:GER组兔子胃窦组织中细胞炎性浸润明显、胃黏膜上皮细胞增生,且组织中SCF、C-kit和CX43表达明显降低。经推中脘和参香散贴敷治疗可降低胃窦组织炎性浸润程度,促进SCF、C-kit和CX43表达。而与推中脘或参香散贴敷单独治疗组比较,推中脘联合参香散贴敷治疗组中细胞炎性浸润较单独治疗组减弱,几乎没有细胞增生,SCF、C-kit和CX43表达明显升高。结论:推中脘联合参香散贴敷治疗可显著改善GER,这可能通过调控SCF/C-kit信号通路实现。

胃肠道间质瘤60例中c-kit和PDGFRA基因突变的检测

目的: 探讨c kit基因和PDGFRA基因在我国胃肠道间质瘤(GIST)中的突变状况。方法: 用PCR扩增和直接测序的方法,检测60例GISTc kit基因9号、11号、13号和17号外显子突变以及PDGFRA基因12号和18外显子突变。结果: 60例GIST中kit基因突变率为63. 3%,绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变。其中以编码近膜区的11号外显子突变最为常见(58. 3% );其次为编码胞外区的9号外显子突变(3. 3% );偶见编码胞内酪氨酸激酶结构域的13号外显子突变(1. 7% ),是一个新的突变位点L641P;未检出17号外显子突变。11号外显子的突变位点多集中在5′端的经典热点(42. 9% ),表现为密码子第557 -560的点突变和框内缺失。第二个热点位于11号外显子的3′端,为框内串联重复。后者主要发生在胃部,女性患者多见。60例GIST中PDGFRA基因突变率为5%,表现为编码胞内酪氨酸激酶结构域的18号外显子D842V点突变,且均为CD117阴性。未见编码近膜区的12号外显子突变。结论:CD117阳性GIST主要表现为c kit突变,分布在11号外显子经典热点和3′端热点,后者与老年女性胃GIST相关。PDGFRA基因突变主要见于CD117阴性GIST,多发生在后腹膜,具高度侵袭危险性。

电针天枢穴对慢传输型便秘大鼠结肠c-kit、SCF基因表达的调节

目的从基因水平探讨电针天枢穴治疗慢传输型便秘(STC)的作用机理,为临床治疗提供实验依据。方法以饲喂复方苯乙哌啶饲料建立慢传输型便秘大鼠模型。将造模成功的实验大鼠随机分为电针组、模型组,每组各6只。予电针组电针双侧天枢穴,疗程14 d。治疗结束后采用RT-PCR法分别检测各组大鼠结肠c-kit和SCF的mRNA表达。结果模型组结肠c-kit和SCF的基因表达率分别是正常大鼠的(0.37±0.03)倍和(0.24±0.09)倍,电针组结肠c-kit和SCF的基因表达率分别是正常大鼠的(0.48±0.06)倍和(0.38±0.07)倍;与模型组相比,电针组大鼠结肠c-kit和SCF的基因表达率都有所上升,有显著性差异(P<0.05)。结论 STC模型大鼠的结肠c-kit和SCF基因表达下调,c-kit/SCF系统受损。电针天枢穴对结肠c-kit和SCF的基因表达有上调作用,可能是针灸治疗慢传输便秘的机制之一。

C-kit和PDGFRβ在食管癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的:有研究表明STI-571能抑制Bcr-Abl、C-kit、血小板衍生生长因子受体β(Platelet-derivedgrouthfactorreceptor-beta,PDGFR!)的酪氨酸激酶,从而抑制细胞的分化增殖和促进细胞凋亡,本研究旨在检测与STI-571相关的酪氨酸激酶受体在食管癌中的表达情况。方法:应用免疫组化的方法,检测50例食管癌组织、癌旁组织和正常组织中与STI-571相关的酪氨酸激酶受体C-kit和PDGFRβ的表达。结果:C-kit在癌组织、癌旁组织、正常组织中的强表达率较低,分别为4%、4%、12%,表达的差异无统计学意义。PDGFRβ在癌组织、癌旁组织、正常组织中的强表达率分别为68%、28%、28%,表达的差异有统计学意义。应用Logistic回归的方法,发现C-kit或PDGFRβ在癌组织、癌旁组织、正常组织中的强表达率与患者的性别、年龄、肿物的分化程度、肿物的浸润深度、肿物的部位、淋巴结转移情况和分期无相关。结论:食管癌组织中PDGFRβ的强表达率较高,且明显高于癌旁组织和正常组织。食管正常组织中C-kit的强表达率较低,癌组织和癌旁组织中C-kit的强表达率更低。

豚鼠糖尿病性膀胱病逼尿肌中c-kit mRNA和蛋白的表达变化及意义

目的:检测豚鼠糖尿病性膀胱病(DCP)逼尿肌中酪氨酸蛋白激酶生长因子受体(c-kit)mRNA和蛋白的表达水平,探讨c-kit表达与DCP的关系及其发病机制。方法:60只豚鼠随机分成对照组20只,实验组40只,实验组采用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病豚鼠模型,2组豚鼠饲养10周后运用尿动力学检测并将实验组筛选出DCP组和糖尿病性非膀胱病(NDCP)组,应用RT-PCR、激光共聚焦显微镜技术分别检测各组膀胱组织c-kit mRNA和蛋白的表达。结果:DCP组c-kit mRNA表达显著低于对照组(P<0.01)及NDCP组(P<0.05),相对平均吸光度值分别为4.65±0.47、5.66±0.54、5.54±1.28。糖尿病性膀胱病组c-kit蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)与NDCP组(P<0.01),c-kit蛋白荧光值分别为548.69±48.51、844.67±59.24、856.52±53.03。结论:豚鼠DCP逼尿肌中c-kit mRNA、c-kit蛋白表达减少,导致c-kit信号通路异常,从而使Cajal样细胞在膀胱中的功能减弱而导致逼尿肌功能障碍发生DCP,因此c-kit表达异常可能是DCP的发病机制之一。

黄芪皂苷对化疗贫血小鼠骨髓细胞c-Kit、SHP2、c-MPL等细胞因子的影响

目的:探讨黄芪皂苷对化疗贫血小鼠骨髓细胞INF-α、TGF-β、INF-γ和c-kit、SHP2、c-MPL细胞因子的影响。方法:从环磷酰胺所致的化疗贫血小鼠中,获取单个骨髓细胞,采用体外细胞培养方式培养小鼠骨髓细胞至第四代,并分成4组,分别为空白组、模型组、皂苷组和EPO组。采用ELISA法,观察黄芪皂苷对小鼠骨髓细胞中INF-α、TGF-β、INF-γ的影响;RT-PCR法观察黄芪皂苷对小鼠骨髓细胞中c-kit、SHP2、c-MPL的m RNA达的影响。结果:黄芪皂苷可以降低小鼠骨髓细胞中INF-α、INF-γ(P<0.05)的含量,提高TGF-β(P<0.05)的含量;还可以提高小鼠骨髓细胞中c-kit(P<0.05)的m RNA水平,降低SHP2(P<0.05)的m RNA水平,而对c-MPL(P>0.05)作用不明显。结论:黄芪皂苷能够改善TNF-α,TGF-β,INF-γ三种负性调节因子的水平,调节造血细胞的功能;上调c-kit,下调SHP2的基因水平,激活造血细胞的造血功能。

通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠c-kit和MLCK表达的影响

目的 探讨通便汤对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织c-kit、MLCK蛋白及其他细胞因子的影响。方法 采用洛哌丁胺混悬液灌胃法复制STC大鼠模型,随机分为正常组、模型组、通便汤低、中、高剂量组和莫沙必利组。各组予以不同药物干预2周后,检测各组大鼠粪便含水率、小肠活性炭推进率;HE染色观察大鼠结肠病理学特征;酶联免疫法检测结肠一氧化氮(NO)、一氧化氮酶(NOS)的含量;免疫组化法检测结肠c-kit、MLCK的表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠粪便质地干硬,含水率明显下降,小肠活性炭推进率显著下降(P<0.05),结肠组织正常结构被破坏,炎性细胞浸润,结肠组织NO和NOS含量明显上升, c-kit和MLCK蛋白表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,通便汤各剂量组增加粪便含水率以及结肠肌层厚度和绒毛高度(P<0.05),提高小肠活性炭推进率,显著上调结肠组织c-kit和MLCK蛋白表达,同时降低结肠组织NO和NOS含量(P<0.05)。结论 通便汤能提高STC大鼠小肠活性炭推进率,增加粪便含水率,改善结肠病理形态,其作用机制可能与调节NO、NOS水平,上调结肠c-kit、MLCK蛋白表达有关。

小鼠c-Kit^+lin-骨髓细胞移植生成肝细胞的实验研究

目的评价小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据。方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,c-Kit+Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞。受体为行35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小鼠,立即移植供体c-Kit+lin-骨髓细胞。接受c-Kit+lin-骨髓细胞移植1月后,活杀取肝做常规病理学检查、Y染色体的原位杂交检查、甲胎蛋白与白蛋白的免疫组化检测。结果移植1月后小鼠肝脏的组织结构已恢复正常,肝组织细胞中存在原位杂交和免疫组化均呈阳性反应的双阳性细胞。结论小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞具有肝干细胞潜能,移植后可以在肝内定居并分化形成肝细胞。可做为肝病细胞移植疗法的种子细胞。

SCF/c-Kit信号通路在“泻剂结肠”发病机制中的作用

目的:探讨SCF/c-Kit信号通路在"泻剂结肠"发病机制中的作用.方法:健康成年SD大鼠36只,随机分为对照组(12只)、模型组(12只)和模型恢复组(12只).对照组大鼠生理盐水灌胃,模型组和模型恢复组大鼠采用"大黄酸混悬液灌胃法"制作"泻剂结肠"动物模型.模型组造模结束后取材,模型恢复组造模结束正常饲养30d后取材.各组大鼠处死前观察首粒黑便排出时间以检测肠道传输功能.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术分别检测各组大鼠结肠组织中c-Kit和SCF的mRNA水平和蛋白水平表达.结果:模型组大鼠首粒黑便排出时间明显延长,与对照组差别显著(491.5±40.2vs373.4±46.5,P<0.01);模型恢复组与模型组相比,首粒黑便排出时间没有统计学差异(477.9±39.6vs491.5±40.2,P>0.05).与对照组相比,模型组的c-Kit和SCF的mRNA水平和蛋白水平表达均明显减弱(P<0.01),而模型恢复组与模型组相比,c-Kit和SCF的蛋白水平表达无明显差异(P>0.05).结论:"泻剂结肠"的结肠动力减退可能与结肠组织中SCF/c-Kit信号通路的表达下调有关.

慢传输性便秘乙状结肠c-kit蛋白和mRNA表达

目的 探讨c kit蛋白和mRNA在慢传输性便秘结肠的表达。方法 乙状结肠标本取自 12例慢传输性便秘患者和 8例年龄相匹配的非梗阻性结直肠癌患者。用Westernblot方法检测c kit蛋白表达 ,用RT PCR方法检测mRNA表达情况。结果 聚丙烯凝胶电泳结果显示c kit蛋白质一 14 5× 10 3 的条带 ,与对照组相比 ,慢传输性便秘结肠c kit蛋白表达明显下降 (P =0 .0 2 1) ;RT PCR产物经琼脂糖凝胶电泳显示c kit基因和 β actin(内参照 )两条带 ,经半定量分析发现c kitmRNA表达降低 (P =0 .0 2 9)。结论 慢传输性便秘乙状结肠c kit蛋白和mRNA表达均明显降低 ,提示c