期刊文献+
共找到23篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
Association of Interleukin-6-174G/C Polymorphism with the Risk of Diabetic Nephropathy in Type 2 Diabetes:A Meta-analysis 被引量:6
1
作者 Zhen-hai CUI Xiao-ting LU +2 位作者 Kang-li XIAO Yang CHEN Hui-qing LI 《Current Medical Science》 SCIE CAS 2019年第2期250-258,共9页
Previous studies reported the association between interleukin-6(IL-6)-174G/C gene polymorphism and the risk of diabetic nephropathy in type 2 diabetes mellitus(T2DN).However,the results remain controversial.In the pre... Previous studies reported the association between interleukin-6(IL-6)-174G/C gene polymorphism and the risk of diabetic nephropathy in type 2 diabetes mellitus(T2DN).However,the results remain controversial.In the present study,we conducted a meta-analysis to further examine this relationship between IL-6-174G/C gene polymorphism and T2DN.Three databases(PubMed,SinoMed and ISI Web of Science)were used to search clinical case-control studies about IL-6-174G/C polymorphism and T2DN published until Apr.14,2018.Fixed-or random-effects n lodels were used to calculate the effect sizes of odds ratio(OR)and 95%confide nee intervals(95%CI).Moreover,subgroup analysis was performed in tenns of the excretion rate of albuminuria.All the statistical analyses were con ducted using Stata 12.0.A total of 11 case-control studies were included in this study,involving 1203 cases of T2DN and 1571 cases of T2DM without DN.Metaanalysis showed that there was an association between IL-6-174G/C polymorphism and increased risk of T2DN under the allelic and recessive genetic models(G vs.C:OR=1.10,95%CI 1.03-1」&P=0.006;GG vs.CC+GC:OR=1.11,95%CI 1.02-1.21,P=0.016).In the subgroup analysis by albuminuria,a significant association of IL-6-174G/C polymorphism with risk of T2DN was noted in the microalbuminuria group under the recessive model(OR=1.54,95%CI 1.02-2.32,P=0.038).In conclusion,this meta-analysis suggests that IL-6-174G/C gene polymorphism is associated with the risk of T2DN. 展开更多
关键词 interleukin-6(IL-6)-174G/c gene POLYMORPHISM DIABETIc NEPHROPATHY type 2 diabetes MELLITUS META-ANALYSIS
下载PDF
Interleukin-6-174G/C polymorphism is associated with a decreased risk of type 2 diabetes in patients with chronic hepatitis C virus 被引量:2
2
作者 Cliviany Borges da Silva Diego Alves Vieira +9 位作者 Luisa Freitas de Melo Anna Luiza Soares Chagas Adriana Dias Gomes César Lúcio Lopes de Faria Jr Rosangela Teixeira Dulciene Maria de Magalh?es Queiroz Gifone Aguiar Rocha Maria Marta Sarquis Soares Juliana Maria Trindade Bezerra Luciana Diniz Silva 《World Journal of Hepatology》 CAS 2020年第4期137-148,共12页
BACKGROUND Chronic hepatitis C(CHC)is associated with type 2 diabetes mellitus.Although the pathogenesis remains to be elucidated,a growing evidence has suggested a role of pro-inflammatory immune response.Increased s... BACKGROUND Chronic hepatitis C(CHC)is associated with type 2 diabetes mellitus.Although the pathogenesis remains to be elucidated,a growing evidence has suggested a role of pro-inflammatory immune response.Increased serum concentrations of Interleukin 6(IL-6)have been associated with insulin resistance,type 2 diabetes mellitus as well as advanced forms of liver disease in chronic hepatitis C infection.AIM To investigate the frequency of IL-6-174G/C(rs1800795)single nucleotide polymorphism(SNP)in CHC patients and in healthy subjects of the same ethnicity.Associations between type 2 diabetes mellitus(dependent variable)and demographic,clinical,nutritional,virological and,IL-6 genotyping data were also investigated in CHC patients.METHODS Two hundred and forty-five patients with CHC and 179 healthy control subjects(blood donors)were prospectively included.Type 2 diabetes mellitus was diagnosed according to the criteria of the American Diabetes Association.Clinical,biochemical,histological and radiological methods were used for the diagnosis of the liver disease.IL-6 polymorphism was evaluated by Taqman SNP genotyping assay.The data were analysed by logistic regression models.RESULTS Type 2 diabetes mellitus,blood hypertension and liver cirrhosis were observed in 20.8%(51/245),40.0%(98/245)and 38.4%(94/245)of the patients,respectively.The frequency of the studied IL-6 SNP did not differ between the CHC patients and controls(P=0.81)and all alleles were in Hardy-Weinberg equilibrium(P=0.38).In the multivariate analysis,type 2 diabetes mellitus was inversely associated with GC and CC genotypes of IL-6-174(OR=0.42;95%CI=0.22-0.78;P=0.006)and positively associated with blood hypertension(OR=5.56;95%CI=2.79-11.09;P<0.001).CONCLUSION This study was the first to show that GC and CC genotypes of IL-6-174 SNP are associated with a decreased risk of type 2 diabetes mellitus in patients chronically infected with hepatitis C virus.The identification of potential inflammatory mediators involved in the crosstalk between hepatitis C virus and the axis pancreas-liver remains important issues that deserve further investigations. 展开更多
关键词 chronic Hepatitis c type 2 diabetes mellitus Interleukin 6-174G/cgenepromoter single nucleotide polymorphism Blood hypertension Healthy control subjects
下载PDF
C12-3.43/0.981 Type 12MW Exhaustion and Condensing Stean Turbine
3
《China's Foreign Trade》 1999年第7期39-39,共1页
TheQingdaoJienengPowerGroupCompanyinShandongmanufactUreseightseriesofsteamtIJrbinesin140varieties,witheachturbinebelow25MaTheC12-3.43/0.98type12MWexhaustionandcondensingsteamturbinehasthefollowingfeatures:12mW:ipa,435... TheQingdaoJienengPowerGroupCompanyinShandongmanufactUreseightseriesofsteamtIJrbinesin140varieties,witheachturbinebelow25MaTheC12-3.43/0.98type12MWexhaustionandcondensingsteamturbinehasthefollowingfeatures:12mW:ipa,435C,0.981Mpa,andh/h,whichcanbeusedi... 展开更多
关键词 c12-3.43/0.981 type 12MW Exhaustion and condensing Stean Turbine
下载PDF
三疣梭子蟹C-型溶菌酶基因的原核表达与活性检测 被引量:3
4
作者 张辉 潘鲁青 岳峰 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期23-27,共5页
溶菌酶能破坏和消除侵入体内的病原或异物,是甲壳动物免疫系统中一个重要的效应分子。本文根据克隆得到的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)C-型溶菌酶基因(Lysozyme)全长序列,设计带有酶切位点的特异性引物,经RT-PCR扩增得到溶菌... 溶菌酶能破坏和消除侵入体内的病原或异物,是甲壳动物免疫系统中一个重要的效应分子。本文根据克隆得到的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)C-型溶菌酶基因(Lysozyme)全长序列,设计带有酶切位点的特异性引物,经RT-PCR扩增得到溶菌酶基因(PtLys)的开放性阅读框,将其克隆至载体pMD18-T,并测序。用限制性内切酶BamH I和XhoI双酶切取目的基因,并与表达载体pET-28a(+)连接,构建了PtLys基因的原核表达载体p28a-PtLys,在大肠杆菌(E.co-li)BL21(DE3)中诱导表达含6个His标签的重组PtLys融合蛋白,经带有His标签的Ni 2+亲合层析柱纯化得到三疣梭子蟹重组溶菌酶蛋白,并进行活性检测。结果表明:重组载体p28a-PtLys转化E.coli BL21(DE3)后,可以实现PtLys基因的原核表达,经SDS-PAGE分析显示在33.29kD处有显著诱导条带,与预测的分子量大小基本一致;经Western blot分析,可与anti-His抗体特异性结合;抑菌实验表明,对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)均有一定的抑菌作用。本研究成功实现了三疣梭子蟹C-型溶菌酶基因的原核表达,为甲壳动物溶菌酶的进一步开发应用提供了技术支持。 展开更多
关键词 三疣梭子蟹 c-型溶菌酶 原核表达 抑菌活性
下载PDF
卵形鲳鲹Tf、TNFα和C-Lys的组织分布及对美人鱼发光杆菌感染的响应 被引量:2
5
作者 宋沙沙 马红玲 +3 位作者 冯娟 苏友禄 程长洪 郭志勋 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期77-84,共8页
研究了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)中免疫相关因子转铁蛋白(Tf)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、C-型溶菌酶(C-Lys)的组织表达分布,并分析了这3种基因在人工感染美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.piscicida)后在卵形... 研究了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)中免疫相关因子转铁蛋白(Tf)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、C-型溶菌酶(C-Lys)的组织表达分布,并分析了这3种基因在人工感染美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.piscicida)后在卵形鲳鲹肾脏中的表达变化,探讨其对美人鱼发光杆菌感染的反应。结果显示,感染后第48小时卵形鲳鲹累计死亡率最高(76.4%);卵形鲳鲹肾脏中细菌数量从第3~第96小时一直处于下降趋势,从1.07×106CFU·g^(-1)下降到1.29×103CFU·g^(-1)。健康卵形鲳鲹中Tf和TNFα在肝脏中表达量最高,CLys在头肾中表达量最高。美人鱼发光杆菌感染后卵形鲳鲹肾脏中Tf表达量在第3~第12小时实验组高于对照组,其中第6小时的表达量最高,是对照组的17.99倍;TNFα在感染后的第3、第6、第24小时实验组的表达量高于对照组,第24小时组相对于对照组的表达量最高,是对照组的6.05倍。C-Lys在感染后感染组表达量均低于对照组。以上结果表明,美人鱼发光杆菌感染能促进卵形鲳鲹肾脏组织中Tf、TNFα的表达,而抑制C-Lys的表达。 展开更多
关键词 卵形鲳鲹 转铁蛋白 肿瘤坏死因子α c-型溶菌酶 基因表达
下载PDF
青蛤(Cyclina sinensis)溶菌酶基因在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激下的表达 被引量:14
6
作者 潘宝平 宋欣 +2 位作者 罗凯娅 葛端阳 高玮玮 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期901-906,共6页
利用构建的SMART cDNA文库和高通量测序方法,得到了青蛤溶菌酶相关基因的全长,采用荧光定量RT-PCR方法分析了c型溶菌酶基因在鳗弧菌刺激下的表达变化。结果表明,青蛤有c型溶菌酶和i型溶菌酶基因,分别编码155和182个氨基酸,c型溶菌酶信... 利用构建的SMART cDNA文库和高通量测序方法,得到了青蛤溶菌酶相关基因的全长,采用荧光定量RT-PCR方法分析了c型溶菌酶基因在鳗弧菌刺激下的表达变化。结果表明,青蛤有c型溶菌酶和i型溶菌酶基因,分别编码155和182个氨基酸,c型溶菌酶信号肽为21个氨基酸并具有典型的LYZ1结构域,i型溶菌酶信号肽为19个氨基酸,其结构域为Destabilase domain结构,用于识别和切断谷氨酰胺-甲酰胺与赖氨酸ε-氨基之间的肽键。荧光定量PCR结果显示,在鳗弧菌刺激后6—24h,青蛤血细胞中c型溶菌酶的表达量出现明显上调的趋势,与对照组有显著性差异(P<0.05),说明c型溶菌酶基因在青蛤的免疫应答中起重要的作用。 展开更多
关键词 青蛤 c型溶菌酶 i型溶菌酶 基因表达
下载PDF
异育银鲫c型溶菌酶全长cDNA序列的生物信息学分析及其组织表达分析 被引量:17
7
作者 钱曦 华雪铭 +2 位作者 黄旭雄 冷向军 周洪琪 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期337-347,共11页
利用RACE及克隆等方法获得了异育银鲫(Carassius auratus gibelio)c型溶菌酶基因全长cDNA序列.序列分析表明,所克隆的异育银鲫溶菌酶的cDNA全长751bp,包括溶菌酶基因开放阅读框(ORF)438bp,5′非编码区(UTR)为109bp和3′UTR为204bp.438bp... 利用RACE及克隆等方法获得了异育银鲫(Carassius auratus gibelio)c型溶菌酶基因全长cDNA序列.序列分析表明,所克隆的异育银鲫溶菌酶的cDNA全长751bp,包括溶菌酶基因开放阅读框(ORF)438bp,5′非编码区(UTR)为109bp和3′UTR为204bp.438bp ORF共编码146个氨基酸,其成熟肽的分子量预测值为14543·6,理论等电点为8·86.通过Clustal W软件,将异育银鲫和其它多个物种c型溶菌酶的氨基酸序列进行多序列比对发现,所克隆的异育银鲫溶菌酶编码的氨基酸序列中存在c型溶菌酶的活性中心(Glu53和Asp69),且与活性位点相邻的氨基酸序列高度保守.同时,8个保守的半胱氨酸残基也与其它物种的c型溶菌酶相一致.结合BLASTN分析的结果,可以确认所获得的异育银鲫溶菌酶cDNA序列属于c型溶菌酶.异育银鲫c型溶菌酶和人c型溶菌酶(pdb1at6-)在蛋白质序列上有50%相似性,其三维(3-D)结构非常类似.通过氨基酸空间位置比较发现,两者具有类似的酶活中心,异育银鲫c型溶菌酶只能形成3个二硫键,比人少1个.荧光定量RT-PCR检测和溶菌酶活性测定显示,异育银鲫头肾和脾脏c型溶菌酶mRNA的表达量约为肝胰脏的2·9倍和1·7倍,异育银鲫头肾和脾脏的溶菌酶活性约为肝胰脏的6·2倍和4倍. 展开更多
关键词 异育银鲫 c型溶菌酶 序列分析 蛋白结构预测 MRNA表达 溶菌酶活性
下载PDF
鱼类g型和c型溶菌酶及其在渔业生产上的应用 被引量:4
8
作者 王美娟 刘丹丹 +2 位作者 乔丹 张红绪 孔祥会 《水产科学》 CAS 北大核心 2014年第3期195-200,共6页
高密度、集约化的水产养殖模式,加速了微生物疾病的发生及抗生素药物的滥用,给渔业生产带来生态风险。因此,提高鱼类免疫力,防控鱼类疾病发生,研发高效杀菌的抗生素替代品,是鱼类微生物疾病防控的研究方向。与哺乳动物相比,鱼类... 高密度、集约化的水产养殖模式,加速了微生物疾病的发生及抗生素药物的滥用,给渔业生产带来生态风险。因此,提高鱼类免疫力,防控鱼类疾病发生,研发高效杀菌的抗生素替代品,是鱼类微生物疾病防控的研究方向。与哺乳动物相比,鱼类特异性免疫系统尚不完善,而非特异性免疫系统在抵抗病原微生物时发挥重要作用,其中溶菌酶是鱼类防护病原体入侵的重要非特异性免疫因子。 展开更多
关键词 g型溶菌酶 c型溶菌酶 鱼类
下载PDF
墨吉明对虾c型溶菌酶基因的克隆及表达 被引量:4
9
作者 史黎黎 周婷婷 +4 位作者 李逸群 曾坤辉 陈兆明 王成桂 章双 《广东海洋大学学报》 CAS 2017年第3期8-13,共6页
克隆并鉴定墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)的一种c型溶菌酶基因(Fm-Lyz),其cDNA全长为770 bp,包括71 bp的5′非编码区(UTR)、222 bp的3′UTR和477 bp完整开放阅读框,编码158个氨基酸。SMART分析显示,Fm-Lyz氨基酸序列包含1个L... 克隆并鉴定墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)的一种c型溶菌酶基因(Fm-Lyz),其cDNA全长为770 bp,包括71 bp的5′非编码区(UTR)、222 bp的3′UTR和477 bp完整开放阅读框,编码158个氨基酸。SMART分析显示,Fm-Lyz氨基酸序列包含1个LYZ1结构域和1个含18个氨基酸的信号肽。同源性分析发现,Fm-Lyz与斑节对虾(Penaeus monodon)溶菌酶同源性最高;进化树结果显示,Fm-Lyz与不同对虾的c型溶菌酶聚为一类。实时荧光定量PCR结果显示,Fm-Lyz在所测组织中均有表达,其中在血细胞中表达量最高。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)感染后,Fm-Lyz表达量比对照组明显上调(P<0.05),最高表达量时间分别为感染后24、12 h,暗示Fm-Lyz参与了墨吉明对虾的抗菌免疫防御。 展开更多
关键词 墨吉明对虾 c型溶菌酶 基因 克隆 表达
下载PDF
日本对虾c型溶菌酶的高效重组表达及产物分析 被引量:7
10
作者 杨杰 丛丽娜 +2 位作者 夏涛 常艺海 栾桂花 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期99-105,共7页
从日本对虾(Marsupenaeus japonicus)血液中提取总RNA,根据GenBank已登录的该cDNA序列(AB080238),通过RT-PCR技术扩增出日本对虾溶菌酶(MjLys)成熟肽基因。该基因完整的开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸(aa),前18 aa为信号肽,成熟肽... 从日本对虾(Marsupenaeus japonicus)血液中提取总RNA,根据GenBank已登录的该cDNA序列(AB080238),通过RT-PCR技术扩增出日本对虾溶菌酶(MjLys)成熟肽基因。该基因完整的开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸(aa),前18 aa为信号肽,成熟肽由140 aa组成,分子量为16.4 kD,理论等电点(pI)为8.80。经分析表明,该基因含有一个完整的c型溶菌酶结构域(1-130 aa),包括c型溶菌酶特有的两个活性中心Glu33和Asp50,以及8个保守结构Cys残基。将MjLys成熟肽基因亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌细胞BL21(DE3)pLysS中诱导发酵,实现了重组MjLys蛋白的高效表达,并测定了该重组蛋白对几种细菌的抑菌活性。结果表明,重组日本对虾溶菌酶对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和溶壁微球菌均有显著的溶菌活性。 展开更多
关键词 甲壳纲动物 日本对虾 c型溶菌酶 重组表达
下载PDF
斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性 被引量:6
11
作者 冯亚东 陶妍 +2 位作者 李雯 崔旭 王强厚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期195-202,共8页
C型溶菌酶是存在于各种生物组织中的数种溶菌酶成员中的一员,是重要的细胞内免疫蛋白,具有稳定的空间结构和显著的抑菌功能,被认为是良好的食品保鲜剂和饲料添加剂。为了开发鱼类来源的C型溶菌酶,研究建立了基于毕赤酵母(Pichia pastor... C型溶菌酶是存在于各种生物组织中的数种溶菌酶成员中的一员,是重要的细胞内免疫蛋白,具有稳定的空间结构和显著的抑菌功能,被认为是良好的食品保鲜剂和饲料添加剂。为了开发鱼类来源的C型溶菌酶,研究建立了基于毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统的斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)C型溶菌酶的制备方法。首先通过PCR获得5'和3'端分别添加Xho I和Xba I酶切位点的编码斑点叉尾鮰C型溶菌酶的c DNA(cflyC),其编码由127个氨基酸残基组成的多肽;将该cflyC与表达载体p PICZαA连接以构建重组表达载体p PICZαA-cflyC;转化至毕赤酵母X-33后,通过不同浓度的博来霉素和对酵母基因组DNA的PCR鉴定,筛选得到高拷贝的酵母转化子;经0.5%甲醇诱导,在p H6.0、29℃、250 r/min下培养144 h,得到的表达产物经固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化,得到重组蛋白;经Tricine-SDS-PAGE分析,表明重组蛋白的分子量为15.1 k D;进一步通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定,证明该重组蛋白为预期的重组cflyC。通过福林酚法测得重组cflyC的表达量为2.75 mg/L。琼脂糖凝胶扩散法和酶活力测定证明,重组cflyC对枯草芽孢杆菌具有抑菌活性。本研究首次实现了斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的重组DNA表达,为其大规模制备奠定了基础。 展开更多
关键词 斑点叉尾鮰 c型溶菌酶 毕赤酵母 重组DNA表达 抑菌活性
下载PDF
基于重组毕赤酵母的草鱼C型溶菌酶生物合成及其抑菌活性 被引量:1
12
作者 杨悦 陶妍 +1 位作者 谢晶 钱韻芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期169-179,共11页
C型溶菌酶(Chicken-type lysozyme)作为草鱼(Ctenopharyngodon idella)内源性免疫系统中的重要蛋白质类免疫因子,能在草鱼抵抗病原微生物侵染的过程中发挥重要作用,亦是开发绿色饲料添加剂或生物类抗菌剂的佳选。本研究通过逆转录PCR(re... C型溶菌酶(Chicken-type lysozyme)作为草鱼(Ctenopharyngodon idella)内源性免疫系统中的重要蛋白质类免疫因子,能在草鱼抵抗病原微生物侵染的过程中发挥重要作用,亦是开发绿色饲料添加剂或生物类抗菌剂的佳选。本研究通过逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)克隆草鱼C型溶菌酶的编码基因“CilyC”,再经二次PCR在其5'和3'端添加各种必需位点。将“CilyC”与表达载体“pPICZαA”连接后转入工程菌毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33中,获得重组菌株“X-33/pPICZαACilyC”。经含高浓度博莱霉素的培养基筛选得到高拷贝重组菌株后,对其最适蛋白质表达条件进行优化和筛选。通过镍离子亲和层析法纯化重组菌株的表达产物,并对纯化产物进行Western blot分析和LC-MS/MS质谱鉴定。此外,经平板涂布法和最小抑菌浓度(MIC)法考察重组菌株表达产物的抑菌活性。结果表明:X-33/pPICZαA-CilyC在29℃、250 r/min、1%甲醇浓度、96 h的发酵培养条件下,能产13.7 mg/L的重组蛋白;该重组蛋白经结构鉴定为预期分子量14.5 kD的CilyC蛋白。抑菌试验结果显示:重组CilyC具有明显的抗革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilisi)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)以及革兰氏阴性的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和沙门氏菌(Salmonella)的生物学活性。本研究构建的重组毕赤酵母菌株“X-33/pPICZαA-CilyC”能有效合成草鱼C型溶菌酶,为鱼类来源C型溶菌酶的大规模制备奠定了良好基础。 展开更多
关键词 草鱼 c型溶菌酶 重组毕赤酵母 抑菌活性
下载PDF
人C型溶菌酶发酵与分离纯化工艺的研究 被引量:1
13
作者 王林涛 姚笛 《安徽农业科学》 CAS 2014年第31期10836-10838,共3页
[目的]研究毕赤酵母菌株(Pichia GS115)表达人C型溶菌酶(H-LYZ)的发酵与分离纯化的工艺。[方法]探讨酵母生长规律,研究不同菌体浓度、不同诱导时间对蛋白产量的影响,并且探讨不同pH条件对DEAE-Sepharose FF和CM-Sepharose FF层析分离纯... [目的]研究毕赤酵母菌株(Pichia GS115)表达人C型溶菌酶(H-LYZ)的发酵与分离纯化的工艺。[方法]探讨酵母生长规律,研究不同菌体浓度、不同诱导时间对蛋白产量的影响,并且探讨不同pH条件对DEAE-Sepharose FF和CM-Sepharose FF层析分离纯化目标蛋白的影响。[结果]毕赤酵母菌株表达H-LYZ的最佳发酵条件为:发酵24 h用浓度1%甲醇诱导,以后每12 h用浓度1%甲醇诱导,共6次,在此条件下可获得高产量目标蛋白。DEAE-Sepharose FF和CM-Sepharose FF分离纯化目标蛋白的最佳pH分别为6.65和6.50。[结论]该研究可为人C型溶菌酶的工艺化生产提供理论指导。 展开更多
关键词 c型溶菌酶 毕赤酵母 发酵 DEAE与cM层析
下载PDF
杂色鲍C型溶菌酶基因的克隆及表达分析 被引量:1
14
作者 张洁 王国栋 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2020年第5期328-335,共8页
为了了解C型溶菌酶与杂色鲍(Haliotis diversicolor)的抗菌效应关系,通过SMART-RACE技术克隆到一条杂色鲍C型溶菌酶基因(HdLysC)全长cDNA,经生物信息学分析及应激表达分析得到以下结果:1)基因全长591 bp,开放阅读框441 bp,编码146个氨基... 为了了解C型溶菌酶与杂色鲍(Haliotis diversicolor)的抗菌效应关系,通过SMART-RACE技术克隆到一条杂色鲍C型溶菌酶基因(HdLysC)全长cDNA,经生物信息学分析及应激表达分析得到以下结果:1)基因全长591 bp,开放阅读框441 bp,编码146个氨基酸,有1个LYZ1功能域(20—146aa)、1个保守基序(G/T)SSDYGLFQINS和两个催化位点(Glu 52和Asp 70)。2)多重比对和系统发育分析表明,HdLysC与亲缘关系较近的盘鲍(Haliotis discus discus)C 2型溶菌酶基因的同源性最高。3)组织表达差异实验表明,HdLysC基因在各组织中均有表达且差异显著(P<0.01),在外套膜组织中的表达量最高,而在血淋巴中的表达量最低。4)实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验表明,HdLysC能够响应副溶血弧菌感染,其表达水平随着感染的不同时相而变动。在副溶血弧菌感染4 h后,HdLysC在血淋巴组织中表达量增加(未达到显著差异),而在鳃组织中表达量有所下降;感染12 h后,HdLysC在各组织中的表达量都有明显的增加,呈极显著差异(P<0.01),尤其在血淋巴中增加最多;感染24 h后,其表达量在各组织中都有所降低。 展开更多
关键词 杂色鲍 c型溶菌酶 基因克隆 表达分析
下载PDF
长丰鲫c型溶菌酶基因的克隆及其在细菌感染条件下的表达分析
15
作者 姚佳俊 李忠 +3 位作者 梁宏伟 罗相忠 王丹 邹桂伟 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2017年第3期33-40,51,共9页
为了解c型溶菌酶基因与长丰鲫(Chang Feng Carassius auratus)的抗菌效应关系,本研究利用同源克隆方法获得长丰鲫c型溶菌酶基因cDNA全长序列。结果显示:c型溶菌酶基因全长698 bp,包括5'端非翻译区60 bp,3'端非翻译区200 bp,开... 为了解c型溶菌酶基因与长丰鲫(Chang Feng Carassius auratus)的抗菌效应关系,本研究利用同源克隆方法获得长丰鲫c型溶菌酶基因cDNA全长序列。结果显示:c型溶菌酶基因全长698 bp,包括5'端非翻译区60 bp,3'端非翻译区200 bp,开放阅读框438 bp,编码145个氨基酸。长丰鲫c型溶菌酶基因在肾脏组织中表达量最大,在脾脏、肠道、心脏和脑中大量表达,在肝脏和鳃中表达量相对较低,在皮肤和肌肉中几乎不表达。长丰鲫在感染迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和金黄色葡萄球菌后,在肝脏、肾脏、脾脏和鳃等组织中基因表达量均发生显著变化,出现不同程度的上调。感染迟钝爱德华氏菌后,在脾脏中的上调幅度最大,其次为鳃、肝脏和肾脏;感染嗜水气单胞菌后,在脾脏中上调程度最大,其次是鳃;感染金黄色葡萄球菌后,在脾脏中上调幅度最大。在肝脏和肾脏中,经金黄色葡萄球菌刺激后c型溶菌酶基因的上调幅度最高;在脾脏和鳃中,经嗜水气单胞菌感染后c型溶菌酶基因上调幅度最高。三种刺激后,c型溶菌酶基因升高幅度的不同,说明不同刺激使鱼体组织产生的应激反应能力不同。 展开更多
关键词 长丰鲫(chang Feng carassius auratus) c型溶菌酶基因 克隆 表达分析 抗细菌效应
下载PDF
三疣梭子蟹C型溶菌酶在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性 被引量:5
16
作者 王强厚 陶妍 +2 位作者 崔旭 颜倩倩 张亚莉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期135-142,共8页
C型溶菌酶是存在于各种生物组织中的重要的先天性免疫蛋白,是开发天然抑菌剂的良好候选者。以甲壳类动物三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)C型溶菌酶成熟肽为研究对象,首先通过RT-PCR克隆其编码基因"ptlyC";以pPICZαA为... C型溶菌酶是存在于各种生物组织中的重要的先天性免疫蛋白,是开发天然抑菌剂的良好候选者。以甲壳类动物三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)C型溶菌酶成熟肽为研究对象,首先通过RT-PCR克隆其编码基因"ptlyC";以pPICZαA为表达载体,构建重组表达载体pPICZαA-ptlyC,电转至毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33后,通过高浓度的博来霉素筛选到高拷贝酵母转化子;在28℃、250 r/min和pH6.0的条件下,经1%的甲醇诱导表达72 h,得到含重组ptlyC的培养液上清;经固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化,得到分子量约为25.3 kD的纯化产物。通过菌落计数法证明含重组ptlyC的培养液上清具有抑制革兰氏阳性的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活性;通过琼脂糖凝胶扩散法证明纯化的重组ptlyC具有抑制革兰氏阴性的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和沙门氏菌(Salmonella lignieres)的活性。 展开更多
关键词 三疣梭子蟹 c型溶菌酶 毕赤酵母 重组DNA表达 抑菌活性
下载PDF
共表达MEL和Ec-cLYZ重组表达质粒的构建及其重组蛋白的抑菌效果评价
17
作者 陈婷 何敬文 +6 位作者 赵微 扈立伟 任君 刘青 顾天越 包利霞 金天明 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第9期1-5,12,127,共7页
为了表达一种高效低毒的广谱抑菌蛋白,试验通过T2A连接肽连接蜂毒肽(MEL)与斜带石斑鱼c型溶菌酶(Ec-cLYZ)基因,并克隆至pPICZαA质粒上构建重组表达质粒;将鉴定正确的重组表达质粒用限制性内切酶SacⅠ线性化后电转化至毕赤酵母表达菌株G... 为了表达一种高效低毒的广谱抑菌蛋白,试验通过T2A连接肽连接蜂毒肽(MEL)与斜带石斑鱼c型溶菌酶(Ec-cLYZ)基因,并克隆至pPICZαA质粒上构建重组表达质粒;将鉴定正确的重组表达质粒用限制性内切酶SacⅠ线性化后电转化至毕赤酵母表达菌株GS115感受态细胞中,构建毕赤酵母表达菌株;利用0.5%甲醇诱导表达,收集上清液进行冻干浓缩并纯化,采用Western-blot法检测重组蛋白的表达情况,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定重组蛋白浓度,试管二倍稀释法分别检测不同浓度重组蛋白对兔红细胞的溶血活性,牛津杯法评价重组蛋白的抑菌效果。结果表明:成功构建出重组表达质粒pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL、pPICZαA-Ec-cLYZ和pPICZαA-MEL及毕赤酵母表达菌株GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL、GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ和GS115/pPICZαA-MEL;经甲醇诱导,GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL表达出分子质量为16.5,3.4 ku的重组蛋白,GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ表达出分子质量为16.5 ku的重组蛋白,GS115/pPICZαA-MEL表达出分子质量为3.4 ku的重组蛋白;上清液中重组蛋白Ec-cLYZ-MEL、Ec-cLYZ、MEL的浓度分别为35.49,28.73,27.31 mg/L;重组蛋白Ec-cLYZ-MEL、Ec-cLYZ、MEL在浓度为150 mg/L时对兔红细胞的溶血率分别为2.3%、2.9%、79.0%;停乳链球菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL高度敏感,表皮葡萄球菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL中度敏感,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL低度敏感,且重组蛋白Ec-cLYZ-MEL对测试菌株的抑菌效果优于重组蛋白Ec-cLYZ和MEL。说明重组蛋白Ec-cLYZ-MEL对红细胞无溶血活性且具有良好的抑菌活性。 展开更多
关键词 蜂毒肽 c型溶菌酶 抑菌 毕赤酵母 共表达
原文传递
转“全鱼”溶菌酶基因大菱鲆的研究 被引量:11
18
作者 纪伟 张培军 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期8-14,共7页
用大西洋条鳕 (Macrozoarcesamericanus)抗冻蛋白启动子opAFPpromoter和牙鲆(Paralichthysolivaceus)c型溶菌酶基因构建“全鱼”溶菌酶基因元件opAFP -ly ,首次应用电脉冲精子介导法将该基因片段导入到大菱鲆 (Scophthalmusmaximus)受... 用大西洋条鳕 (Macrozoarcesamericanus)抗冻蛋白启动子opAFPpromoter和牙鲆(Paralichthysolivaceus)c型溶菌酶基因构建“全鱼”溶菌酶基因元件opAFP -ly ,首次应用电脉冲精子介导法将该基因片段导入到大菱鲆 (Scophthalmusmaximus)受精卵内 ,获得原代转基因大菱鲆。先后采用单因子方法和正交实验方法 ,重复实验确定了最适导入条件 :脉冲电压为400V/cm,脉冲次数为5,脉冲宽度为25ms,外源DNA浓度为50mg/L。利用最适导入条件 ,实现基因元件大规模转移。采用PCR技术对1月龄的原代转基因大菱鲆仔鱼的染色体DNA进行分析 ,结果表明外源基因的整合率可达28 %。 展开更多
关键词 抗冻蛋白启动子 c型溶菌酶基因 大菱鲆 电脉冲精子介导法 外源DNA 品种培育 基因工程技术
下载PDF
α—乳清蛋白变体基因的构建和在大肠杆菌中的高效表达
19
作者 李烨 《淮阴工学院学报》 CAS 2000年第4期21-23,共3页
α—乳清蛋白和c型溶菌酶具高度的同源性 ,根据已设计的改造α—乳清蛋白成溶α菌酶的可行方案 ,共需要六个点突变 ,分别是 :10 3Tyr→Ala ;33Thr→Glu ;49Glu→Asp ;32His→Leu ;99Lys→Asn ;5 9Leu→Trp。本文主要完成了α -Lac32 ,3 ... α—乳清蛋白和c型溶菌酶具高度的同源性 ,根据已设计的改造α—乳清蛋白成溶α菌酶的可行方案 ,共需要六个点突变 ,分别是 :10 3Tyr→Ala ;33Thr→Glu ;49Glu→Asp ;32His→Leu ;99Lys→Asn ;5 9Leu→Trp。本文主要完成了α -Lac32 ,3 3 ,49,1 0 3 -pUC9α -Lac32 ,3 3 ,49,1 0 3 -pET32a重组载体的构建 。 展开更多
关键词 α-乳清蛋白 c型溶菌酶 定点突变 同源性 大肠杆菌 高校表达 构建 变体基因 分子生物学
下载PDF
UHF RFID标签基带处理器的低功耗设计 被引量:2
20
作者 王晓晖 张春 +2 位作者 马长明 吴行军 朱秋玲 《半导体技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期502-505,518,共5页
随着超高频RFID标签的应用越来越广泛,在提高其性能上的需求也越来越迫切。对于无源标签,工作距离是一个非常重要的指标。要提高工作距离,就要降低标签的功耗。着重从降低功耗方面阐述了一款基于ISO18000-6TypeC协议的UHF RFID标签基带... 随着超高频RFID标签的应用越来越广泛,在提高其性能上的需求也越来越迫切。对于无源标签,工作距离是一个非常重要的指标。要提高工作距离,就要降低标签的功耗。着重从降低功耗方面阐述了一款基于ISO18000-6TypeC协议的UHF RFID标签基带处理器的设计。简要介绍了设计的结构,详细阐述了各种低功耗设计技术,如动态控制时钟频率、寄存器复用、使用计数器和组合逻辑代替移位寄存器、异步计数器、门控时钟等的应用。结果证明,这些措施有效地降低了功耗,仿真结果为在工作电压为1V,时钟为2.5MHz时,功耗为4.8μW;目前实现了前三项措施的流片,测试结果表明工作电压为1V,时钟为2.5MHz时,功耗为8.03μW。 展开更多
关键词 射频识别 超高频 ISO/IEc18000-6 type c标准 标签 基带处理器 低功耗
下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部