特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

目的探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)分化的影响及作用机制。方法将MC3T3-E1细胞分为正常糖组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、NG+特立帕肽组(5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、HG+特立帕肽组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20μmol/L H-89)。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA实验检测各组cAMP水平;试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;鬼笔环肽染色后观察细胞骨架;Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果各组细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。与NG组相比,NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05);与NG组相比,HG组的上述检测结果则呈减弱趋势。与HG组相比,HG+特立帕肽组细胞cAMP水平上升(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05)。与HG+特立帕肽组相比,HG+特立帕肽+H-89组细胞cAMP水平下降(P<0.05),ALP活性减弱(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力减弱(P<0.05),细胞骨架清晰程度下降,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达下调(P<0.05)。结论特立帕肽可通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路有效改善高糖微环境对MC3T3-E1细胞分化的抑制作用。

脾虚证大鼠模型胃组织cAMP-PKA信号传导通路变化的研究

目的:探讨脾气虚证和脾阳虚证大鼠胃组织的改变与c AMP-PKA信号通路的相关性。方法:将24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、脾气虚组、脾阳虚组,脾气虚采用饱食1 d、禁食2 d、游泳15 d,脾阳虚采用脾气虚证加灌服番泻叶造模,造模后检测大鼠胃组织c AMP活性及PKA、CREB mRNA和蛋白的表达。结果:脾气虚组和脾阳虚组胃组织c AMP活性及PKA、CREB mRNA和蛋白表达均减弱。结论:脾气虚证和脾阳虚证大鼠胃组织的改变与c AMP-PKA信号传导通路有一定的相关性。

脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织cAMP/PKA-Gp信号通路变化的研究

目的:通过分别观察脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织c AMP/PKA-Gp信号转导通路相关蛋白的变化,探讨脾虚痰浊证的改变与c AMP/PKA-Gp信号转导通路的相关性。方法:16只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组和脾虚痰浊组,每组各8只,脾虚痰浊证模型采用喂养高脂饲料,时间6个月。造模结束后,首先通过大鼠的一般状态和生理情况的改变进行模型评价,再分别取胃、心和下丘脑组织。分别采用ELISA法检测痰浊证大鼠不同组织c AMP活性,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测PKA、CREB、PHK和Gp mRNA和蛋白的表达情况。结果:与正常组大鼠比较,脾虚痰浊证大鼠胃、心及下丘脑组织c AMP活性和PKA、CREB mRNA和蛋白的表达均有所减弱(P<0.01或P<0.05);并且脾虚痰浊证大鼠胃和心组织Gp mRNA和蛋白的表达也均有所减弱(P<0.01或P<0.05);此外,脾虚痰浊证大鼠心组织的PHK mRNA和蛋白的表达与正常组比较也存在显著性差异(P<0.01)。结论:脾虚痰浊证大鼠模型成立后,其胃、心及下丘脑组织的改变均与c AMP/PKA-Gp信号转导通路存在一定的相关性。

杨梅素调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病大鼠免疫功能的影响

目的探究杨梅素(myricetin,Myr)调节环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)/cAMP反应成分结合蛋白(cAMP-responseelementbindingprotein,CREB)信号通路对炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)大鼠免疫功能的影响。方法建立IBD大鼠模型,实验分为对照组、模型组、Myr低、中、高剂量(Myr-L、Myr-M、Myr-H,28、56、112 mg·kg^(-1)·d^(-1)Myr)组和Myr高剂量+PKA抑制剂H89(MyrH+H89,112 mg·kg^(-1)·d^(-1)Myr+7 mg·kg^(-1)·d^(-1)H89)组。对大鼠疾病活动指数(DAI)进行评分;测定免疫功能指标及结肠长度;试剂盒测定血清中IL-6、IL-17A、TNF-α、cAMP水平;HE染色观察结肠组织病理变化;流式细胞术测定Treg细胞比例;免疫组化检测结肠组织中MPO表达;Western blotting测定cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白。结果与对照组相比,模型组结肠组织细胞排列紊乱、有大量炎性细胞浸润,出现严重溃疡现象,大量细胞坏死,黏膜水肿,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值显著增加(P<0.05),结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、p-PKA/PKA和p-CREB/CREB水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,Myr-L、Myr-M和Myr-H组结肠组织细胞排列较整齐,黏膜水肿、炎性细胞浸润、细胞坏死及溃疡现象减少,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值显著降低(P<0.05),结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、p-PKA/PKA和pCREB/CREB水平逐渐增加(P<0.05)。与Myr-H组相比,Myr-H+H89组结肠组织病理变化加重,DAI评分、IL-6、TNF-α和IL-17A水平、脾脏系数、胸腺系数、MPO光密度值显著增加(P<0.05),结肠长度、Treg细胞比例、cAMP浓度、pPKA/PKA和p-CREB/CREB水平显著降低(P<0.05)。结论Myr可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路抑制机体炎症水平,调节免疫功能,对IBD大鼠发挥保护作用。

脾气虚证大鼠cAMP-PKA信号通路基因表达变化及四君子汤干预作用

目的:探讨脾气虚证大鼠cAMP-PKA信号通路基因表达变化及四君子汤干预作用。方法:24只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组、脾气虚组、四君子汤组,每组8只,脾气虚证模型采用先饱食1d,再禁食2d,自由饮水,每日游泳至力竭,水温35-37℃,连续15d。造模结束后,通过大鼠的一般状态和生理情况的改变进行模型评价,四君子汤组给予四君子丸混悬液灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水,连续2周,采用ELISA法检测各组大鼠胃组织cAMP及ATP活性,分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测蛋白激酶(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(c REB)、糖原磷酸化酶(GP)、磷酸化酶激酶(PHK)mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组大鼠比较,脾气虚证大鼠胃组织cAMP、ATP含量及PKA、GP、CREB、PHK mRNA和蛋白的表达均有所减弱(P<0.01,P<0.05);与脾气虚组大鼠相比,四君子汤组大鼠胃组织cAMP、ATP含量及PKA、GP、CREB、PHK mRNA和蛋白的表达均有所增强(P<0.01,P<0.05)。结论:四君子汤治疗脾气虚证可能与激活胃cAMP-PKA信号转导通路从而影响目的基因的转录有一定的联系。

基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨枳实-白芍药对调控C-IBS的作用及机制

目的:研究不同配伍比例的枳实-白芍药对对便秘型肠易激综合征(C-IBS)大鼠的影响,探讨其对C-IBS的作用及机制。方法:取SPF级Wistar成年雄性大鼠60只,随机留取10只大鼠作为空白组。其余50只大鼠为实验组,均采用冰0.9%氯化钠溶液灌胃的方法制备C-IBS模型,造模成功后将50只实验组大鼠随机分为模型对照组、匹维溴铵组、枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组,每组10只。经过14 d治疗后,计算粪便含水量,ELISA法检测血清血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)的含量,荧光定量PCR检测结肠组织VIP、PKA、AQP3 mRNA的表达,Western Blot检测结肠组织cAMP、PKA、AQP3蛋白的表达。结果:与模型对照组比较,枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组均可升高粪便含水量(P<0.05),枳实-白芍药对2∶1组可显著升高血清VIP、cAMP、PKA、AQP3含量(P<0.01),枳实-白芍药对1∶1组可升高血清VIP含量(P<0.05),枳实-白芍药对1∶2组可显著升高血清VIP、cAMP、AQP3含量(P<0.01,P<0.05),枳实-白芍药对1∶1组、枳实-白芍药对1∶2组、枳实-白芍药对2∶1组均可显著升高结肠组织VIP、PKA、AQP3 mRNA和cAMP、PKA、AQP3蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且各组之间差异无统计学意义,说明枳实和白芍配伍时以经典名方枳实芍药散的原方剂量即可。结论:枳实-白芍药对配伍比例为1∶1时即可发挥治疗C-IBS的作用,其机制可能与调控VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路有关。

快速眼球运动睡眠剥夺对记忆和突触可塑性的影响及其分子机制的研究进展

睡眠不足是快节奏的现代社会人们需要面对的越来越严重的问题之一,而长期的睡眠不足又会导致认知功能障碍。睡眠剥夺会影响实验动物的学习记忆能力已得到广泛认可。本文回顾总结了近些年有关快速眼球运动睡眠剥夺对记忆和突触可塑性的影响及其分子机制的研究新进展,以期为相关治疗靶点和治疗药物的研究提供理论支持和启发。

莪术二酮对脑缺血再灌注损伤小鼠认知功能及神经功能的保护作用研究

目的探讨莪术二酮对脑缺血再灌注损伤小鼠认知功能、神经功能及作用机制。方法使用线栓法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,低分子肝素钠组、莪术二酮低、高剂量组和造模后分别灌胃给药1 mg/(kg·d),20 mg/(kg·d),60 mg/(kg·d),观察各组小鼠Morris水迷宫实验、行为学评分、脑梗死率、脑组织水含量,测定血清6-keto-PGF1α和6-keto-PGF1α/TXB2比值,脑组织匀浆c AMP和p-CREB的表达水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长,站台穿越次数明显减少(P<0.01),行为学评分、脑梗死率、脑组织水含量、血清TXB2含量明显升高(P<0.01),血清6-keto-PGF1α、6-keto-PGF1α/TXB2比值、脑组织匀浆c AMP、p-CREB明显降低(P<0.01);与模型组比较,莪术二酮给药组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),站台穿越次数明显增加(P<0.05),行为学评分、脑梗死率和脑组织水含量明显降低(P<0.05),血清TXB2含量明显降低(P<0.01),血清6-keto-PGF1α、6-keto-PGF1α/TXB2比值、脑组织匀浆c AMP、p-CREB明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论莪术二酮对脑缺血再灌注损伤小鼠认知功能及神经功能有较好的保护作用,其机制可能改善微循环障碍以及激活c AMP/CREB/BDNF信号通路有关。