猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。 方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。 结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以

猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。

核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。 方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果 :非接种组 ,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色 ;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。 结论 :首次观察到核酸疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象 。

猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达

目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论 在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原 。

猪带绦虫cC1疫苗研制现状

猪囊尾蚴病（cysticercosis cellulosae）又称猪囊虫病（blad-der disease）,是国家卫生部规划防治的重点寄生虫病之一。 猪囊尾蚴病常用吡喹酮、阿苯达唑和甲苯达唑等药物化疗,但长期使用化疗药物具有一定不良反应,且易产生抗药性,这就需要研究更有效的防治措施。Molinari等[1]用120μg猪带绦虫（taeniasolium，Ts）囊尾蚴抗原皮下注射免疫仔猪，

小鼠口腔癌模型骨髓播散细胞RB1CC1纯合性缺失的初步研究

目的初步探讨小鼠口腔癌模型重度异常增生时期骨髓播散细胞RB1CC1基因纯合性缺失及其意义。方法应用激光捕获显微切割(LCM)技术捕获35张重度异常增生时期小鼠骨髓单个核细胞涂片的单个细胞角蛋白阳性(CK+)细胞,单细胞全基因组扩增技术(WGA)扩增其DNA,PCR检测其视网膜母细胞瘤诱导卷曲蛋白(RB1CC1)的纯合性缺失情况,并与舌部正常、重度异常增生以及鳞癌组织各4例对照。结果 LCM成功捕获CK+细胞35个,WGA成功扩增3个,RB1CC1纯合性缺失情况分别为单个CK+细胞(2/3),舌癌变组织(2/4),舌部正常组织(0/4),重度异常增生组织(0/4)。结论小鼠口腔癌模型重度异常增生时期骨髓CK+细胞有RB1CC1基因纯合性缺失,该时期骨髓CK+细胞可能是播散肿瘤细胞。

猪囊尾蚴病免疫学诊断方法及其cC1疫苗研究进展

猪囊尾蚴病又称猪囊虫病,是由猪带绦虫的幼虫引起的一种人畜共患病。该病可累及全身多个器官,并引起严重的临床症状,被世界卫生组织列为需要根除的六种疾病之一。随着科学技术的发展,猪囊尾蚴病的免疫学诊断方法及其疫苗的研究均取得了较大的进展。通过对猪囊尾蚴病免疫学诊断方法及其cC1疫苗的研究进展进行综述,以期为猪囊虫病的防制提供参考。

RB1CC1在人和小鼠口腔癌发生发展中表达的比较研究

目的:比较视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1(RB1CC1)在人和小鼠正常口腔黏膜、上皮异常增生组织及口腔鳞状细胞癌中的表达,并探讨其在口腔癌发生发展过程中的作用。方法:采用免疫组化和RT-PCR检测人及小鼠在正常口腔黏膜、上皮异常增生、高分化鳞癌原发灶组织中RB1CC1蛋白及基因的表达情况。结果:RB1CC1蛋白在人上皮异常增生组、高分化鳞癌组的阳性表达高于正常组(P<0.05);RB1CC1蛋白在鼠正常组、异常增生组、高分化鳞癌组阳性表达逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。人RB1CC1 mRNA的表达量在异常增生组与高分化鳞癌组无明显差异,正常口腔黏膜组均高于异常增生组与高分化鳞癌组(P<0.05);小鼠RB1CC1mRNA的表达量在正常口腔黏膜组与异常增生组、高分化鳞癌组差别无统计学意义。结论:RB1CC1表达在人和小鼠相似,RB1CC1可能参与了口腔鳞癌的早期癌变过程。

毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1的特征研究

目的 研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化。方法 对表达产物行SDS -PAGE ,FPLC离子交换层析和分子筛 ,等电聚焦 ,脱磷酸反应 ,N端氨基酸测序 ,小鼠免疫接种。结果 毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大 ,易于纯化 ,等电点较理论值低 ,重组cC1已被磷酸化 ,N端携带了来自载体的 4个氨基酸 ,免疫原性较原核的明显增强。结论 毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征较原核的有了明显变化 ,尤其是蛋白易于纯化及免疫原性的增强 ,表明毕赤酵母表达系统非常适合重组亚单位疫苗的生产制备。

CC1101的远距离无线数据传输协议设计

本文设计了一种基于CC1101的远距离无线传输协议,通过构筑网络拓扑结构实现了对节点的分层管理,确保数据在多层节点间有序准确的传输,使传输距离最远可达到100km以上,节点数量可以增加到6万个,实现远距离、多节点的数据传输。

XRCC1基因多态性与宫颈癌危险性的研究

目的:探讨XRCC1基因多态性与江苏人群宫颈癌易感性之间的关系。方法:采用基于医院的分子流行病学病例对照研究方法,选取436例经组织病理学确诊为宫颈癌的新发患者作为病例组和503例年龄(±5岁)、性别相匹配的非肿瘤者作为对照组;采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对XRCC1启动子区-77T>C和外显子10区的Arg399Glu基因多态性进行基因分型,比较不同基因型携带者患宫颈癌的危险性;通过分层分析探讨初潮年龄、患者年龄及产次对罹患宫颈癌的影响。结果:与XRCC1-77TT相比,-77TC/CC基因型可减少罹患宫颈癌的危险性(OR=0.64,95%CI=0.48～0.86)。携带3～4个危险等位基因者比携带1～2个等位基因者患宫颈癌的危险性更大(OR=1.44,95%CI=1.01～2.04)。分层分析结果显示,年龄较大和产次较多且携带3～4个危险等位基因者罹患宫颈癌的危险性分别增加1.64倍(95%CI=1.02～2.64)和1.66倍(95%CI=1.01～2.72)。本研究未发现XRCC1Arg399Glu多态性与宫颈癌之间存在显著性相关。结论:XRCC1基因启动子-77T>C多态性显著降低江苏地区汉族人群罹患宫颈癌的危险性。

Neutrophil CC1 plays a protective role in orthotopic liver transplantation: views from the perspective of natural compounds

Orthotopic liver transplantation(OLT)is the mainstay treatment for malignant liver cancer and end-stage liver diseases.Nevertheless,liver ischemia-reperfusion injury(IRI),which is regarded as a major risk factor for primary graft dysfunction,acute or chronic tissue rejection and organ damage[1],greatly limits the indication of liver resection and the application of marginal donor liver,seriously hindering the application of liver transplantation.

猪囊尾蚴特异性抗原cC1重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建与鉴定

目的构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法提取pET28a-cC1质粒DNA,用xho I和BamH I双酶切,用Klenow酶补平xho I酶切末端,同时提取pMV261穿梭质粒载体,用Hind III和BamH I双酶切,用Klenow酶补平Hind III酶切末端,纯化后的酶切产物通过T4连接酶连接,构建pMV261-cC1穿梭质粒,测序验证正确后,将pMV261cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌,构建重组耻垢分枝杆菌,经热诱导后,以猪囊尾蚴病患者血清为一抗进行Western-blotting鉴定。此外,比较正常耻垢分枝杆菌和重组cC1耻垢分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线。结果构建的重组穿梭载体经酶切、测序验证正确。构建的重组耻垢分枝杆菌经热诱导后,SDS-PAGE电泳分析显示,在40 kDa处有外源性蛋白表达,与预期值相符。Western-blotting显示其可被猪囊尾蚴病患者血清识别,表明cC1抗原基因在耻垢分枝杆菌中表达成功。重组耻垢分枝杆菌与正常耻垢分枝杆菌的增殖特性无明显差异。结论成功构建了表达猪囊尾蚴特异性抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。

木犀草素对神经性疼痛模型大鼠MCP-1/CCR2信号轴的影响

目的:探讨木犀草素调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴,对神经性疼痛(NP)模型大鼠神经胶质细胞激活和免疫炎症的影响。方法:采用坐骨神经慢性压迫损伤法构建大鼠NP模型。将大鼠按随机数字表法分为模型组、阿魏酸钠组及木犀草素低、中、高剂量组,每组12只;另选择同期12只大鼠为假手术组。各组大鼠腹腔注射及灌胃相应药物,每天1次,连续14 d。测定大鼠机械性缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL);实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫组织化学法检测脊髓中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)mRNA及蛋白表达;流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^(+)、CD8^(+)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脊髓病理损伤情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测脊髓中MCP-1、CCR2蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠MWT、TWL、CD4^(+)T细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值降低,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8^(+)T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,木犀草素低、中、高剂量组及阿魏酸钠组大鼠MWT、TWL、CD4^(+)T细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值升高,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8^(+)T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达降低,且木犀草素作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:木犀草素具有抗炎、增强免疫、抑制胶质细胞活化,缓解NP的作用,其作用机制可能与抑制MCP-1/CCR2信号轴的激活有关。

基于MCP-1/CCR2通路研究miR-28-5p对老龄自发性高血压大鼠的干预作用

目的研究基于单核细胞趋化蛋白(MCP)-1/CC趋化因子受体(CCR)2通路微小核糖核酸-28-5p(miR-28-5p)对老龄自发性高血压大鼠的干预作用。方法选取SPF级雄性Wistar大鼠6只设为正常组,自发性高血压大鼠18只分为模型组、对照组、miR-28-5p组各6只,miR-28-5p水平检测采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,检测肺功能相关指标,采用酶联免疫法检测炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测MCP-1及CCR2通路相关蛋白表达。结果与正常组相比,模型组、对照组、miR-28-5p组miR-28-5p表达及左室收缩压(LVSP)水平明显较高,左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)水平明显较低(P<0.05);与模型组相比,对照组、miR-28-5p组miR-28-5p表达及LVEDP水平明显较低,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平明显较高(P<0.05);与对照组相比,miR-28-5p组miR-28-5p表达及LVEDP水平明显较低,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平明显较高(P<0.05)。与正常组相比,模型组、对照组、miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较高(P<0.05);与模型组相比,对照组、miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较低(P<0.05);与对照组相比,miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较低(P<0.05)。结论miR-28-5p可通过调控MCP-1、CCR2通路蛋白水平改善老龄自发性高血压大鼠的心功能,干预抑制炎性反应。

靶向猪睾丸支持细胞PPP1CC基因siRNA的筛选与研究

本实验在验证PPP1CC基因在猪睾丸支持细胞ST内源性表达的基础上,针对PPP1CC mRNA靶序列设计并化学合成3段不同的siRNA序列,脂质体瞬时转染ST细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对ST细胞中PPP1CC的干扰效率。结果显示,转染24 h后,各实验组中PPP1CC mRNA表达量均显著低于阴性对照组,其中siRNA-1效果最佳。siRNA-1转染72 h后,PPP1CC蛋白表达量显著下降。本实验成功筛选出PPP1CC基因的有效干扰序列,为后续研究提供实验依据。

基于AOA算法的低功耗蓝牙室内定位系统

设计了基于到达角度法(Angle of Arrival,AOA)的蓝牙定位系统,并搭建了基于CC2652R1蓝牙开发板和STM32单片机的低功耗蓝牙定位系统。现场测试实验结果表明,本系统能够在室内复杂环境下获取亚米级精度的定位信息,精度可达20 cm,适用于电力智慧运维、智慧工厂、商城导引、仓储物流等场景。

猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应

目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水平 ,并进行仔猪的免疫保护实验。结果 :免疫小鼠第 3周出现特异性 Ig G应答 ,第 8周 Ig G水平达到最高 ;小鼠血清的 Ig G2 a检测显示 ,第 2周 Ig G2 a应答即为阳性 ,且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪使其获得了 73%的保护率。结论 :猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗能有效诱导仔猪的免疫保护效应。

异钩藤碱对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 探讨异钩藤碱(IRN)调节单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号通路对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 通过注射和吸入卵清蛋白的方法建立哮喘小鼠模型,将造模成功后的小鼠随机分为哮喘组、IRN低剂量组(IRN-L组,灌胃10 mg/kg IRN)、IRN高剂量组(IRN-H组,灌胃20 mg/kg IRN)、IRN-H+CCL2组[灌胃20 mg/kg IRN+腹腔注射7.5 ng CC趋化因子配体(CCL2)]、阳性对照组(腹腔注射2 mg/kg地塞米松),并以注射和吸入无菌磷酸盐缓冲液的小鼠为空白对照组,每组10只。各药物组小鼠每天给予相应药物1次,连续给药2周。检测各组小鼠气道高反应指标——呼吸间歇(Penh)值,血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素13(IL-13)、IL-4水平,支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞(LYM)和中性粒细胞(NEU)数量,肺组织中MCP-1、CCR2蛋白表达水平;观察肺组织病理学变化并进行炎症细胞浸润评分。结果 与空白对照组比较,哮喘组小鼠肺组织炎症细胞浸润较明显,并有细胞肿胀、脱落现象发生;炎症细胞浸润评分,Penh值,IL-4、IL-13、TNF-α水平,EOS、NEU、LYM数量和MCP-1、CCR2蛋白表达水平均显著增加或升高(P<0.05);与哮喘组比较,IRN-L组、IRN-H组、阳性对照组小鼠肺组织病理损伤得到改善,上述定量指标均显著降低(P<0.05);与IRN-L组比较,IRN-H组、阳性对照组上述定量指标均显著降低(P<0.05);IRN-H组与阳性对照组比较,上述定量指标差异均无统计学意义(P>0.05);与IRN-H组比较,IRN-H+CCL2组上述定量指标均显著增加或升高(P<0.05),CCL2逆转了高剂量IRN对哮喘小鼠的保护作用。结论 IRN可能通过抑制MCP-1/CCR2信号通路的激活来减少哮喘小鼠气道炎症因子的释放,从而达到改善哮喘的目的。