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幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定
被引量:
4
1
作者
王文凯
钟桥
+1 位作者
谢立苹
邵世和
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期347-351,共5页
目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异...
目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性。结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。
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关键词
幽门螺杆菌
cag4
蛋白
原核表达
纯化
融合蛋白
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职称材料
异源表达的幽门螺杆菌cag4蛋白有溶菌糖基转移酶活性
2
作者
王文凯
钟桥
+1 位作者
谢立苹
邵世和
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期630-636,共7页
【目的】构建融合基因原核表达载体pET-28a-cag4,并表达重组融合蛋白cag4,分析重组融合蛋白的酶活性,为新型抗生素(或是抗菌药物)的研发提供作用靶位。【方法】本研究利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切...
【目的】构建融合基因原核表达载体pET-28a-cag4,并表达重组融合蛋白cag4,分析重组融合蛋白的酶活性,为新型抗生素(或是抗菌药物)的研发提供作用靶位。【方法】本研究利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和WesternBolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。【结果】在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得高效表达的重组蛋白;经SDS-PAGE和Western Bolt鉴定表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化,并进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析,表明目的蛋白具有明显的肽聚糖水解活性;通过监测浊度下降速率,比较其在不同pH条件下活性的变化,即ΔA/(min.mg protein),结果表明,幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。【结论】幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。
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关键词
幽门螺杆菌
cag4
蛋白
IV型分泌系统
异源表达
酶谱分析
原文传递
题名
幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定
被引量:
4
1
作者
王文凯
钟桥
谢立苹
邵世和
机构
江苏大学附属人民医院检验科
江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期347-351,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30870096)
江苏省高校自然科学基金项目(08KJB310001)
江苏大学临床医学科技发展基金项目(JLY20080051)资助
文摘
目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性。结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。
关键词
幽门螺杆菌
cag4
蛋白
原核表达
纯化
融合蛋白
Keywords
cag4
in Helicobacter pylori; Prokaryotic expression; Purification; Fusion
protein
分类号
R739.4 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
异源表达的幽门螺杆菌cag4蛋白有溶菌糖基转移酶活性
2
作者
王文凯
钟桥
谢立苹
邵世和
机构
江苏大学附属人民医院检验科
江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期630-636,共7页
基金
国家自然基金项目(30870096)
江苏省高校自然基金项目(08KJB310001)
江苏大学临床医学科技发展基金项目(JLY20080051)~~
文摘
【目的】构建融合基因原核表达载体pET-28a-cag4,并表达重组融合蛋白cag4,分析重组融合蛋白的酶活性,为新型抗生素(或是抗菌药物)的研发提供作用靶位。【方法】本研究利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和WesternBolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。【结果】在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得高效表达的重组蛋白;经SDS-PAGE和Western Bolt鉴定表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化,并进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析,表明目的蛋白具有明显的肽聚糖水解活性;通过监测浊度下降速率,比较其在不同pH条件下活性的变化,即ΔA/(min.mg protein),结果表明,幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。【结论】幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。
关键词
幽门螺杆菌
cag4
蛋白
IV型分泌系统
异源表达
酶谱分析
Keywords
Helicobacter pylori
Ⅳ type secretion system
cag4 protein
Heterogenous expression
activity analysis
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定
王文凯
钟桥
谢立苹
邵世和
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
4
下载PDF
职称材料
2
异源表达的幽门螺杆菌cag4蛋白有溶菌糖基转移酶活性
王文凯
钟桥
谢立苹
邵世和
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
原文传递
已选择
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