巴戟天多糖对大鼠骨质疏松的作用机制研究

目的:探讨巴戟天多糖对大鼠骨质疏松的疗效。方法:通过将30只大鼠分为正常组、模型组和不同剂量的巴戟天多糖组,进行相关实验研究。结果:与正常组相比,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-6水平升高,骨小梁分离度增加,并且骨密度、骨钙、骨磷、ALP含量、废用残根骨体积分数、骨小梁厚度和数量、最大载荷、最大桡度、弹性载荷、刚性系数、CaBp-D9k和CaBp-D28k蛋白表达降低。与模型组相比,巴戟天多糖组的血清TNF-α、IL-6水平降低,骨小梁分离度减少,且骨密度、骨钙、骨磷、ALP含量、废用残根骨体积分数、骨小梁厚度和数量、最大载荷、最大桡度、弹性载荷、刚性系数、CaBp-D9k和CaBp-D28k蛋白表达增加。结论:巴戟天多糖能提高骨密度、骨钙、骨磷和ALP含量,抑制炎症因子分泌,增加CaBp-D9k蛋白表达,改善废用残根咀嚼功能,且对骨质疏松的改善具有积极作用。

甲状旁腺素、维生素D_3对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的影响

目的 探讨甲状旁腺素（PTH）对小肠细胞钙结合蛋白（CaBP）D9k mRNA表达的影响以及探讨PTH是否影响1，25-（OH）2-D3，对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的促进作用。方法 以人结肠癌上皮细胞株caco-2细胞作为小肠细胞体外模型，PTH分三个剂量：10^-8、10^9和10^-12。mol／L分别干预Caco-2细胞5、10、20、40和80min；10^-8mol/L 1，25-（OH）2，-D3，干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂时照为0．1％乙醇；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，联合以上三剂量PTH干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂对照亦为0．1％乙醇。运用RT-PCR方法 进行CaBP-D9k mRNA测定，以GAPDH作为内对照。结果 10^-8mol／LPTH作用20rain，10^12mol／L作用10min，CaBP-D9k mRNA表达量高于空白组，其余时间点低于空白组；10^-8mol／L 1，25-（OH）2．D，干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，CaBP．D9kmRNA的表达均高于溶剂对照（0、1％乙醇）；与10^-8mol／L1，25．（OH）2-D3单独作用比较，10^-8mo/L 1，25-（OH）2-D3，联合以上三剂量PTH作用，CaBP-D9k mRNA相对表达量均低于单独作用的表达量。结论 10^-8mol／L、10^-12mol/L PTH可能促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA瞬时（1～20min）合成增加；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，可明显诱导Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA的表达；PTH可能抵消或者抑制1，25-（OH）2，-D3，促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA表达的作用。

甲氧滴滴涕对小鼠着床期子宫钙结合蛋白D9k基因表达的影响

目的:研究甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠着床期子宫钙结合蛋白D9k(Calbindin-D9k)基因表达的影响.方法:将真孕及假孕小鼠于孕1～3 d(发现阴栓为孕0日)每日给予不同剂量的MXC(0,100,250,500 mg/kg)灌胃,对照组(MXC 0mg/kg)只给芝麻油溶剂.采用RT-PCR检测各组孕鼠子宫Calbindin-D9k基因mRNA的表达;免疫组化染色和图像分析技术检测Calbindin-D9k蛋白表达.结果:①孕鼠经MXC染毒3 d后,250,500 mg/kg MXC组孕鼠子宫Calbindin-D9kmRNA的表达量与对照组相比有显著降低(P<0.05),然而,100 mg/kg MXC组Calbindin-D9k mRNA的表达与对照组相比虽有所减低,但无统计学意义(P>0.05);②Calbindin-D9k蛋白在孕5日主要表达在子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞.与mRNA的表达水平一致,250,500 mg/kg MXC组孕鼠子宫Calbindin-D9k蛋白的表达量与对照组相比显著降低(P<0.05),而100 mg/kg MXC组Calbindin-D9k蛋白的表达与对照组相比无明显差异(P>0.05).结论:MXC可以降低小鼠着床期子宫Calbindin-D9k基因的表达,这可能是其干扰胚胎着床的一个毒性机制.

雌激素及雌激素受体拮抗剂ⅡCI 182780对大鼠垂体泌乳素GH3细胞Calbindin-D9k表达的影响

目的 探讨17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）对大鼠泌乳素腺瘤细胞株GH3细胞Calbindin-D9k（CaBP-9k）表达的影响,并探讨选择性雌激素受体拮抗剂ⅡCI 182780是否能够拮抗雌激素对CaBP-9k表达的诱导作用.方法 以GH3细胞作为垂体泌乳素腺瘤的体外模型,通过免疫荧光法观察CaBP-9k在GH3细胞的表达情况;E2分3个剂量：10-8、10-9、10-10 M对GH3细胞作用24h,分别以RT-PCR法及Western blot法检测CaBP-9k基因和蛋白的表达水平;E2以10-8 M的剂量对GH3细胞作用24 h,同时设ⅡCI 182780拮抗组（10-6M）,被用于研究ER介导的通路对CaBP-9k表达的影响;用免疫共沉淀法检测CaBP-9k与ERα的相互作用关系.结果 在GH3细胞中,CaBP-9k的表达水平随E2给药浓度的增高而增加.当同时给予ⅡCI 182780时,E2诱导CaBP-9k表达的作用被拮抗,其表达水平显著降低.进一步通过免疫共沉淀法证实,在GH3细胞中,CaBP-9k与ERα能够直接结合,E2能够上调2者的相互作用.结论 雌激素可能通过ERα途径诱导GH3细胞CaBP-9k的表达,且CaBP-9k与ERα能够直接结合相互作用.提示CaBP-9k可能参与GH3细胞ER途径相关的生物学效应.

甲状旁腺素和活性维生素D在调节肾脏钙结合蛋白中的协同作用

目的:明确甲状旁腺素(PTH)和1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]在调节肾脏钙结合蛋白中的各自和协同作用。方法:采用免疫组织化学方法观察PTH基因敲除、1α羟化酶基因敲除及双基因敲除对钙结合蛋白D28K和D9K在小鼠肾脏不同部位表达的影响。结果:钙结合蛋白D28K和D9K均定位于肾脏皮质远曲小管及髓质集合管上皮细胞的胞浆内。两种钙结合蛋白在PTH基因敲除小鼠肾脏的表达均明显减少。它们的减少在1α羟化酶基因敲除小鼠更为明显,而以双基因敲除小鼠最为显著。结论:PTH和活性维生素D均能调节钙结合蛋白在肾脏的表达,而且两者具有协同作用。