Intermedin^(1-53)保护异丙基肾上腺素诱导的心肌损伤

目的在异丙基肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠急性心肌损伤的模型上探讨Intermedin153(IMD153)对心肌损伤的保护作用。方法用ISO建立大鼠缺血损伤模型,观察IMD153对心脏功能和心肌组织损伤影响;半定量RTPCR检测心室肌降钙素受体样受体(calcitoninreceptorlikereceptor,CL)、受体活性修饰蛋白(receptoractivitymodifyingprotein,RAMP)1/2/3的mRNA表达水平;放射免疫法测定心肌cAMP的含量和放射配基法测定心肌浆膜IMD受体结合位点。结果与对照组比较ISO组大鼠的左室内压变化速率(±LVdp/dtmax)分别降低23%和44%(均P<0.01),左室舒张末压(leftventricularenddiastolicpressure,LVEDP)增高7.8倍(P<0.01),心室肌CL、RAMP1/2/3的mRNA水平均明显上调(除RAMP2P<0.05,均P<0.01),ISO组心肌浆膜IMD受体Bmax值升高118%〔(83.05±5.75)vs(38.10±1.85)pmol·g-1Pro,P<0.01〕;与单纯ISO组比较,IMD可呈剂量依赖性减轻心内膜下心肌缺血损伤,改善心功能,高剂量Intermedin治疗组大鼠优于低剂量组。结论ISO诱导的缺血损伤心肌的IMD受体上调,而IMD153对心肌缺血损伤具有明显的保护作用。

内源性中叶素可减轻血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大

目的研究内源性中叶素(IMD)与心肌细胞肥大间的相互作用关系。方法血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)孵育乳鼠心肌细胞构建心肌肥大模型。应用Western blot及放射免疫法测定心肌细胞IMD产生和分泌,实时定量PCR(Real-timePCR)方法检测心肌细胞IMD及其受体系统降钙素受体样受体/受体活性修饰蛋白(CRLR/RAMPs)基因表达的变化。并以[3H]-亮氨酸([3H]-Leu)摄入及脑钠素(BNP)基因表达作为心肌细胞肥大的指标。结果 AngⅡ孵育下调心肌细胞IMD生成、表达,并影响其受体系统的基因表达。反过来,利用IMD抗体及其受体阻断剂阻断内源性IMD的生物学效应可增强AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应。结论内源性IMD及其受体系统参与了心肌肥大的发生、发展,对其生成、表达的干预有可能成为今后防治心肌细胞肥大的新途径。

钙化血管平滑肌细胞肾上腺髓质素及其受体系统的基因表达上调

探讨钙化的血管平滑肌细胞肾上腺髓质素生成和肾上腺髓质素受体系统一降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白基因表达的改变及其病理意义。采用β-甘油磷酸盐诱导培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化;放射免疫法测定血管平滑肌细胞分泌的肾上腺髓质素含量;半定量逆转录聚合酶链反应测定细胞肾上腺髓质素、降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白的mRNA水平;原子吸收分光光度计测定细胞钙含量;碱性磷酸酶试剂盒测定血管平滑肌细胞碱性磷酸酶活性;β液体闪烁计数仪测定45Ca2+放射活性。结果发现,与非钙化血管平滑肌细胞比较,钙化血管平滑肌细胞内钙含量、45Ca2+摄入及碱性磷酸酶活性分别增加118％、174％和7倍(P<0.01);钙化细胞肾上腺髓质素分泌量增高99％(P<0.01),肾上腺髓质素、降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平分别增加78％、93.7％、91.8％和109.5％(P均<0.01)。肾上腺髓质素与降钙素受体样受体、受体活性修饰蛋白2和3的mRNA水平呈正相关,其相关系数分别为0.83、0.92和0.93(P均<0.01)。结果提示,血管平滑肌细胞肾上腺髓质素 旁/自分泌功能改变可能参与血管钙化的调节过程。

慢性应激刺激致高血压大鼠下丘脑肾上腺髓质素和降钙素受体样受体基因表达改变

为探讨慢性应激刺激致高血压过程中肾上腺髓质素及其特异性受体组件降钙素受体样受体在下丘脑的动态变化。将48只大鼠分为对照组(18只)和应激组(30只),应激组给予噪声或噪声加足底电击刺激,分别在刺激开始后的第1、5、10和第15天,以及停止刺激后的第5和第10天,处死动物,分离下丘脑,抽提总RNA,用逆转录聚合酶链反应检测肾上腺髓质素和降钙素受体样受体基因表达变化。结果发现,与对照组比较,肾上腺髓质素mRNA表达在应激刺激10天内逐渐上调(第5天0.92±0.04比0.99±0.05,P<0.05;第10天1.26±0.04比0,92±0.04,P<0.01);而后表达下调,在应激刺激第15天仍高于对照组(1.00±0.04比0.92±0.04,P<0.05);应激刺激结束后第5天表达弱高于对照组,但无统计学差异。降钙素受体样受体mRNA表达和肾上腺髓质素mRNA表达趋势大致相同。实验结果说明,下丘脑中肾上腺髓质素及降钙素受体样受体mRNA表达在一定程度上与慢性应激所致血压升高变化过程一致,提示其可能参与应激致高血压过程。

钙化大鼠心血管组织肾上腺髓质素及其受体系统的变化

目的 :探讨钙化大鼠心血管组织肾上腺髓质素 (adrenomedullin ,ADM)生成和ADM及其受体系统———降钙素受体样受体 (calcitoninreceptor likereceptor,CRLR)与受体活性修饰蛋白 (receptoractivitymodifyingprotein ,RAMPs)基因表达的改变及其病理意义。方法 :放射免疫法测定血浆、心肌和血管组织ADM含量 ;半定量RT PCR方法测定心肌和血管ADM、降钙素受体样受体 (CRLR)和RAMP2 / 3mRNA水平。结果 :与对照组大鼠比较 ,钙化大鼠心肌和主动脉钙含量分别高 342 %和 6 0 6 % (P <0 .0 1) ;心肌和主动脉碱性磷酸酶活性分别高 6 6 .5 % (P <0 .0 5 )和 82 .7% (P <0 .0 1)。钙化组大鼠血浆、心肌和血管ADM含量分别较对照组高 5 8% (P <0 .0 1) ,14 .3% (P <0 .0 1)和 2 7.8% (P <0 .0 5 ) ;心肌ADM、CRLR和RAMP2的mRNA水平较对照组分别高 90 .6 % ,15 7.5 %和 119.6 % (均P <0 .0 1) ,而RAMP3mRNA水平较对照组低 14 .1% (P <0 .0 1) ;血管组织ADM、CRLR、RAMP2和RAMP3的mRNA水平较对照组分别高 37.7% (P <0 .0 1) ,4 1.4 % (P <0 .0 1) ,6 0 .1% (P <0 .0 5 )和 13% (P <0 .0 1)。心血管组织中ADM与其受体系统mRNA变化水平有一定的相关性。结论 :钙化大鼠心血管组织ADM生成增加 ,ADM、CRLR和RAMP2 /

高表达受体活性修饰蛋白1对血管紧张素Ⅱ和降钙素基因相关肽诱导的A10细胞降钙素受体样受体膜分布的影响

目的探索受体活性修饰蛋白1(RAMP1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和(或)降钙素基因相关肽(CGRP)诱导的降钙素受体样受体(CRLR)在血管平滑肌细胞(VSMC)的表达和分布的影响,进一步揭示CGRP抑制VSMC增殖的机制。方法 通过酶切、连接、转化等方法构建pCDNA3.1(+)-RAMP1真核表达载体并稳定转染至鼠源性血管平滑肌细胞株A10中,获得稳定高表达RAMP1的细胞系。无转染细胞、转染空载体〔pCDNA3.1(+)〕细胞和RAMP1高表达组细胞〔pCDNA3.1(+)-RAMP1〕分别用AngⅡ100 nmo.l L-1、CGRP 100 nmo.l L-1和CGRP+AngⅡ处理24 h,用MTT法检测细胞存活;逆转录PCR、Western印迹和免疫荧光法分别检测CRLR mRNA含量、蛋白表达及细胞膜分布。结果 单纯转染空质粒或RAMP1对细胞增殖无明显影响。AngⅡ处理对3种细胞存活的影响无显著差异。pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞经CGRP处理24 h后,细胞存活明显高于其他两组细胞(P<0.05);经CGRP+AngⅡ处理,细胞存活明显低于其他两组(P<0.05)。AngⅡ,CGRP和CGRP+AngⅡ处理对3种细胞CRLR mRNA表达无明显影响,但CGRP处理使pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中CRLR蛋白明显高于其他两种细胞(P<0.05),而CGRP+AngⅡ处理使pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中CRLR蛋白明显低于其他两种细胞(P<0.05)。免疫荧光结果显示,经无血清或CGRP处理后,无转染细胞和pCDNA3.1(+)细胞中的RAMP1和CRLR主要分布在胞浆区域;经AngⅡ或CGPR+AngⅡ处理后,pCDNA3.1(+)-RAMP1细胞中RAMP1和CRLR在细胞膜上的分布多于无转染细胞和pCDNA3.1(+)细胞。结论 高表达RAMP1能增强CGRP抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖,其机制可能是通过RAMP1增加CRLR的膜分布,从而增强CGRP受体对CGRP的敏感性有关。

海带多糖对糖尿病小鼠降钙素受体样受体表达的影响

探讨海带多糖对实验性2型糖尿病小鼠降钙素受体样受体(CrlR)表达的影响及其降糖作用的研究。健康雄性昆明小鼠40只,高脂饲料喂养并腹腔注射四氧嘧啶建立2型糖尿病模型,海带多糖灌胃干预治疗。自动血糖仪检测小鼠空腹血糖(FBG)水平,免疫组织化学和Western blot检测脑干、肝脏和胰腺组织中CrlR蛋白表达,RT-PCR检测CrlR mRNA表达。经海带多糖治疗后,动物血清空腹FBG水平较模型组显著降低(P<0.05);肝脏和胰岛细胞CrlR mRNA及其蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。实验表明海带多糖可能通过提高肝脏和胰岛细胞CrlR表达,减轻胰岛素抵抗,发挥降糖作用。

耐力运动和力竭运动对大鼠心脏降钙素基因相关肽及其受体样受体表达的影响

目的:探讨耐力运动和力竭运动对降钙素基因相关肽(CGRP)及其受体样受体(CRLR)在大鼠心脏组织中表达的影响及其作用机制。方法:健康雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、耐力运动组和力竭运动组。耐力运动组和力竭运动组进行10周的跑台耐力训练,力竭运动组在最后一次训练后48h进行连续3天的力竭运动。采用放射免疫法、免疫组化SABC法、免疫荧光法和计算机图像分析技术检测心肌组织CGRP含量和CRLR表达。结果:耐力运动组心肌组织CGRP含量和CRLR表达明显高于对照组(P<0.05);力竭运动组心肌组织CGRP含量和CRLR表达明显低于耐力运动组(P<0.05)。结论:长期耐力运动使心脏CGRP含量增加,CRLR表达上调,增强了CGRP对心脏的作用;力竭运动导致心脏CGRP含量下降,CRLR表达下调,使CGRP对心脏的保护作用减弱。

肾上腺髓质素及受体在肾上腺和嗜铬细胞瘤中的表达

目的研究肾上腺髓质素(ADM)及其特异性受体-受体活性调节蛋白2/降钙素受体样受体(RAMP2/CRLR)mRNA在正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织中的表达。方法提取8例正常肾上腺髓质和18例嗜铬细胞瘤组织总RNA,行逆转录-聚合酶链反应,以扩增的ADM、RAMP2、CRLR条带灰度与内参照GAPDH条带灰度比值进行半定量分析。结果正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织中均可见ADM及其特异性受体RAMP2/CRLRmRNA的表达,其ADM/GAPDH分别为0.48±0.09和0.75±0.24,RAMP2/GAPDH分别为0.79±0.12和1.29±0.30,CRLR/GAPDH分别为0.40±0.08和0.87±0.22,嗜铬细胞瘤组织中ADM及其特异性受体RAMP2/CRLRmRNA的表达显著高于正常肾上腺髓质(P<0.05)。结论ADM可能通过自分泌或旁分泌方式作用于肾上腺局部,在嗜铬细胞瘤的发生发展中起一定的作用。

红景天及红景天苷对低氧状态下脐静脉内皮细胞增殖及表达的影响

目的:探讨红景天及红景天苷对低氧状态下脐静脉内皮细胞增殖及表达的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞,并将其分为正常氧对照组、低氧对照组、低氧红景天组、低氧红景天苷组。采用CCK8法比较不同干预时间和质量浓度下的细胞增殖情况,采用SYBR Green实时定量聚合酶链式反应法检测mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测蛋白表达水平。结果:低氧状态下,红景天和红景天苷均可促进细胞增殖。当红景天培养液质量浓度为10μg/ml、干预时间为24 h时,红景天对细胞的促增殖作用最显著。低氧对照组、低氧红景天组、低氧红景天苷组细胞的肾上腺髓质素和降钙素受体样受体的mRNA、蛋白表达明显高于正常氧对照组,且低氧红景天组、低氧红景天苷组明显高于低氧对照组,低氧红景天组明显高于低氧红景天苷组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:红景天可促进细胞增殖,促进肾上腺髓质素和降钙素受体样受体的mRNA、蛋白表达,而红景天苷是红景天该作用的重要但非唯一有效成分。

间歇运动对肾上腺髓质素特异性受体基因表达的影响

为了研究间歇运动(intermittent exercise)对肾上腺髓质素受体活性修饰蛋白2(Re-ceptor activity modifying protein,RAMP2)和降钙素受体样受体(calcitonin receptor like receptor,CRLR)(两者组成ADM特异性受体)基因表达的影响,探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,ADM)在间歇运动诱导心肌细胞保护中的作用机制。将SD大鼠30只,分为对照组(C组),间歇运动组(IE组)。IE组进行3周的间歇跑台运动,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肾上腺髓质素特异性受体RAMP2和CRLR的基因表达。结果得到IE组大鼠RAMP2mRNA和CRLR mRNA表达明显上调。说明间歇运动上调ADM特异性受体的基因表达,可使心肌组织中ADM特异性受体的含量增加,ADM对于心脏的作用会因特异性受体的伴随性上调而加强,这对于增强心肌收缩力,扩张冠状动脉,使心肌功能及冠状动脉血流量得以保证,在运动中维持血液动力学稳定和保护心肌细胞起重要的作用。

心肌纤维化大鼠Intermedin_(1-53)及其受体的变化

目的在大鼠心肌梗死致心肌纤维化模型上观察Intermedin1-53及其受体的变化。方法通过结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型,4周后检测心功能,梗死区心肌组织的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,IMD1-53和心室肌降钙素受体样受体(CL)、受体活性修饰蛋白(RAMP)1/2/3的mRNA表达。结果与假手术组比较模型组大鼠的心功能明显减低,检测梗死区心肌组织的Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达增加,心室肌IMD1-53、CL、RAMP1/2/3的mRNA水平分别上调75%(P<0.01)、57%(P<0.05)、61%(P<0.01)、48%(P<0.05)和80%(P<0.05)。结论心肌纤维化大鼠的心肌IMD1-53及其受体明显上调,其变化可能参与心肌纤维化的发病过程。

CRLR基因单核苷酸多态性与原发性前房角关闭人群的关联研究

目的:探讨降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor,CRLR)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorpnism,SNP)与汉族原发性前房角关闭人群的关联性。方法:以流行病学人群为研究对象,采用病例对照设计。收集江苏省阜宁县流行病学调查中筛查出的原发性前房角关闭(primary angle closure,PAC)患者232例,正常对照306例。血样经DNA提取后采用TaqMan-MGB荧光探针法检测CRLR基因的rs1157699(C/T)位点SNP基因型,比较两组等位基因及基因型频率的分布。结果:病例组的基因型分布(CC 67.4%,CT 30.0%,TT2.6%),对照组的基因型分布(CC 71.3%,CT 27.0%,TT1.7%),两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中国汉族人群的CRLR rs1157699位点SNP与原发性前房角关闭无相关性。

隐睾症病因的研究

隐症是临床上常见的小儿泌尿生殖系统先天畸形的疾病。隐睾症的病因一直未能明确,解剖学、性激素及其受体、胰岛素样因子3、生殖股神经、降钙素基因相关肽等是目前研究的热点。

经量过多患者子宫内膜中ADM表达及意义

目的:研究经量过多妇女子宫内膜中肾上腺髓质素(ADM)及其相关受体降钙素受体相关受体(CRLR)表达的变化,探讨其与疾病发生、发展的关系。方法:通过免疫组化、半定量RT-PCR及实时荧光定量RT-PCR等方法,研究经量过多组患者(n=18)与健康对照组妇女(n=22)ADM、CRLR在子宫内膜中蛋白表达和基因表达量的差异。结果:两组内膜中ADM蛋白表达出现在内膜的各细胞中,经量过多组子宫内膜间质细胞中ADM蛋白表达明显低于正常对照组(P<0.05);CRLR蛋白在内膜腺上皮细胞中表达明显高于对照组(P=0.008);经量过多组内膜中血管密度值为1.12(0.8～2.2),明显低于正常组的2.3(0.6～3.6)(P<0.05);经量过多组ADMmRNA比正常对照组低25.6%,而两组CRLR mRNA无明显差异。结论:ADM及其受体CRLR在正常子宫内膜生成、修复中发挥重要作用,其影响更多的作用于内膜血管生成;经量过多患者低调控ADMmRNA导致内膜中ADM蛋白表达降低,进一步影响内膜中血管生成和修复,是造成患者出血的原因之一。

肾上腺髓质素及其相关受体在正常、不孕妇女子宫内膜中的表达

目的研究ADM及其相关受体CRLR在正常、不孕妇女子宫内膜中的表达,探讨其与不孕的相关关系。方法收集14例原因不明不孕妇女与13例正常生育期妇女黄体中期(LH+6-LH+8)子宫内膜,通过免疫组化、半定量RT-PCR及实时荧光定量RT-PCR,比较两组内膜中ADM、CRLR蛋白表达和基因表达的差异。结果ADM蛋白表达出现在正常内膜的各个细胞中,而在不孕妇女内膜中间质细胞中表达低于正常对照组(P<0.05);CRLR蛋白表达则以血管内皮细胞表达为主,两组内膜各细胞中的表达无差异(P>0.05);不孕妇女内膜中血管密度值为4.81±0.25,明显低于正常妇女的7.83±0.79(P<0.05);ADM在基因水平的表达不孕组ADM mRNA表达3.99倍高于正常组,而CRLR mRNA表达两组无明显差异。结论ADM及其受体CRLR在正常子宫内膜的生成、修复中发挥重要作用;高表达的ADM mRNA尽管有助于种植窗口期孕卵的着床,但其对内膜血管的低调控可能是造成不孕的原因之一。

受体活性修饰蛋白1促进成骨作用的研究进展

生理状态下,骨吸收与骨形成过程的动态平衡对维持骨组织功能至关重要。而在骨损伤状态下,如何通过促进骨形成,抑制骨吸收从而促进骨愈合过程一直是该领域研究的热点。近年来,受体活性修饰蛋白-1(RAMP1)在骨代谢过程中的调节作用已受到越来越多的关注。RAMP1广泛存在于骨组织中,它可以与不同的G蛋白偶联受体(GPCR)结合,修饰受体行为,调节相应的配体作用。此外,它还能进一步参与到受体介导的信号转导中,影响成骨相关细胞内蛋白的相互作用,从而影响成骨相关细胞增殖、迁移、分化等生物学特性。本文就近年来RAMP1促进成骨作用的研究作一综述。

降钙素基因相关肽家族受体及其受体活性修饰蛋白

降钙素基因相关肽家族是一类多功能的激素家族 ,参与人体的多种生物学功能 ,与多种疾病有关。降钙素基因相关肽受体包括降钙素受体 (CTR)和降钙素受体样受体 (CRLR) ,CTR可以独自与降钙素结合 ,而CRLR必须与一组称作受体活性修饰蛋白 (RAMPs)的蛋白质共同作用才能发挥生物学功能。综述CTR的研究概况及CRLR与RAMPs相互作用的机制和表达调控 ,以期为人们设计新型药物提供参考。

红景天对急性心肌梗死大鼠心肌组织肾上腺髓质素及其受体表达的影响

目的:观察红景天对心肌梗死大鼠心肌组织肾上腺髓质素(AM)及其受体降钙素受体样受体(CRLR)表达的影响,探讨红景天促进大鼠缺血心肌血管新生的可能机制,了解红景天苷是否为红景天该作用的有效成分。方法:建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,造模前7d开始分组灌胃生理盐水、红景天或红景天苷,灌胃持续至造模手术后第7天,处死动物取心脏标本,进行HE染色,免疫组化测定梗死心肌边缘区和非梗死区CD31阳性反应强度,实时定量聚合酶链式反应法和蛋白印迹法检测心肌组织AM、CRLR的表达。结果:红景天组梗死边缘区心肌CD31表达显著高于生理盐水组(P<0.05);红景天组心肌组织AM、CRLR表达均明显高于生理盐水组(P<0.05),红景天苷组各指标的表达水平均介于生理盐水组和红景天组之间。结论:红景天具有上调AM、CRLR表达和促进AMI大鼠缺血心肌血管新生的作用,红景天苷是红景天发挥该作用的有效成分之一。

针刺风池穴对神经源性炎症反应大鼠脑膜中动脉降钙素受体样受体的影响免疫荧光研究

目的:用免疫荧光的方法研究针刺风池穴对神经源性炎症反应大鼠脑膜中动脉降钙素受体样受体(CRLR)影响。方法:清洁级健康雌性SD大鼠44只,分为正常对照组、模型对照组、针刺风池组、风池预防组4组,正常对照组,不做任何处理;模型对照组,造模成功后不做针刺处理;针刺风池组,造模成功后立即针刺风池穴,行针2min,留针20min;风池预防组:在造模前,先行针刺风池穴,行针2mib,留针20min,然后进行造模电刺激。结果:荧光显微镜观察显示,模型对照组脑膜中动脉可见大量绿色荧光着色的CRLR免疫阳性颗粒,亮度高,着色深,荧光强度明显高于其他各组;正常对照组脑膜中动脉可见少量分布有绿色荧光着色的CRLR免疫阳性颗粒;而针刺风池组和风池预防组荧光强度和着色分布肉眼难以区分差别,二者的着色深度与模型对照组比较,荧光强度明显偏弱。结论:神经源性炎症模型大鼠脑膜中动脉CRLR表达明显增多,与正常大鼠相比,针刺风池穴可明显抑制CRLR的表达。