银杏内酯B对阿霉素致心肌细胞损伤的干预作用

【目的】探讨银杏内酯B对阿霉素损伤心肌细胞的干预作用及相关机制。【方法】复制体外H9C2大鼠心肌细胞阿霉素损伤模型,以钙网蛋白沉默RNA(CRTsiRNA)干扰沉默钙网蛋白(CRT)的表达,再应用银杏内酯B对其进行干预。本实验设常规组、CRT组,每组再设银杏内酯B组、银杏内酯B+阿霉素组、阿霉素组及空白组等4个亚组。采用流式细胞技术检测各组大鼠心肌细胞的凋亡率,分别采用实时定量PCR(q PCR)与蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌细胞凋亡信号通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、caspase3、caspase12、CRT mRNA及蛋白表达水平,采用电镜技术观察心肌细胞超微结构。【结果】常规组中,银杏内酯B+阿霉素组细胞凋亡率为(24.87±9.05)%,阿霉素组凋亡率为(46.23±4.98)%,空白组凋亡率为(2.43±0.35)%,差异有统计学意义(P<0.05);银杏内酯B能够显著下调阿霉素损伤的H9C2中升高的JNK、caspase3、caspase12蛋白及mRNA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。CRTsiRNA干扰后,阿霉素组凋亡率为(53.17±9.81)%,空白组凋亡率为(6.00±2.27)%,2者比较,差异有统计学意义(P<0.05),银杏内酯B+阿霉素组凋亡率为(53.17±9.99)%,与阿霉素组无显著性差异(P>0.05)。经CRTsiRNA干扰的细胞中JNK、caspase3、caspase12 mRNA及蛋白表达水平较对应的未干扰组均显著升高,而银杏内酯B并不能下调阿霉素诱导的心肌细胞中上述指标的升高。常规组中,阿霉素组CRT mRNA及蛋白表达水平下降(P<0.05),而经银杏内酯B干预后,CRT mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05);经过CRTsiRNA干扰后,各组CRT mRNA及蛋白表达水平较相应常规组显著下降(P<0.05)。透射电镜观察结果显示,银杏内酯B可以抑制阿霉素对心肌细胞的损伤,但是该作用经CRTsiRNA干扰后表现并不明显。【结论】银杏内酯B可能通过上调内质网钙网蛋白的表达,抑制内质网应激诱导的凋亡途径,从而减轻阿霉素引起的心肌细胞损伤。

免疫原性细胞死亡及其在肿瘤治疗应用中的研究进展

免疫原性细胞死亡(immunogenic cell death,ICD)是细胞死亡的一种形式,通过释放肿瘤相关抗原(tumor associated antigen,TAA)和肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen,TSA),暴露“危险信号”以刺激机体免疫系统产生免疫应答,其特点是释放和/或增加表达损伤相关的分子模式(danger associated molecular patterns,DAMPs)等,主要的DAMPs包括三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、钙网蛋白(calreticulin,CRT)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group box protein B1,HMGB1)、热休克蛋白(heat shock protein,HSP)、Ⅰ型干扰素(typeⅠinterferon,IFNⅠ)和膜联蛋白1(Annexin 1,ANXA1)等。肿瘤经多种特定具有细胞毒性的化疗药物(米托蒽醌、奥沙利铂和紫衫醇等)或物理疗法(放射线、光动力疗法)治疗时,肿瘤细胞会发生ICD,从非免疫原性转变为免疫原性,募集和激活免疫细胞,从而激发或增强抗肿瘤免疫反应。本文就ICD的重要相关分子及诱导ICD在肿瘤治疗应用中的研究进展作一综述。