Calcofluor White M2R荧光染色法识别家蚕微孢子虫

本研究探讨应用荧光染色试剂Calcofluor White M2R染色鉴别家蚕微孢子虫Nosema bombycis。结果表明:在荧光显微镜下可见家蚕微孢子虫孢子被染上强烈的青蓝色荧光,而寄主组织碎片、病毒、细菌等不被染色。该法是一种快速有效鉴别微孢子虫的方法。

焚光染色剂Calcofluor White在活检组织中真菌染色的应用

目的探讨Calcofluor White(CFW)荧光染色法对病理活检组织中真菌的检测价值。方法采用荧光增白剂CFW作为染色液,对确诊为真菌感染的21例病理活检组织中的真菌进行检测,并以经典的六胺银及PAS染色法为对照。结果荧光镜下,真菌被染成亮蓝色,与六胺银及PAS染色符合率达100%。结论 CFW荧光染色法可有效检测出组织中的真菌,值得在真菌病理活检的诊断中推广使用。

微拟球藻原生质体制备与再生

综合考虑酶混合液处理时间和初始细胞密度两个因素,选取终浓度为4%半纤维素酶和2%崩溃酶的酶混合液对一株海洋经济微藻——微拟球藻(Nannochloropsis oculata)进行原生质体的制备与再生,Calcofluor White染料染色可在荧光显微镜下观察到完整的原生质体细胞。实验结果表明:同一初始密度藻细胞酶处理1～3 h制备率较高;酶处理相同时间较高初始密度(2×107～3×107cells/mL)的藻细胞制备率较高,并且原生质体在再生培养基上可再生,生长趋势与野生型细胞一致。考虑到酶处理时间过长或者密度过大会对原生质体的再生产生影响,本实验选择最适酶处理时间为1h,初始细胞密度为2×107cells/mL。

Calcofluor White M2R与Sytox Green双重染色法鉴别蜜蜂微孢子虫

东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)是一种广泛寄生于东方蜜蜂Apis cerana,西方蜜蜂Apis mellifera和熊蜂Bombus Latreille上的寄生虫,对蜜蜂和熊蜂的危害较大,进而影响养蜂业的发展。本实验采用荧光染色试剂Calcofluor White M2R与核酸染料Sytox Green双重染法来鉴别蜜蜂或熊蜂体内的N.ceranae及孢子的存活状态。结果得出,在荧光显微镜下可见死孢子被染上黄绿色荧光,活的呈现蓝白色荧光,而寄主细胞、细菌、病毒等不被染色。这是一种快速有效鉴别N.ceranae及其死活的方法,从而判定蜜蜂或熊蜂体内的微孢子虫在是否具有侵染活性,对微孢子虫的研究及药物防治具有重要作用。

小鼠巨噬细胞吞噬马尔尼菲青霉酵母相细胞的实验观察

目的探讨小鼠腹腔巨噬细胞对马尔尼菲青霉酵母相细胞的影响,为研究抗马尔尼菲青霉的免疫机制提供一定的实验依据。方法将马尔尼菲青霉酵母相细胞与小鼠腹腔巨噬细胞在体内和体外两种方式下进行共培养,分别于60min、120min、240min和360min后进行菌落形成单位(CFU)计数,统计分析体内组与体外组CFU数结果的差异性。利用钙荧光白染色巨噬细胞胞内的马尔尼菲青霉酵母相细胞,荧光显微镜下观察细胞形态特征的变化。结果经体内和体外两种方式共培养,两组之间的CFU计数差异无统计学意义,但两组内不同时间点的CFU计数差异存在统计学意义。荧光显微镜下可见巨噬细胞内的酵母细胞被钙荧光白染上淡蓝色荧光。结论小鼠腹腔巨噬细胞在体内、外对马尔尼菲青霉酵母相细胞不起明显的杀灭或溶解作用,其最大的吞噬时间为共培养240min。钙荧光白染色可快速有效的区分巨噬细胞与真菌,是一种良好的检测真菌方法。

应用荧光染色法检测寄主昆虫体表病原真菌孢子及其附着孢

采用蝗虫翅膀作为侵染组织,探讨了荧光染色剂Calcofluor White M2R在观测寄主体表绿僵菌孢子及其附着孢形成中的应用。结果表明,在荧光显微镜下,清晰可见蝗虫翅膀上发蓝色荧光的绿僵菌孢子、芽管及附着孢,而蝗虫翅膀未被染色,避免了干扰观察目标物。该方法可以准确观察病原真菌孢子在昆虫体表组织的萌发及附着孢形成。

Primary study on Nosema bombycis Infecting the Insect of Drosophila

[ Objective ] The aim of this study was to investigate the infectivity of Nosema bombycis to drosophila, which offered a new vision for systematical studies on the infection mechanism of Nosema bombycis, and also provided reference for the bio-control effect of Nosema bombycis. [ Method ] Nosema bombycis was used to feed wild type and mutant drosophila, and the morphological observation of Nosema bombycis in drosophila body fluid was also analyzed by calcofluor white M2R fluorescent staining. [ Result] Nosema bombycis could infect drosophila, and the number of Nosema bombycis in the infected mutant drosophila was higher than that in wild type drosophila. [ Conclusion ] Nosema bombycis can infect drosophila, which provides primary reference for studies on the infectivity of Nosema bombycis to other hosts and also lays a foundation for further study on the infection mechanism of Nosema bombycis.

鸡白色念珠菌五种染色方法的比较研究

为建立鸡白色念珠菌的最佳染色方法,探讨了苏木精-伊红(HE)染色、过碘酸雪夫氏(PAS)染色、Grocott六胺银(GMS)染色、CalcofluorWhite(CFW)荧光染色和CFW+HE复染共5种染色方法对鸡嗉囊白色念珠菌感染的染色效果。结果显示,HE染色组织结构清楚,但菌丝和孢子结构不十分清晰;PAS染色和GMS染色菌丝和孢子结构清晰,但步骤较多,且耗时长;CFW荧光染色简单、特异,菌丝、孢子结构清晰,但组织结构不清晰;CFW荧光染色后、再用HE复染能清晰显示菌丝孢子结构及病料组织结构,是较理想的鸡嗉囊白色念珠菌的染色方法。