Calponin蛋白家族在细胞骨架重构中的作用

Calponin蛋白家族包括calponin(CaP)和平滑肌(SM)22α,此家族的重要结构特征是由单一CH结构域和CLR结构域组成。CaP和SM22α属于肌动蛋白细胞骨架结合蛋白,可通过与F-肌动蛋白相互作用来调节肌动蛋白细胞骨架重构,影响细胞的生物学行为,进而影响相关疾病的发生与发展。

肝癌相关抗原calponin2的血清免疫反应及其意义

目的:检测肿瘤相关抗原calponin2对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的特异性。方法:应用SEREX(serological identification of antigens by recombinant expression loning)技术检测calponin2抗原在肝癌、肺癌、胃癌、直肠癌、肝炎、肝硬化患者(各31例)及正常健康者(32人)血清的抗体阳性率。结果:相应抗体主要见于HCC患者血清,其血清阳性反应率为54.8%;肝炎、肝硬化患者血清阳性反应率均为3.2%;肺癌、直肠癌、胃癌患者的血清阳性反应率分别是3.2%、9.7%和6.5%;正常人血清阳性反应率为3.1%。Calponin2抗体在肝癌血清中的阳性率最高(P<0.01)。Calponin2阳性率与AFP阳性率及含量、癌组织病理分级、患者年龄及γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)水平无相关性。使用calponin2诊断肝癌的灵敏度、特异性和准确度分别为54.8%、95.2%和89.4%。结论:Calponin2在HCC中有一定的特异性,具有作为新的HCC血清学诊断潜在标志物的意义。

p63和Calponin蛋白在犬乳腺肿瘤中的表达及意义

为便于确定肿瘤的组织学来源,推测其在兽医临床诊断中的鉴别意义,研究p63和Calponin蛋白在20例犬乳腺肿瘤(canine mammary tumor,CMT)病例中的表达,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)SP染色方法和光学显微镜观察进行确诊。结果表明,鼠抗人单克隆抗体p63和Calponin可用于犬乳腺肿瘤病例中肌上皮的表达研究,在乳头状瘤、混合瘤及腺肌上皮瘤等犬良性乳腺肿瘤组织中p63与Calponin表达为阳性或强阳性;在乳头状癌、浸润性导管癌等恶性肿瘤组织中p63与Calponin蛋白表现为阴性或局灶阳性。选择p63与Calponin作为犬乳腺肿瘤组织基底和腺肌上皮细胞的标记物有一定的敏感性和特异性,对良、恶性乳腺肿瘤组织、乳腺肿瘤或癌旁组织的来源和临床诊断等具有鉴别和指导作用。

Calponin、p63及CK5/6联合检测在鉴别乳腺导管上皮增生性病变中的意义

目的探讨Calponin、p63及CK5/6联合检测在鉴别乳腺导管上皮普通型增生(UDH)、非典型增生(ADH)、导管原位癌(DCIS)、微小浸润性导管癌(MIDC)及浸润性导管癌(IDC)中的意义。方法收集8例UDH、5例ADH、6例DCIS、5例MIDC及10例IDC,采用免疫组化染色检测Calponin、p63及CK5/6在各种病变中的表达及分布特点。结果 Calponin及CK5/6表达于肌上皮细胞浆,肌上皮细胞在正常乳腺导管和腺泡的周围围成连续的一圈,p63表达于肌上皮的细胞核,呈串珠状围绕在导管和腺泡的周围;Calponin也表达于间质的血管平滑肌及肌纤维母细胞,而CK5/6和p63只表达于肌上皮细胞;Calponin、CK5/6和p63阳性的肌上皮细胞在UDH、ADH、DCIS、MIDC中依次减少,而IDC中则消失。结论 Calponin、p63及CK5/6联合检测在判定肌上皮细胞存在与否时可相互补充,相互印证,应作为乳腺UDH、ADH、DCIS、MIDC及IDC鉴别诊断的常规检测。

Calponin对培养的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

Ｃａｌｐｏｎｉｎ是一种抗细胞增殖基因，在多种病理情况下表达失调。用脂质体＋载体质粒ｐＣＡＧＧＳ作介导向培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞内导入人重组Ｃａｌｐｏｎｉｎ（ｈＣＮ），目的基因可在该细胞组织内表达，并持续较长时间（４周以上）。ＭＴＴ法的检测结果表明，导入ｈＣＮ基因能明显抑制ＳＨＲ平滑肌细胞的增殖。这种作用对血管成形术后再狭窄的防治和高血压时血管壁肥厚的逆转具有潜在的实用价值。

H2-calponin在胃癌中的表达及意义

目的:研究H2-calponin在胃癌原发灶、癌旁组织及正常组织中的表达、分布及意义,探讨H2-cal-ponin与胃癌发生、分化程度以及侵袭、转移的关系及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测70例胃癌组织,并选取30例癌旁组织及正常胃粘膜组织作为对照进行染色以观察H2-calponin的表达分布和定位情况。结果:H2-calponin在正常胃粘膜、慢性胃粘膜炎(癌旁组织)及胃癌组织中均有表达,其阳性率分别为56.7%、66.7%、58.6%,无显著统计学差异。H2-calponin在伴有淋巴结转移的胃癌组织中的阳性表达率高于无淋巴结转移的胃癌组织中的阳性表达率(P<0.05),具有显著统计学差异;在有浆膜浸润的胃癌组织中的阳性表达率高于无浆膜浸润的胃癌组织中的阳性表达率(P<0.05),具有显著统计学差异;其与患者的年龄、性别和肿瘤的组织分化等因素无关(P>0.05)。肿瘤细胞中H2-calponin均表达于细胞质中。结论:胃癌组织中H2-calponin蛋白的表达与肿瘤侵袭深度和淋巴结转移相关,提示H2-calponin可能与胃癌的转移存在一定的关系。

p63/calponin和CK鸡尾酒双染对诊断乳腺导管原位癌伴微浸润的价值

目的探讨p63/calponin/CK鸡尾酒双染对诊断乳腺导管原位癌伴微浸润的价值。方法收集乳腺切除标本中诊断导管原位癌伴微浸润病例140例,行p63/calponin/CK鸡尾酒双染。收集患者的临床病理资料,并进行随访。结果鸡尾酒双染切片中导管原位癌及其微浸润成分或正常导管腺上皮胞质呈红色,导管原位癌的红色腺上皮周围有间断或连续的棕褐色肌上皮细胞,浸润性区域红色腺上皮周围无棕褐色肌上皮细胞围绕。140例中,11例患者失访,余129例均生存,无乳腺癌相关死亡;6例出现乳腺癌相关复发(BCRR),其中2例(1.4%)复发,2例(1.4%)发生远处转移,2例发现淋巴结转移。乳腺癌相关复发癌与患者的年龄、肿瘤大小、手术方式、肿瘤级别、ER、PR、Her-2状态无关,但与Ki-67增值指数相关。结论免疫组化p63/calponin/CK鸡尾酒抗体的应用,有助于导管原位癌伴微浸润(DCIS-MI)的诊断,值得推广应用。DCIS-MI总体预后较好,很少出现BCRR,高增值指数(Ki-67≥30%)容易发生BCRR。

Calponin的研究进展

Ｃａｌｐｏｎｉｎ的研究进展卫生部呼吸系疾病重点实验室同济医科大学病理生理学教研室（武汉４３００３０）唐大椿槽圣卢中举柯丹王迪浔平滑肌收缩的细胞内信息传递包括肌球蛋白轻链激酶（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＬＣＫ）和蛋白激酶ｃ（ｐｒｏ...

H2-calponin对结肠癌细胞增殖的抑制作用

探讨H2-calponin在结肠癌发生发展中所发挥的作用。Western blot检测H2-calpinin在结肠癌组织和细胞系中的表达;构建H2-calpinin特异性小干扰RNA,稳定转染结肠癌SW480细胞系,同时将转染随机序列的SW480细胞作为对照,通过MTT实验、FACS细胞周期检测等方法研究H2-calponin下调对结肠癌细胞恶性生物行为的影响。结果:H2-calponin的表达与结肠癌的增殖能力具有相关性,下调H2-calponin的表达能够促进结肠癌细胞的增殖。实验率先验证了H2-calponin能够抑制结肠癌细胞的增殖。

P63、Calponin和D2-40在涎腺肿瘤肌上皮细胞中的表达及意义

目的:分析P63、Calponin、D2-40在各型涎腺肿瘤肌上皮细胞中的表达情况,探讨D2-40标记涎腺肿瘤肌上皮细胞的价值。方法:收集附属弋矶山医院2004年1月至2010年1月的6年间,手术切除的各型涎腺肿瘤标本切片作为研究材料。采用免疫组化SP法检测各型涎腺肿瘤组织中P63、Calponin、D2-40的表达。结果:P63、Calponin、D2-40均表达于肌上皮细胞,在各型涎腺肿瘤中总的表达率分别为82.14%、76.79%、66.07%。D2-40在多形性腺瘤、腺样囊性癌、上皮-肌上皮癌均有表达,表达率分别为94.12%、61.90%、66.67%,在恶性多形性腺瘤中未见表达。D2-40在多形性腺瘤、涎腺恶性肿瘤的癌旁组织、癌组织中均出现阳性表达,并以此为序其阳性表达率呈递减趋势,且3者间表达率的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:D2-40是一种较好的涎腺肿瘤肌上皮细胞的标记物;D2-40的低水平表达可能是涎腺肿瘤恶化的活跃指标之一。

Calponin-1表达沉默对子宫平滑肌细胞生物学行为的影响

目的研究抑制calponin-1表达对人子宫平滑肌细胞增殖、侵袭、凋亡和细胞骨架的影响,探讨妊娠时人子宫平滑肌细胞中calponin-1蛋白表达上调在分娩发动中的作用机制。方法构建腺病毒siRNA-calponin-1质粒,转染原代培养的人子宫平滑肌细胞,分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell侵袭实验和流式细胞术(AnnexinV/PI双染法)检测转染siRNA-calponin-1前后对子宫平滑肌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响;同时用Rhodamine-Phalloidin标记子宫平滑肌细胞骨架蛋白(F-actin),荧光显微镜观察其变化并进行荧光定量检测。结果实验组与空载体组、空白对照组比较,子宫平滑肌细胞的运动能力明显下降(P<0.05),细胞增殖能力及凋亡率无明显差异(P>0.05);空载体组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组子宫平滑肌细胞中F-actin的含量减少,排列松散、不规则、微丝较细;空载体组、空白对照组子宫平滑肌细胞中F-actin微丝明显增多增粗、呈束状平行排列。结论体外实验表明抑制calponin-1的表达可以抑制子宫平滑肌细胞的运动而不影响其增殖和凋亡,并可引起子宫平滑肌细胞F-actin的形态变化与重排。此结果提示:妊娠时子宫平滑肌细胞迁移能力的改变及F-actin的重排,可能是导致分娩发动的重要机制之一。

ADDLs通过阻断ERK1／2与h3 Calponin的结合影响细胞质ERK1／2活化

目的探讨ADDLs对细胞质p—ERK1／2的影响，揭示ADDLs影响突触可塑性导致认知功能障碍的分子机制。方法采用体外培养的大鼠海马神经元。免疫印迹方法观察ADDLs对p—ERK1／2的影响，细胞组分分离方法探索ADDLs影响ERK1／2在神经元各部位活化的规律；免疫共沉淀的方法检测ERK1／2与h3 Calponin的结合以及ADDLs对两者结合的影响。结果ADDLs以时间依赖的方式降低了神经元中p—ERK1／2水平；ADDLs对细胞质和细胞核部分ERK1／2的影响具有时序性，ADDLs作用1h显著降低细胞质中p—ERK1／2水平，作用6h细胞核中的p—ERK1／2才显著降低；免疫共沉淀结果显示ADDLs作用1h即可降低ERK1／2与h3Calponin的结合，而此时细胞核中P—CREB水平无显著变化。结论ADDLs作用早期首先通过阻断ERK1／2与h3Calponin的结合影响细胞质ERK1／2活化。

肌上皮细胞标志物p63、α-SMA和Calponin在乳腺良恶性疾病中的表达及意义

目的探讨乳腺肌上皮细胞标志物p63、-αSMA和Calponin在乳腺良恶性疾病中的表达及意义。方法收集乳腺癌标本67例及其癌旁组织。将其分为5组:癌旁正常乳腺组、乳腺增生组、乳腺导管不典型增生组、原位癌组和浸润癌组。应用免疫组织化学S-P法检测p63、-αSMA和Calponin在乳腺癌中的表达。结果在乳腺正常组、增生组、不典型增生组中,几乎所有的肌上皮细胞表达p63、-αSMA和Calponin,而所有的腺上皮细胞3种抗体均为阴性;在原位癌组中3种抗体均表现为:癌巢外围可见p63、-αSMA或Calponin阳性的肌上皮细胞完整或部分包绕;在浸润癌组所有的癌巢外缘均未见p63、α-SMA或Calponin阳性的肌上皮细胞。结论与-αSMA、Calponin相比,p63显示乳腺肌上皮细胞具有相对较高的敏感性和特异性,可作为肌上皮细胞的又一有效的标志物。

绵羊钙调蛋白调节基因Calponin h1的分子克隆

在一项研究中发现,雌激素受体在胚胎发育后期对绵羊子宫平滑肌Calponin(CaP)基因的活动有明显上调作用,而CaP一直被作为观察其他基因表达水平变化的基准参照基因(ReferenceGene)。迄今为止,绵羊CaP尚未完整克隆,为进一步了解其结构和功能,根据人、小鼠和家猪的同源保守区序列设计锚定寡核苷酸引物,通过5′RACE及3′RACE方法克隆了绵羊子宫平滑肌组织全长CaPh1cDNA(GenBank登录号:AY327118),在cDNA序列的基础上,又通过PCR SSP方法获得了CaPh1基因除内含子1、2之外的其余4个内含子全部序列(GenBank登录号分别为:AY771807,AY771808,AY771809,AY771810)。DNA序列测定和分析表明,绵羊子宫平滑肌CaP h1cDNA全长1499bp,编码297个氨基酸,5′UTR及3′UTR分别为79bp和529bp。CaPh1基因组DNA的克隆和序列分析表明,绵羊CaP全长约8kb,由7个外显子和6个内含子组成。同源序列比较发现,该基因外显子在不同物种间相对保守;与人类、野猪、小鼠、大鼠和鸡CalponinmRNA同源性分别为88%、92%、81%、79%和81%,但不同物种间内含子存在较大差异(>50%)。填补了绵羊CaP基因分子克隆的空白,为进一步研究该基因的功能及子宫平滑肌收缩的调节机理奠定了基础。

用infiltrator导管向兔髂动脉壁内导入calponin基因的效果

目的 探讨 calponin基因对血管再狭窄的防治作用 ;评价用 infiltrator系统进行基因转染的实用价值 .方法 以p CAGGS质粒为基因载体 ,以脂质体为介导 ,用 infiltrator浸壁球囊导管向兔髂动脉壁内导入人重组 calponin基因 .结果 实验组 (n=6 )基因转染全部成功 . 4wk后转基因组血管内膜增生较轻 ,而对照组 (n=6 )血管内膜明显增生 ,管腔显著变窄 .未观察到与目的基因及转染系统相关的不良反应 .结论 infiltrator导管是活体局部转基因的合适工具 ;用该导管转染 calponin基因可能成为防治血管再狭窄的有效方法 .

H2-Calponin蛋白在4种癌组织的表达及临床意义

目的探索肿瘤相关抗原H2-Calponin mRNA及其蛋白在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中表达及其临床意义。方法用免疫组织化学和原位RT-PCR检测癌组织中H2-Calponin蛋白及其mRNA的表达分布和定位情况。结果H2-Calponin蛋白主要分布在胞质;在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中阳性率分别为30.0%、27.5%、45.0%和51.8%,肝癌组织阳性率最高。H2-Calponin mRNA定位主要在细胞核周;H2-Calponin mRNA在肺癌、胃癌、鼻咽癌和肝癌中表达阳性率分别为17.5%、10.0%、20.0%和50.0%,在肝癌组织阳性率最高(P<0.05)。H2-Calponin在伴有转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无转移的肝癌组织中的阳性表达率(P<0.05),但该蛋白在4种不同癌组织中的表达与患者的性别、年龄及癌组织的病理分级等因素无关。结论肝癌组织高表达H2-Calponin蛋白和mRNA,可能具有肝癌特异性且与肝癌是否伴有转移相关。

浸润性乳腺癌超声及造影表现与P63及Calponin的相关性

目的分析浸润性乳腺癌常规超声及超声造影特征与P63及Calponin表达的相关性。资料与方法回顾性分析2016年11月—2017年6月重庆医科大学附属第二医院超声科30例术前行乳腺肿块常规超声检查及超声造影,术后经病理诊断为浸润性乳腺癌患者的临床资料及其P63、Calponin免疫组化结果。分析浸润性乳腺癌超声定性及定量指标与P63及Calponin表达的相关性。结果边缘毛刺征与P63表达差异有统计学意义(P<0.05)。增强后直径增大与Calponin表达差异有统计学意义(P<0.05)。微钙化灶及峰值强度与P63及Calponin表达差异均有统计学意义(P<0.05);而与肿块后方回声衰减、血流分级、同侧腋窝淋巴结肿大、穿支血管、局灶性充盈缺损、灌注模式与P63及Calponin表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论浸润性乳腺癌常规超声及超声造影指标与P63及Calponin的表达具有显著差异,可为浸润性乳腺癌患者的个性化治疗及预后判断提供参考。

Calponin对体外培养的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

为观察Calponin对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用,将用liposome+pCAGGS质粒介导的人重组Calponin基因(hCN)导入体外培养的第3代自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)内,发现hCN可在VSMC内持续表达4周以上。MTT检测结果显示,导入的hCN基因能明显抑制SHR的VSMC增殖。这种作用对血管成形术后再狭窄的防治和高血压时血管壁肥厚的逆转具有潜在的实用价值。

H2-calponin在食管鳞癌中的表达及意义

目的:探讨H2-钙调理蛋白(H2-calponin)在食管鳞癌中的表达及意义。方法:免疫组化技术检测30例食管鳞癌患者癌组织及癌旁组织芯片中H2-calponin的表达水平;体外培养人食管鳞癌ECA109、TE-1细胞株和正常食管上皮Het-1a细胞;荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测食管鳞癌细胞株中H2-calponin的表达;将食管鳞癌TE-1细胞分为空白对照组(常规培养)、阴性对照组(转染空载体siRNA)和H2-calponin siRNA组(转染H2-calponin siRNA),采用蛋白质印迹法测定细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、内皮生长因子-A(VEGF-A)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)蛋白的表达;ELISA法测定各组细胞培养上清液中MMP-2,MMP-9和VEGF-C含量;荧光定量PCR检测NF-κB通路抑制剂PDTC处理前(0 h)及处理后0.5,1,2,4,8,12 h H2-calponin mRNA的表达;蛋白质印迹技术检测H2-calponin及NF-κB通路蛋白的表达。结果:免疫芯片结果显示,食管鳞癌组织中H2-calponin表达量低于癌旁组织,H2-calponin阳性表达率与食管鳞癌患者性别、年龄、肿瘤部位及病理分级之间无明显相关性(P均>0.05);荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌细胞中H2-calponin表达明显低于正常食管细胞(P<0.01);下调H2-calponin表达后,PCNA、E-钙黏蛋白和VEGF-A表达无明显变化,而波形蛋白、MMP-2、MMP-9和VEGF-C表达明显增加;ELISA结果显示,MMP-2、MMP-9和VEGF-C分泌量明显增加(P<0.05);PDTC处理后可显著增加IκBα的蛋白表达进而恢复并上调H2-calponin的表达(P<0.01)。结论:NF-κB通路通过抑制H2-calponin表达保证波形蛋白,MMP-2,MMP-9,VEGF-C持续表达,促进食管鳞癌细胞侵袭、转移发生。

Calponin-1和Transgelin蛋白在临产前后妊娠子宫平滑肌中的表达

目的:探讨调宁蛋白1(Calponin-1)和转凝蛋白(Transgelin)在临产前后子宫平滑肌组织中的表达及其在分娩发动中的作用机制。方法:选取14例初产妇的子宫体部及子宫下段平滑肌组织,分为未临产组及临产组。分别用免疫组织化学及Western印迹检测Calponin-1和Transgelin的表达水平。结果:临产组子宫体部和下段平滑肌组织Calponin-1的表达较未临产组明显升高(P<0.05)。临产组子宫体部平滑肌组织中Transgelin的表达较未临产组升高(P<0.05),而子宫下段平滑肌组织中Transgelin的表达2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:子宫体部和下段平滑肌组织中的Calponin-1和子宫体部平滑肌组织中的Transgelin可能参与了子宫平滑肌收缩的调节,与分娩发动关系密切。