印楝素对SL-1的细胞凋亡诱导作用

本文以喜树碱（camptothecin）作对比,以二甲基亚砜（DMSO）作对照,系统研究了印楝素（azadirachtin）对斜纹夜蛾Spodoptera litura离体细胞系（SL-1）的凋亡诱导作用。印楝素0.75μg/mL处理后SL-1细胞后12-72h,倒置显微镜观察可见大量细胞皱缩,体积变小,胞膜气泡化,与邻周细胞脱落,胞浆浓缩,胞膜突起,细胞器密集,核染色质浓缩并凝聚在核膜周边,出现大量凋亡小体;AO染色荧光显微镜观察可见细胞核内致密明亮黄绿色荧光和亮绿色或橘黄色的凋亡小体;透射电镜观察可见细胞皱缩、微绒毛消失、染色质浓缩和边缘化、核膜皱缩界限模糊、部分线粒体嵴结构消失和数量明显增加的吞噬泡等细胞凋亡典型形态学特征;TUNEL实验可见大量被标记为小圆形或环形黄绿色或绿色荧光的阳性凋亡细胞。流式细胞仪测定表明,印楝素0.75μg/mL处理后48h凋亡率最高达11.45%,比对照提高381.3倍;而喜树碱以1.72μg/mL处理亦对SL-1具有相似的诱导作用,处理后36h凋亡率最高达到17.42%。扫描电镜观察表明,印楝素和喜树碱处理后,SL-1细胞表面没有形成明显的“孔”、“洞”、“门”之类的结构破坏。推测印楝素与喜树碱对SL-1的凋亡信号转导方式和途径不同,导致细胞凋亡时序性不同。

喜树果中喜树碱和10-羟基喜树碱的匀浆提取工艺

以喜树果为原料,对匀浆法提取喜树碱和10-羟基喜树碱的工艺进行了研究,确定了最佳的工艺条件:提取溶剂为体积分数55%的乙醇,匀浆时间为8 m in,料液比为1∶15(g/mL)。在此工艺条件下,喜树碱和10-羟基喜树碱的提取率分别为0.801‰和0.546‰。将该法与超声提取、回流提取、常温冷浸提取、水浴振荡提取进行了比较,结果表明,匀浆提取具有得率高、省时间等方面的优势,是一种高效提取喜树碱和10-羟基喜树碱的方法。

高效液相色谱法测定人血浆中9-硝基喜树碱的含量

目的：建立高效液相色谱（HPLC）法检测人血浆中9-硝基喜树碱的浓度。方法：采用Kromasil C18色谱分析柱，以甲醇-磷酸盐缓冲液（48：52，pH 2．5）作为流动相，流速为1．0mL·min^-1，柱温30℃，检测波长370nm，喜树碱为内标，血浆样品用C18固相萃取小柱处理，采用加权最小二乘法计算回归方程。结果：9-硝基喜树碱的线性范围为5～100μg·L^-1，r=0．9999，最低检测限为5μg·L^-1。该方法的提取回收率为83．5％～114．4％，批间和批内RSD〈15％。结论：该方法简便、准确、重现性好且灵敏度高，适用于9-硝基喜树碱临床人体药动学研究。

从DNA转录角度探讨喜树碱类药物的神经毒性

喜树碱类药物作为公认抗肿瘤药,其机制与抑制肿瘤细胞DNA复制过程中拓扑异构酶I(topoisomerase I,Topo-I)的活性有关。因此,分裂增殖活跃的肿瘤细胞对该类药物更为敏感。近年来,实验及临床研究均有报道,喜树碱对不具有分裂增生特性的神经元也显示出较明显的毒性作用,可引起神经元凋亡,但其机制目前并不明确。在深入分析喜树碱类药物药理作用的基础上,结合目前其神经毒性的研究进展,提出喜树碱对神经元的毒性机制可能依然与抑制Topo-I活性有关,可能是通过干扰DNA转录过程中Topo-I的活性,导致DNA转录障碍,最终引发神经元凋亡。并在该研究思路的基础上,初步提出下一步的工作设想。

当年生喜树不同发育阶段叶中喜树碱和10-羟基喜树碱含量变化

采用改变检测波长的反相高效液相色谱法,测定当年生苗不同发育阶段喜树叶中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量。结果表明当年生喜树苗的喜树碱含量与喜树的发育阶段有关,6、7月份,喜树的各项生理活动旺盛,各种生态因素如光照、水分等适宜喜树生长时含量最高,此后逐渐减少,但在8～9月之间喜树碱含量略有增加,可能是成熟叶片对持续干旱天气的一种适应;不同高度喜树叶片中喜树碱含量从顶端到基部逐渐减少。而10-羟基喜树碱的含量一直保持在较低水平,表明其在成熟组织中受发育调控不明显。

拓扑异构酶Ⅰ抑制剂介导的DNA损伤、修复和检验点应答

拓扑异构酶Ⅰ在DNA翻译和转录过程中催化单链DNA的断裂和连接,从而松弛DNA超螺旋,促进复制与转录的进行.拓扑异构酶Ⅰ抑制剂能够阻断DNA链的再连接,结果导致TopⅠ断裂复合物的积累,抑制复制和转录,造成DNA损伤,从而激活DNA损伤检验点,抑制细胞生长和诱发凋亡.喜树碱是最早发现、也是最重要和最广泛使用的拓扑异构酶Ⅰ抑制剂.细胞周期中DNA损伤、修复和检验点应答的分子机制是目前生命科学研究热点,而喜树碱已成为进行相关研究的重要的药理学工具.

抗癌药物喜树碱葫芦[7]脲包合物的制备及性能研究

目的制备并表征抗癌药物喜树碱(CPT)葫芦[7]脲(CB[7])包合物。方法本实验采用冷冻干燥法制备了喜树碱-葫芦[7]脲包合物,通过荧光光谱,傅立叶变换红外光谱(FT-IR),粉末X-射线衍射(XRD),差热分析(DSC)和核磁共振氢谱研究了包合物的形成,紫外光谱考察了包合物的溶解性。结果 CPT与CB[7]形成1∶2的包合物,表观稳定常数为3.95×10^(12)L^2·mol^(-2)。CB[7]包合喜树碱后能显著提高喜树碱的稳定性及溶解性能。结论喜树碱和葫芦[7]脲可形成稳定的包合物,形成包合物后药物的溶解度显著提高。

应用ABEEMσπ方法研究喜树碱类药物与Top1cc的相互作用

应用ABEEM/MM分子力场结合ABEEMσπ/GB/SA方法,分别研究了内酯和羧酸盐形式喜树碱以及不含内酯结构的S39625与Top1-DNA复合物相互作用的结合自由能.从计算得到的结合自由能以及相互作用的结构分析上来看,羧酸盐形式的喜树碱与Top1cc结合的更稳定,不含内酯结构的S39625也表现出和喜树碱相类似的结合Top1cc的能力.由此看来,内酯结构并非是喜树碱捕获DNA拓扑异构酶的必要条件,羧酸盐形式的喜树碱由于带一个负电荷而具有更强的结合能力.研究从分子水平上揭示了喜树碱的结构对抗癌活性的影响,将有助于设计和发展该类抗癌药物的合成.