稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析

建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株,并对该细胞株进行发酵,纯化得到的目的蛋白,通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达;发酵过程中活细胞密度高达6×10~6个·mL^(-1),细胞活力在80%以上,PCV2-Cap蛋白表达量约为370 mg·L^(-1);利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平,证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析,为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。

稳定表达携带SFB标签的猪圆环病毒2型Cap蛋白细胞株的构建及其凋亡活性检测

为建立稳定表达携带SFB标签的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的细胞株并研究其诱导凋亡活性,本研究利用Gateway系统构建真核表达载体p DEST-SFB-ORF2,转染PK15细胞,嘌呤霉素抗性筛选,western blot和免疫共沉淀试验鉴定,获得2株稳定表达携带SFB标签的Cap蛋白的PK15细胞株。间接免疫荧光检测发现重组Cap蛋白在部分细胞内呈点状荧光分布,可能形成病毒性颗粒;流式细胞仪检测表明Cap蛋白的表达可诱导PK15细胞凋亡。本研究成功表达携带SFB标签的PCV2 Cap蛋白,并验证了其诱导凋亡活性,同时为下一步通过串联亲合纯化/质谱方法鉴定Cap蛋白的互作蛋白研究奠定基础。

不同灵芝、多孔菌样品对LN-CaP和A549细胞生长的影响

准确记录不同产地灵芝、多孔菌(云南丽江黑芝、海南黑芝、海南紫芝、越南无柄赤芝、海南假芝、西藏林芝赤芝、浙江庆元方格人工种植赤芝和贵州桑黄、吉林桦褐孔菌)的形态,核对生物学分类中的科属种;观察9个样品和丙酸睾酮对人激素依赖性前列腺癌细胞株(LN-CaP)和肺腺癌细胞株(A549)的细胞图谱。结果显示:不同产地、不同灵芝、多孔菌样品有不同的细胞生理效应;不同浓度丙酸睾酮对LN-CaP细胞株有不同的细胞生理效应;并发现桦褐孔菌细胞图谱与众不同,探讨样品给药量与效应之间的关系。

红景天苷对小鼠成牙本质细胞系MDPC⁃23增殖、迁移和矿化能力影响的研究

目的:探究红景天苷(SAL)对小鼠成牙本质细胞系MDPC⁃23增殖、迁移和矿化能力的影响。方法:体外培养小鼠成牙本质细胞系MDPC⁃23,用不同浓度SAL(0、10、20、50、100μmol/L)培养MDPC⁃23,通过CCK⁃8法、活/死细胞染色、划痕实验、Transwell实验检验SAL对MDPC⁃23毒性、增殖和迁移能力影响。对0、10、20μmol/L SAL组MDPC⁃23进行矿化诱导培养,通过碱性磷酸酶(ALP)染色及活性检测、茜素红染色、钙结节定量测定、实时荧光定量PCR和Western blot实验评估各组细胞矿化能力。结果:SAL可促进细胞的增殖且无明显细胞毒性,以20μmol/L效果最为显著(P<0.05);SAL对细胞迁移有显著促进作用(P<0.05)。SAL诱导MDPC⁃23产生更多的矿化结节(P<0.05)。20μmol/L SAL显著促进ALP表达(P<0.05)。SAL处理MDPC⁃23后的ALP、骨钙素(OCN)和Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)以及牙本质基质蛋白⁃1(DMP⁃1)的基因表达显著增加(P<0.05),OCN和Runx2蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。结论:SAL可促进MDPC⁃23的增殖、迁移和矿化。

基于在线比较测量的主轴承盖单配加工工艺优化

本文以柴油机主轴承盖为研究对象,详述了某高速大功率柴油机主轴承盖单配加工方法及具体操作流程,指出该技术在实际生产中所存在的弊端。为解决上述技术问题,提出并介绍了比较测量法,将该技术应用于主轴承盖单配加工过程,设计制造了比较测量装置,并对该装置使用操作方法进行了阐述。通过对比发现,比较测量技术在主轴承盖单配加工中的实际应用,优化了大功率高速柴油机主轴承盖加工工艺,将主轴承盖单配加工效率提高了1倍,同时也提高了主轴承盖加工质量。

城乡居民大病保险实施情况及改进策略研究

目的:通过梳理我国31个省级单位城乡居民大病保险政策的特点、落实情况及实施效果差异,对比研究国外经验,为我国城乡居民大病保险政策的可持续发展提供建议。方法:文献研究结合实地调研和访谈,对结果数据进行总结分析,借鉴国外重大疾病保险模式及经验,提出完善我国城乡居民大病保险的建议。结果:截至2015年末,我国已有31个省级单位均已全面实行城乡居民大病保险,但不同省份对筹资标准、起付线、封顶线和报销比例的政策要求及实施效果存在差异。结论:应建立更加合理的医疗费用管控机制,推进医疗保障服务一体化管理,构建筹资动态调节机制和风险联动机制。

波瓣帽罩结构和脊线对混合排气系统性能影响

为了明确波瓣帽罩结构和不同脊线形状对混合排气系统气动热力性能的影响,采用基于Navier-Stokes方程组的三维数值模拟方法对含帽罩结构以及脊线发生变化的4个波瓣混合器模型进行了定量研究,并将研究结果同原始波瓣混合器模型进行了对比。结果表明,帽罩结构能改善波瓣周围的流场,减小由于扩张角过大所导致的边界层分离,从而缩小流动损失;波瓣脊线形状的改变虽然能改变波瓣混合器附近的流场,从而减小流动损失,提高总压回复系数,但与此同时,脊线的改变也会影响主、次流间的混合,降低热混合效率。同原型相比,改变波瓣脊线加入帽罩结构后,研究的波瓣混合器总压恢复系数的最大增幅为1%,而热混合效率的最大降幅却为11%。

帽领翻折后外观造型的样板因素分析

采用两片式帽领的制图方法,实际制作帽领并进行拟合人台与人体穿着实验,研究了帽领下口线起翘量不同的情况下帽领翻折外观造型的变化情况,总结了它们之间的定性关系和定量关系。具体实验如下:采用控制变量法,控制帽高和帽宽不变的情况下,改变帽领下口线起翘量的大小制成成衣,进行人台与人体穿着实验后,采集相关数据并进行分析。结果表明:后中帽座高与帽领下口线起翘量、帽中线上下部分的差值与帽下口线起翘量呈线性反比关系,肩线覆盖长度与帽下口线起翘量呈线性正比关系。本研究可为帽领的样板设计提供必要的依据。

重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白制备及其促癌细胞凋亡活性研究

从人乳腺癌细胞系B-Cap-37中克隆出Survivin的cDNA,并对其中编码34位Thr的密码子定点突变为Ala的密码子后,经一系列基因操作方法将天然HIV-TAT转导肽的突变体基因HIV-TATm引入Survivin(T34A)基因的5′端,正确构建了表达载体pRSET-B-HIV-TATm-Survivin(T34A),经转化E.coliBL21(DE3)后诱导表达,目的蛋白质以包涵体形式表达,占菌体总蛋白的45%。经3.7L发酵罐分批发酵可收获650mg/L的包涵体,经阳离子交换、凝胶层析分离和柱上复性与透析,得到纯度达96%以上的可溶性目的蛋白HIV-TATm-Survivin(T34A)。目的蛋白对人乳腺癌细胞B-Cap-37、人胰腺癌细胞SW1990和人肝癌细胞SSMC-7721作用4h后有在细胞形态上呈现出显著的凋亡特征,而对人宫颈癌细胞系Hela不敏感,对正常的人内皮细胞系EVC-304未见明显影响。作用24h时MTT法检测显示,120μg/mL目的蛋白对SW1990、B-Cap-37、SSMC-7721和Hela细胞的抑制率分别达到89%、63%、59.5%和39%,且具有剂量依赖性。对最为敏感的SW1990和B-Cap-37以每孔60μg/mL终浓度的目的蛋白作用48h的流式细胞技术检测发现,凋亡率分别为25.6%和19.3%,与对照相比,实验组细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期的分布发生明显的变化,65%以上的癌细胞被阻滞于G1期。体外实验结果显示重组目的蛋白具有较强的抑制癌细胞增殖和促进凋亡作用,预示着良好的抗癌前景。

消毒帽在减少中心血管导管相关性血流感染中的作用评价

目的系统评价消毒帽和常规手动消毒对CLABSIs发病率的影响。方法作者在2018年3月2日前系统地搜索了Embase,Medline Ovid,Web of Science,EBSCO,Cochrane图书馆,PubMed Publisher,中国生物医学文献光盘数据库(CBM),中国期刊全文数据库(CNKI),万方数据库,维普全文电子期刊(VIP)等数据库。按照纳入排除标准由两人独立进行文献筛选和数据提取,并进行文献质量评价,以每1000导管天CLABSI减少为主要观察指标,表示为发病率比率(IRR),采用RevMan5.3统计软件进行分析。结果总共302篇文章被认定为潜在相关文章,排除重复文章后,根据标题和摘要对953篇文章进行筛选;20篇文章全文阅读。最终,11项研究纳入了系统评价,其中9项纳入了荟萃分析。合并的IRR显示使用消毒帽可有效减少CLABSI(IRR=0.60,95%CI=0.52~0.70,P<0.0001)。结论使用消毒帽与CLABSI发生率较低有关,并且是值得添加到中心血管导管的干预措施。

基于Flexsim离合器盖总成装配线平衡技术

结合观测与数据记录,运用3D仿真软件Flexsim建立了离合器盖总成装配线平衡仿真模型,找出装配线的不合理现象和瓶颈工序。利用人机工程原理及生产线平衡原理对装配线工序进行合并、重组,增加辅助设施。经Flexsim验证,装配线平衡率和产能均得到了提高。

直流盘形悬式瓷绝缘子铁帽采用锌环防电解腐蚀特性的试验研究

随着我国特高压直流工程的大规模建设,直流盘形悬式瓷绝缘子的安全稳定运行日益重要。在直流电流的作用下,绝缘子铁帽势必发生电解腐蚀,这成为影响其机械特性的关键因素,因此,防治绝缘子铁帽的电解腐蚀问题必须加以明确。介绍了铁帽的电解腐蚀机制,概述了我国2条?800 kV直流线路发生直流绝缘子铁帽锈蚀的基本情况,提出了2种防腐锌环的设计方法,并通过试验验证了它们具有良好的防腐蚀性能。研究结果可为直流盘形悬式瓷绝缘子铁帽的防腐蚀设计提供参考。

插肩袖结构设计及其应用技巧

主要从袖中线倾斜角、袖山高、身袖交叉点、插肩线及袖中线的位置等几方面分析了插肩袖的结构设计及其应用技巧,在实际应用中可准确把握插肩袖的结构特点。

基于袖中线斜度与胸围放松量的插肩袖研究

插肩袖以自然大方、舒适流畅等款式特点,在服装设计中应用较多。以同一款式服装为例,以4种袖中线斜度及胸围放松量变化为条件,制作了48件样衣,进行两片插肩袖袖山高尺寸研究。通过20名女大学生的主、客观评价,划分出舒适度等级,利用spss软件分析,总结出最优袖山高与袖中线斜度、胸围放松量的相关性,并建立二元一次方程,以期为服装专业技术人员提供相关的制板参考。

京沈客专老牛河特大桥墩台施工技术研究

桥梁施工中合理的墩台施工技术不仅能保证桥梁的工程质量和使用性能,还能大大的节约施工成本和施工周期。本文以北京至沈阳铁路客运专线老牛河特大桥墩台施工为例,研究探讨了特大桥承台、圆端形实体墩及空心墩墩身施工技术方案及施工工艺流程,介绍了墩身冷却循环系统设计方案及桥梁墩台不均匀沉降观测方法,采用的新工法既保证了工程的顺利进展,取得了一定的经济效益,可为类似桥梁工程设计与施工提供借鉴。

Shell干煤粉气化装置长周期运行的优化技改

针对Shell干粉煤气化装置运行中存在的烧嘴头烧嘴罩泄漏、气化炉堵渣、合成气冷却器入口积灰、高温高压飞灰过滤器稳定性差及系统锁斗阀门磨蚀等问题,进行了技术攻关与优化改造。通过配煤对煤质的改善、设备材质的国产化升级改造,工艺控制指标及系统运行程序的优化,实现了合成气冷却器的自清洁,降低了气化炉出口温度,延长了飞灰过滤器滤芯、烧嘴头烧嘴罩及关键阀门的使用寿命,确保了气化炉的长周期安稳运行。

夯扩桩基偏差的处理研究

住宅楼及宿舍楼的基础，采用承台下单排夯扩极发生垂直桩轴线偏离大于100mm（规定值）时，对桩基的处理及理论计算.

方形屏蔽微带开槽线的分析

本文应用保角变换的方法讨论了方形屏蔽微带开槽线的解，导出了其特性阻抗及分布电容的解析表达式，并进行了数值计算．

一种新型吹气式理盖机的设计研究

对一种新型吹气式理盖机进行设计研究。通过对吹气式理盖机的机械结构设计,保证了吹气式理盖机的运行精度和可靠性。同时结合气路系统、PLC的自动控制来实现塑料盖的理盖、排盖和输出。

医用铝塑盖自动化清洗生产线系统的设计与实现

针对目前医药包装用铝塑盖清洗时存在生产效率低、稳定性较差及劳动强度大等问题,设计开发了一条全自动清洗生产线。在分析生产线工艺流程的基础上给出了整体布局、关键结构设计,并采用S7-200系列PLC控制器对清洗生产线进行有序控制。投运结果表明:系统运行稳定可靠、操作方便,降低了生产成本。