兔抗Cap43多克隆抗体制备和初步纯化

目的制备兔抗Cap43多克隆抗体。方法以30个氨基酸组成的多肽为半抗原与钥孔血蓝蛋白(mcKLH)通过碳化二亚胺(EDC)法化学偶联成完全抗原(多肽-mcKLH)免疫家兔;制备兔抗Cap4443多克隆抗体;斑点ELISA法检测抗体效价,经辛酸-硫酸铵法初步纯化抗体后,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳考马斯亮蓝检测其纯化后的纯度。结果经免疫11周得到兔抗Cap43多克隆体,抗体效价为1:500。结论采用EDC化学偶联半抗原和大分子载体蛋白mcKLH,使其成为同时具有免疫原性与免疫反应性的完全抗原,用其免疫家兔获得多克隆抗体。

辛酸-硫酸铵法在纯化血清旋毛虫特异性IgG抗体中的应用

目的从旋毛虫感染的大鼠和兔血清中纯化抗旋毛虫IgG抗体。方法分别用辛酸-硫酸铵法(CA-AS)、硫酸铵沉淀法(AS)纯化旋毛虫感染的大鼠和兔血清中抗旋毛虫IgG抗体。结果IgG抗体纯化率CA-AS法为80.05%～83.22%,AS法为67.00%～71.08%;得率CA-AS法为7.85～8.79mg/ml,AS法为12.04～12.12mg/ml;回收率CA-AS法为52.55%～55.03%,AS法为61.36%～64.87%。CA-AS法得率和回收率均低于AS法,但纯化率高于AS法。ELISA法测定CA-AS法和AS法纯化的抗体效价不变。结论CA-AS法是一种简便?快速?有效的纯化血清IgG抗体的方法,可用于大鼠和兔血清抗旋毛虫IgG抗体的纯化。

抗哈氏弧菌卵黄抗体不同提取方法比较研究

比较了苯酚法、冷乙醇法、硫酸铵法和辛酸-硫酸铵法4种方法分离提取抗哈氏弧菌卵黄抗体的效果。通过紫外分光光度计法测定蛋白质含量、SDS-PAGE电泳检测抗体纯度、间接ELISA检测抗体效价。结果显示,辛酸-硫酸铵方法比单独使用硫酸铵方法得到的鸡卵黄抗体IgY纯度高、而效价一样。实验优化了卵黄抗体的分离纯化技术,得到纯度高、特异性强的IgY。