多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白基因研究

目的检测分析鲍曼不动杆菌的耐药性、全面了解多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺类耐药机制;方法药敏试验为Kirby-Bauer法、基因检测采用PCR对20株多药耐药鲍曼不动杆菌进行了22种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白carO基因检测;结果20株鲍曼不动杆菌耐药率除亚胺培南外,其余药物耐药率均在95%以上、共有TEM、PER、ADC等3种β-内酰胺酶基因呈阳性,阳性率分别为95.0.0%(19/20)、25.0%(5/20)、100.0%(20/20)。膜孔蛋白carO基因突变率达100.0%;结论本组MDR-ABA菌多种β-内酰胺类药物耐药与产TEM、PER、ADC等3种β-内酰胺酶相关外,还与膜孔蛋白编码基因carO突变有关。

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌外膜蛋白表达的分析

目的筛选碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌并了解其耐药情况,分析碳青霉烯类耐药菌及碳青霉烯类敏感菌的外膜蛋白表达情况。方法采用琼脂二倍稀释法筛选碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌,运用聚合酶链反应(PCR)技术检测外膜蛋白基因carO;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析细菌外膜蛋白的表达情况。结果 110株临床分离鲍曼不动杆菌中的32株细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药,此32株碳青霉烯类耐药菌除对多黏菌素B敏感性为100%,对其他所试药物均呈不同程度耐药;碳青霉烯类鲍曼不动杆菌均携带carO基因,SDS-PAGE分析显示碳青霉烯类耐药菌株与敏感菌株相比,在相对分子质量约22×103和50×103等处的蛋白条带存在差异。结论鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药情况严重,且碳青霉烯类耐药菌与敏感菌的外膜蛋白在表达上存在明显差异。

泛耐药鲍曼不动杆菌PBP1A、CarO及β-内酰胺酶的编码基因分析

目的了解一株泛耐药鲍曼不动杆菌（js01株）可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制。方法对自2011年12月宁波市第一医院住院患者的痰样本js01株分离，用gyrA和parC基因PCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种。用PCR法分析33种β-内酰胺酶基因（13种A类酶基因、10种B类酶基因、2种C类酶基因、8种D类酶基因）和插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测以及CarO膜孔蛋白编码基因。再用分段PCR法扩增PBP1A编码基因，双向测序后拼接成全长序列。结果js01株检出β-内酰胺酶TEM-1、ADC-30、OXA-23和OXA-66编码基因。插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测显示ISabal-ADC-30和ISabal—OXA-23为阳性。js01株carO基因序列与鲍曼不动杆菌敏感株（SDF）相比存在有义突变，氨基酸序列一致率为76．0％（189／249），存在3个氨基酸缺失。is01株PBP1A编码基因序列与SDF株相比存在有义突变，氨基酸序列的一致率为99．6％（848／851），存在3个氨基酸变异，但js01株PBP1A蛋白分子立体结构比SDF株丢失2个螺旋结构。结论本株鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与该菌株管家基因（PBP1A、CarO编码基因）突变与可移动遗传元件介异的β-内酰胺酶编码基因有关。

泛耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶及膜孔蛋白编码基因与ISaba1-OXA23连锁检测

目的了解一组泛耐药鲍氏不动杆菌中β-内酰胺类药物耐药机制。方法收集南通大学附属医院2011年1-4月临床标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析A、B、C、D 4类共33种β-内酰胺酶编码基因、膜孔蛋白carO编码基因、插入序列ISaba1与β-内酰胺酶OXA-23基因(ISaba1-OXA-23)连锁检测。结果 20株鲍氏不动杆菌均检出TEM-1、ADC-30、OXA-23等3种β-内酰胺酶基因,检出率均为100.0%,carO基因均存在有义突变,插入序列ISaba1与β-内酰胺酶OXA-23基因(ISaba1-OXA-23)连锁检测均为阳性。结论该组鲍氏不动杆菌耐β-内酰胺类药物与产TEM-1、ADC-30、OXA-23等3种β-内酰胺酶、膜孔蛋白CarO编码基因存在有义突变、插入序列ISaba1与β-内酰胺酶OXA-23基因(ISaba1-OXA-23)连锁检测阳性相关。

对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌外膜蛋白表达及其分子流行病学的研究

目的：分析鲍曼不动杆菌耐药情况、分布特征，以及院内、院间主要克隆株的流行情况；探讨外膜蛋白介导对碳青霉烯类耐药的可能机制。方法收集青岛大学附属医院黄岛院区及解放军第四〇一医院2013年7月至2014年7月鲍曼不动杆菌临床分离株145株，采用纸片扩散法对其进行药敏试验；应用肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）对菌株进行DNA分型及同源性分析，并采用PCR扩增外膜蛋白carO基因。随机抽取碳青霉烯耐药组30株鲍曼不动杆菌和敏感组17株鲍曼不动杆菌，用超声破碎及高速离心法提取外膜蛋白，并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析外膜蛋白的表达情况。结果145株鲍曼不动杆菌对临床常用16种抗菌药物普遍耐药，其中耐碳青霉烯类128株（耐药率88.3%），多重耐药（MDR）137株，泛耐药（XDR）126株；对米诺环素敏感率最高（79.3%），其次是阿米卡星（40.7%）。碳青霉烯耐药组carO基因阳性率达97.7%（125/128），碳青霉烯敏感组carO基因阳性率达17.6%（3/17）。SDS-PAGE显示，碳青霉烯敏感组17株鲍曼不动杆菌约在相对分子质量47000（16株）、37000（13株）和29000（13株）处有相应条带表达；而耐药组30株在这3处分别有20株、25株、23株呈不同程度的缺失或减弱。聚类分析显示，145株鲍曼不动杆菌共分为8个ERIC基因型，其中A型71株和E型37株，为主要流行株。结论两家医院临床分离鲍曼不动杆菌耐药情况严重且存在院内、院间流行。外膜蛋白carO基因在耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中广泛存在，外膜蛋白表达的缺失或减弱是鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类的重要机制之一。

多药耐药鲍氏不动杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药机制的研究

目的了解临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAB)对β-内酰胺类抗菌药物的耐药机制。方法从2009年4-8月中山大学附属第三医院住院患者中分离出20株MDRAB,用K-B法测定鲍氏不动杆菌对13种抗菌药物的敏感性,采用PCR及序列分析的方法分析28种β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白carO基因。结果检测TEM、OXA-23群、ADC等3种β-内酰胺酶基因呈阳性,阳性率分别为100.0%、65.0%、100.0%;其余均阴性,膜孔蛋白carO基因检测均阳性。结论 MDRAB对多种β-内酰胺类抗菌药物耐药主要与产OXA-23群碳青霉烯和ADC型AmpC酶相关;产OXA-23型碳青霉烯酶是导致MDRAB对碳青霉烯类耐药的重要原因,与产金属β-内酰胺酶和膜孔蛋白缺失无关。