大强度跑台运动及低频电刺激对大鼠骨骼肌及血清CAⅢ表达的影响

目的:观察急性大强度跑台运动及低频电刺激后大鼠骨骼肌及血清CAⅢ表达的变化,探讨CAⅢ与骨骼肌疲劳之间的关系。方法:36只雄性SD大鼠随机分为对照组、运动组和刺激组。运动组参照Bedford方案进行一次大强度跑台运动,造成大鼠运动性疲劳;刺激组采用低频电刺激的方法诱发大鼠腓肠肌疲劳。Western blot检测大鼠骨骼肌及血清CAⅢ的表达水平。结果:(1)与对照组相比,运动组大鼠比目鱼肌CAⅢ的表达水平明显降低(P<0.05),但趾长伸肌及血清CAⅢ的表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。(2)随刺激时间的延长,大鼠腓肠肌的肌张力峰-峰(P-P)值逐渐降低,与刺激开始时相比,刺激10min即显著降低(P<0.05);而疲劳指数(FI)则随刺激时间的延长逐渐增加,刺激40min时FI高达52.14%左右。(3)与对照组相比,刺激组大鼠腓肠肌CAⅢ的表达水平显著降低(P<0.05),而比目鱼肌及趾长伸肌CAⅢ的表达水平虽均有下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:急性大强度跑台运动及低频电刺激诱发疲劳后均可引起相应骨骼肌CAⅢ表达下调(前者表现为比目鱼肌,后者为腓肠肌),表明骨骼肌疲劳的发生可能与其CAⅢ表达下调有关。

充血性心力衰竭患者血清抗碳酸酐酶Ⅱ和Ⅲ自身抗体检测的意义

目的：使用已建立的方法检测充血性心力衰竭（CHF）患者血清中的抗碳酸酐酶Ⅱ和Ⅲ自身抗体、抗氧化物及细胞因子水平，初步评价其临床意义。方法选取58例3个月～1年前曾发生心肌梗死的CHF患者和58名健康对照者，测定其血清抗碳酸酐酶Ⅱ和Ⅲ自身抗体、红细胞沉降率（ESR）、超氧化物歧化酶（SOD）等5种抗氧化物和白细胞介素2（IL-2）等5种细胞因子的水平。结果 CHF患者血清抗碳酸酐酶Ⅱ自身抗体和ESR水平显著高于对照组（P＜0．05），SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、过氧化氢酶（CAT）和总抗氧化能力（TAC）显著低于对照组（P＜0．05），丙二醛（MDA）水平显著高于对照组（P＜0．05）。CHF患者血清的IL-2和白细胞介素17（IL-17）水平较对照组显著升高（P＜0．05），白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）与对照组差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 CHF患者可能存在自身免疫的现象，IL-2、IL-17和抗氧化能力的检测可能作为判断抗碳酸酐酶Ⅱ抗体出现的指标。

血清抗碳酸酐酶Ⅲ抗体ELISA检测方法的建立与初步应用

目的建立人血清抗碳酸酐酶(CA)Ⅲ抗体的ELISA检测方法,并对系统性红斑狼疮、皮肌炎、糖尿病肾病、高血压肾病患者和健康人群的血清抗CAⅢ抗体水平进行初步调查。方法使用抗CAⅢ抗体标准品、CAⅢ及相应酶标抗体建立血清抗CAⅢ抗体ELISA检测方法,验证试剂稳定性、标本保存稳定性,并进行精密度、灵敏度、回收率、抗干扰性等方法学评价;各项技术指标均合格后对系统性红斑狼疮、皮肌炎、糖尿病肾病和高血压肾病患者的血清进行抗CAⅢ抗体水平检测。结果成功建立ELISA检测人血清抗CAⅢ抗体的方法,其批内精密度为6.2%,批间精密度为8.2%,灵敏度为0.025,回收率为106%,且具有较好的抗干扰性、试剂稳定性和标本保存稳定性。系统性红斑狼疮和糖尿病肾病患者的血清抗CAⅢ抗体水平高于健康对照相(P<0.05),阳性率分别为43%和18%。皮肌炎和高血压肾病患者的血清抗CAⅢ抗体水平与健康对照组比较无统计学差异(P>0.05),且未出现阳性结果。结论使用现有市售试剂进行人血清抗CAⅢ抗体的ELISA检测是可行的,抗CAⅢ抗体可能参与了系统性红斑狼疮和糖尿病肾病的发生发展。

碳酸酐酶Ⅲ自身抗体在1型糖尿病人中的测定

目的探讨1型糖尿病(T1D)患者血清抗碳酸酐酶Ⅲ自身抗体水平的变化及其与抗氧化物、细胞因子之间的关系。方法选取T1D患者共368例(T1D组),另选取性别年龄匹配的健康受试者为对照组,测定其血清抗碳酸酐酶Ⅲ自身抗体、红细胞沉降率、超氧化物歧化酶(SOD)等4种抗氧化物和白细胞介素(IL)-2等4种细胞因子的水平。结果 T1D患者血清抗碳酸酐酶Ⅲ自身抗体水平显著高于健康对照组(P<0.05);T1D患者的SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和丙二醛(MDA)水平显著低于健康对照组(P<0.05);T1D患者的IL-2、IL-3和干扰素(IFN)-γ显著高于健康对照组(P<0.05)。结论抗氧化物和细胞因子水平的变化可能参与了T1D患者碳酸酐酶Ⅲ抗体的产生。

TAT-CAⅢ融合蛋白的表达、纯化及其跨膜转运功能鉴定

目的:构建含有及不含有TAT的CAⅢ质粒表达载体,并进行诱导表达、纯化,在体外初步鉴定TAT-CAⅢ的跨膜转运功能。方法:采用PCR的方法扩增编码CAⅢ和TAT-CAⅢ全长的DNA序列,分别重组入pET28a质粒表达载体中,测序鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建重组体的表达菌株;IPTG诱导表达后,用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化融合蛋白,纯化产物进行SDS-PAGE分析、Western blot鉴定及磷酸酶活性染色;然后分别以1μmol/L纯化的CAⅢ及TAT-CAⅢ孵育C2C12成肌细胞1h,间接免疫荧光法检测两者在细胞内的分布情况。结果及结论:成功地构建了含有及不含有TAT的CAⅢ质粒表达载体;转化大肠埃希菌BL21(DE3)后表达并纯化出相对分子量分别约32 000(CAⅢ)和35 000(TAT-CAⅢ)的融合蛋白,Westernblot和酶活性染色鉴定表明成功地获得了两种融合蛋白;间接免疫荧光染色显示,TAT-CAⅢ孵育组细胞内可见有较强的绿色荧光,而CAⅢ组细胞内则未见荧光,表明TAT可介导CAⅢ由胞外跨膜转导进入胞内。

碳酸酐酶Ⅲ、表皮生长因子受体在肺腺癌患者中的表达及其临床意义

目的：探讨碳酸酐酶Ⅲ（CAⅢ）与表皮生长因子受体（EGFR）在肺腺癌患者中的表达及其临床意义。方法选取本院2011年1月~2015年1月收治的54例肺腺癌患者作为肺癌组，选取同期的50例健康体检者作为对照组，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）定量测定CAⅢ水平，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）免疫组织化学染色法测定EGFR表达，比较两组的CAⅢ水平及EGFR表达，并分析两者与肺腺癌临床病理特征的关系。结果肺癌组的CAⅢ水平、EGFR阳性表达率显著高于对照组，差异有统计学意义（P〈0.01）。CAⅢ、EGFR表达与肺腺癌TNM临床分期、组织学分化程度和淋巴结转移等临床病理特征密切相关，TNM临床分期越高、组织学分化程度越低及合并淋巴结转移时，患者的CAⅢ、EGFR表达水平越高。不同临床病理特征患者的CAⅢ、EGFR表达程度比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 CAⅢ与EGFR在肺腺癌患者中的表达程度明显增强，可作为肺腺癌临床病理特征评估指标。

胸部肿瘤患者肋间肌碳酸酐酶Ⅲ及其mRNA表达的研究

背景与目的:有研究提示肿瘤可以上调其原发灶及转移灶中的碳酸酐酶(carbonic anhydrase,CA)含量,但至目前为止尚不知肿瘤组织是否会影响其他非转移组织中CA的含量。本研究通过测定CAⅢ及其m RNA在胸部良性肿瘤、肺腺癌患者肋间肌中的表达,探讨CAⅢ在这些疾病状态下的表达调控情况。方法:对昆明医科大学第一附属医院胸外科行开胸肿瘤切除术的38例住院患者取肋间肌组织活检,根据术后肿瘤组织病理结果提示纵隔良性肿瘤10例、肺腺癌12例。肺腺癌组患者根据肿瘤转移情况分为淋巴结转移组(6例)和无淋巴结转移组(6例),根据分化程度分为低分化组(3例)、中分化组(6例)及高分化组(3例),此外,16例单纯胸外伤作为对照组。然后,利用ELISA法定量测定患者肋间肌CAⅢ的浓度,利用Real-time PCR法检测患者肋间肌的CAⅢm RNA表达水平,分析比较各组患者肋间肌中CAⅢ的浓度定量及其m RNA表达水平差异,探讨CAⅢ在肺腺癌等疾病状况下的表达调控情况。结果:CAⅢ的浓度定量结果方面,与其他2组比较,肺腺癌组患者肋间肌CAⅢ的浓度显著升高(P<0.01),且淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.05),CAⅢ浓度在低、中、高分化肺腺癌各组患者肋间肌间的表达差异无统计学意义(P均>0.05)。在CAⅢm RNA相对表达量方面(2-△△Ct),与其他2组比较,肺腺癌组患者肋间肌CAⅢm RNA表达水平显著升高(P<0.01),且淋巴结转移组高于无淋巴结转移组高(P<0.01),但CAⅢm RNA水平在低、中、高分化肺腺癌各组患者肋间肌间差异无统计学意义(P均>0.05)。患者CAⅢ的浓度定量及其m RNA表达水平与患者的FEV1/Pred%(第一秒呼气容积占预计值百分比)呈正相关(P<0.05),与患者的年龄、体质量指数、FEV1/FVC%、Pa O2、Pa CO2无显著相关性(P均>0.05)。在各组患者,其肋间肌CAⅢm RNA表达水平与CAⅢ浓度定量呈现一致性表现,即m RNA表达水平升高组,其蛋白浓度定量也升高;相反,m RNA表达水平降低组,其蛋白浓度定量也降低。结论:肺腺癌组患者肋间肌的CAⅢ的浓度定量及其m RNA水平表达均较其他2组高。由于肺腺癌肋间肌CAⅢ的m RNA表达水平与CAⅢ的浓度定量呈现一致性表现,其对CAⅢ的调控可能主要在上游DNA转录水平得到实现,使得其肋间肌CAⅢm RNA转录水平及蛋白表达异常,进而影响其肋间肌功能状态。

碳酸酐酶Ⅲ与老年2型糖尿病性血管病变的相关性分析

目的:分析老年糖尿病性血管病变的可能危险因素,探讨碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)与老年糖尿病性血管病变的相关性。方法:筛选2017年复旦大学附属华山医院老年病科门诊体检的老年人群,观察糖尿病患者血管并发症的发生情况及相关血清生化指标的变化。按照入组标准和排除标准分为3组:对照组、T2DM未合并血管并发症组及T2DM合并血管并发症组。所有老年人群除进行常规体检筛查外,采用ELISA法检测血清CAⅢ水平。结果:与对照组相比,T2DM组ALT、TP、BUN、UA、TG、LDL、HDL、FBG、HbA1c差异均存在统计学意义(P<0.05)。T2DM组合并血管并发症组患者体内TBIL水平明显低于无血管并发症组(P<0.05)。ELISA检测结果显示T2DM未合并血管并发症和合并血管并发症组患者体内CAⅢ水平均明显低于对照组(P<0.01),且T2DM合并血管并发症组CAⅢ水平低于未合并血管并发症组(P<0.01)。Spearman相关系数分析显示:血清CAⅢ水平与HDL、TBIL正相关,但差异无统计学意义;血清CAⅢ水平与LDL、Scr、BUN、FBG、HbA1c负相关,且与BUN、FBG和HbA1c间的关联性较大(P<0.05)。ROC曲线分析提示CAⅢ对诊断T2DM合并血管并发症的敏感性和特异性均较好(P<0.05)。结论:血清CAⅢ水平与老年T2DM性糖脂代谢紊乱及其血管并发症密切相关,CAⅢ可能通过调控糖脂代谢来参与老年糖尿病性血管病变的发生和发展。

碳酸酐酶Ⅲ改善实验性自身免疫性重症肌无力小鼠疲劳耐受性的研究

目的:应用碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)激动剂和抑制剂干预实验探讨CAⅢ对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠肌无力症状和疲劳耐受性的影响。方法:应用纯化的加州电鳗乙酰胆碱受体(AChR)免疫C57BL小鼠制备EAMG动物模型,分别应用CAⅢ的抑制剂TFMS和激动剂Piperazine处理小鼠,观察小鼠的临床症状、肌肉重复电刺激的衰减,检测小鼠血清中细胞因子的变化,采用前臂抓握实验、ROTAROD转杆实验来鉴定小鼠运动耐力的变化。结果:本研究制备的EAMG模型具有典型的肌无力症状、肌肉重复电刺激衰减、AChR抗体增高以及血清中细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)增高的特征。应用CAⅢ激动剂的小鼠前爪抓力增强、肌肉重复电刺激衰减程度减轻、ROTAROD转杆实验坚持时间增长,给予CAⅢ的抑制剂处理的EAMG小鼠肌无力症状明显加重、前爪抓力减弱、肌肉重复电刺激衰减加重、转杆实验坚持时间缩短,与未干预组(P=0.04)和激动剂干预组(P<0.0001)相比差异具有统计学意义。结论:CAⅢ可以改善EAMG小鼠肌无力症状和电生理变化,对重症肌无力(MG)的病态易疲劳可能起保护作用。

心肌梗死溶栓复流后血清标志物的变化及临床意义

目的评估肌红蛋白（Mb）／碳酸酐酶III（CAm）比值及肌酸激酶同工酶MB（CK—MB）作为一种无创标志检测溶栓后冠状血管复流的效果。方法研究对象为在我院治疗的107例患者，根据治疗方法不同将患者分为介入治疗组（n=54）与溶栓治疗组（n=53），检测两组患者的Mb、CAm与CK-MB释放水平的变化。结果溶栓治疗第1小时Mb水平提高（9．1±2．2）倍，CK—MB提高（10．8±3．3）倍，CAⅢ维持不变。第2小时Mb／CAⅢ比值达到峰值，第8小时CK—MB达到峰值。根据经皮冠状动脉腔内血管成形术（PTCA）过程中再灌注时间以及血清酶学的变化可知Mb／CAⅢ比值在3h内、CK-MB在10h内达到峰值可以作为再灌注的标志。溶栓后3-4h采样，有41例患者的Mb／CAⅢ比值在早期超出界值（3倍），此时采样结果最优。结论Mb／CAm比值能有效评估急性心肌梗死（AMI）患者再灌注的成功率并可筛查需接受PTCA的患者。

缺血性心脏标志物临床应用研究新进展

缺血性心脏标志物代表急性冠脉综合征形成心肌坏死前的标志物,主要有肌红蛋白、碳酸酐酶Ⅲ、脂肪酸结合蛋白、缺血修饰清蛋白和脱氧核糖核酸酶Ⅰ等,在心肌缺血早期即可在血液中检出,在临床上应用可对急性冠脉综合征进行早期诊断。

抗CA IX单克隆抗体的^(99)Tc^m标记及其在荷瘤鼠体内显像

碳酸酐酶IX(CA IX)在多种实体肿瘤中过表达,而在相应的正常组织中没有表达或表达水平很低,是肿瘤诊断和治疗中的一个潜在靶点。利用99Tcm直接标记抗CA IX单克隆抗体(MAb),在最佳的标记条件下可以得到标记率为85%的目标产物99Tcm-MAb。此标记物在新生牛血清和PBS中稳定性良好。99Tcm-MAb通过尾静脉注入到荷HT-29肿瘤鼠进行显像,注射24 h后在肿瘤处没有看到明显的放射性浓集。注射24 h后的体内分布实验显示99Tcm-MAb在肿瘤内的摄取率较低。将125I-MAb注入到荷HT-29肿瘤鼠进行显像,注射48 h后在肿瘤处可以看到明显的放射性浓集。由于抗体在体内循环代谢速度较慢,而99Tcm的半衰期相对较短,故99Tcm标记抗CA IX单抗不适用于靶向CA IX的肿瘤显像。

子宫内膜异位症与抗碳酸酐酶抗体的关系

目的 :探讨抗碳酸酐酶Ⅰ、Ⅱ抗体与子宫内膜异位症的关系。方法 :应用酶联免疫吸附 (ELISA)法分别检测内异症 32例、其他妇科疾病 (妇科组 ) 2 0例及正常妇女 12例血清抗碳酸酐酶抗体水平。结果 :(1)内异症患者血清抗碳酸酐酶Ⅰ、Ⅱ抗体阳性率(87.5 %、5 3.1% )高于妇科组 (2 5 %、15 % ) ,两组差异有显著性 (P <0 .0 1) ;(2 )内异症患者血清抗碳酸酐酶Ⅰ、Ⅱ抗体阳性率明显高于正常妇女组 (0 %、0 % ) ,两组差异有显著性 (P<0 .0 1) ;(3)妇科组及正常妇女组血清抗碳酸酐酶Ⅰ、Ⅱ抗体阳性率较低 ,两组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论

重症肌无力患者骨骼肌中减少的25000蛋白即为碳酸酐酶Ⅲ的论证

目的论证重症肌无力(MG)患者骨骼肌中特异性减少的25000蛋白为碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)分子。方法用双向电泳结合免疫Western blot分析25000蛋白抗体和CAⅢ抗体有免疫反应的蛋白质分子的物化特征,分别用免疫Dot blot与免疫Western blot观察两种抗体对纯化的25000蛋白及骨骼肌蛋白匀浆的竞争结合,用免疫Western blot分析健康人与MG患者骨骼肌CAⅢ的蛋白表达。结果双向电泳结合免疫Western blot显示,25000蛋白抗体和CAⅢ抗体识别的蛋白质具有相同的相对分子质量和等电点;免疫Dot blot与免疫Western blot的竞争结合证实25000蛋白与CAⅢ为同一物质;免疫Western blot表明,用25000蛋白抗体与CAⅢ抗体检测健康人与MG患者骨骼肌25000蛋白表达的结果亦几乎是相同的。结论MG患者骨骼肌特异减少的25000蛋白分子就是CAⅢ,这为进一步深入研究CAⅢ与MG的发病奠定了基础。

重症肌无力患者骨骼肌中碳酸酐酶Ⅲ蛋白减少的原因

目的分析重症肌无力患者(MG)骨骼肌中碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)蛋白和 CAⅢmRNA 的表达,并与健康对照组进行比较,探讨 MG 骨骼肌 CAⅢ蛋白缺乏的原因。方法用 Western blot 分析17例 MG 患者与19名健康人骨骼肌 CAⅢ蛋白的水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析CAⅢ mRNA 的表达。结果 Western blot 显示,MG 患者骨骼肌 CAⅢ蛋白谱带密度低于健康人骨骼肌;经半定量分析,健康人骨骼肌 CAⅢ蛋白水平的相对值为1.70±0.29,MG 骨骼肌为0.76±0.08,两者差异有统计学意义(P=0.006)。RT-PCR 半定量结果为:健康人骨骼肌 CAⅢ mRNA 表达的相对值为0.29±0.04,MG 骨骼肌为0.15±0.02,两组间差异亦有统计学意义(P=0.005)。分析同一标本 CAⅢ蛋白与 CAⅢ mRNA 表达,约77%的 MG 患者骨骼肌中两者呈一致性减少。结论 MG 骨骼肌 CAⅢ蛋白降低的主要原因是其本身 CAⅢ mRNA 的表达降低所致,骨骼肌 CAⅢ mRNA 的表达降低与 MG 发病的关系还需进一步阐明。

碳酸酐酶Ⅲ在疾病和肌肉疲劳发生发展中的作用

碳酸酐酶(carbonic anhydrases,CAs)是一种广泛存在的含锌的金属蛋白酶,能可逆性地高效催化CO2的水合反应,参与调节胞内pH值、离子运输和生物合成反应等多种生理过程。在哺乳动物体内已发现13种CA同工酶和3种CA相关蛋白,其中CAⅢ与其他CA同工酶相比,在组织分布、分子结构和生物学功能上均有其独特之处。CAⅢ表达异常可能与多种临床疾病的发生和发展有关,还可能参与了肌肉疲劳的发生。

碳酸酐酶Ⅲ的生物学特性及与临床疾病的关系

碳酸酐酶(carbonicanhydrase,CA)是一种含锌的金属蛋白酶家族,至少有11种CA同工酶、3种与CA相关的蛋白质和1种受体型蛋白酪氨酸磷酸酶。其中CAⅢ在细胞内的分布、分子的理化特性、生理功能都有不同于其他CA的特点,其功能主要是清除骨骼肌中的CO2,参与细胞内磷酸化、信号转导及调节能量代谢,但在临床中特别是在神经科疾病中的应用还没有足够的认识。

重症肌无力血清中碳酸酐酶Ⅲ及其抗体的检测

目的:检测重症肌无力(MG)患者血清中碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)及其抗体水平,探讨MG骨骼肌减少的CAⅢ是否参与MG的免疫发病。方法:用Western blot检测18例MG患者、16例其他神经肌肉疾病(ONMD)患者和15名健康人血清中CAⅢ水平;用Western blot与酶联免疫吸附测定(ELISA)检测上述血清中抗CAⅢ的抗体水平。结果:Western blot显示,正常人、MG和ONMD患者血清中都存在CAⅢ,但该蛋白的谱带密度在3组人的血清中差异无统计学意义(P>0.05);Western blot与ELISA表明,上述血清中不存在抗CAⅢ的抗体。结论:正常人、MG和ONMD患者血清中均存在CAⅢ蛋白,但不存在抗该蛋白的抗体,说明MG骨骼肌减少的CAⅢ蛋白可能没有直接参与MG的免疫发病。

去神经对大鼠骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ表达和磷酸酶活性的影响

目的 观察去神经对骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ（carbonic anhydrase Ⅲ,CAⅢ）表达及其磷酸酶（phosphatase）活性的影响,探讨神经冲动受阻是否为重症肌无力（myasthenia gravis,MG）骨骼肌CAⅢ减少的原因.方法 定向切断支配大鼠趾长伸肌（extensor digitorum longus,EDL）和比目鱼肌（soleus,Sol）的神经纤维,术后第7、14、28和56天用Western blot分析EDL和Sol的CAⅢ水平,用固相膜上原位酶活性染色方法评估CAⅢ的磷酸酶活性.结果 （1）正常侧（即去神经对侧）Sol的CAⅢ水平远高于EDL,并且两者都表现出随时间增加（动物年龄增长）而增加的趋势.去神经后,EDL的CAⅢ水平随时间的延长而逐渐增加;Sol的CAⅢ水平则以14 d为分界先增加后降低.（2）正常侧Sol的CAⅢ的磷酸酶活性[随时间增加（动物年龄增长）呈逐渐增加的趋势]均高于EDL（变化不明显）.去神经后,Sol的CAⅢ磷酸酶活性（第14、28、56天分别为14.39±1.93、11.48±1.46、9.04±1.46）明显低于正常侧（22.75±1.80、25.26±3.15、25.82±2.97,t=0.002、0.005、0.002,均P＜0.05）,EDL的CAⅢ磷酸酶活性与正常侧相比亦是降低,但差异无统计学意义.（3）正常侧EDL和Sol的CAⅢ蛋白表达水平和CAⅢ的磷酸酶活性相一致;去神经后CAⅢ蛋白表达水平和CAⅢ的磷酸酶活性发生了背离,即CAⅢ蛋白表达水平增加,但其磷酸酶活性却降低.结论 去神经所致的神经冲动传递障碍与MG自身抗体所致的神经冲动传递障碍对骨骼肌CAⅢ表达水平的影响不同,MG骨骼肌CAⅢ表达水平减少并非是其自身抗体所致的神经冲动传递障碍造成.

重症肌无力骨骼肌减少的25000蛋白分子鉴定

目的:解析重症肌无力(MG)骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子结构。方法:用双向电泳分离纯化骨骼肌25000蛋白,电喷射离子化质谱和Edman降解法分别测定其精确分子质量和N端部分氨基酸序列,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定其肽指纹图谱,在上述基础上,用ImmunoWesternblot分析骨骼肌蛋白与25000蛋白抗体及碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)抗体的结合。结果:质谱和N端部分氨基酸序列的测定表明,电泳显示的表观相对分子质量为25000的蛋白其精确分子质量为29632.05,该蛋白的N端氨基酸可能是酰基化的;肽指纹图谱解析和蛋白资料库查询结果,结合对25000蛋白生化和生物学特征的了解,发现25000蛋白与CAⅢ的分子是非常相似的。结论:MG骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子很可能是已知的蛋白质CAⅢ,该活性物质与MG发病的关系值得进一步研究。