解偶联剂CCCP对莱茵衣藻光照产氢过程的调控

解偶联剂羰基氰化物间氯苯腙(Carbonylcyan ide-m-chlorophenylhydrazone,CCCP)能够显著降低莱茵衣藻光合系统Ⅱ(PSⅡ)的光化学效率,抑制光合放氧,促进氢酶表达,加速光照过程中氢气的产生.在含硫连续光照过程中,藻液中CCCP浓度低于15μmol/L时,CCCP不能明显影响藻细胞PSⅡ光化学活性.CCCP浓度为15,20μmol/L时PSⅡ光化学活性迅速降低,有明显的放氢现象.在无硫连续光照过程中,添加不同浓度CCCP的藻细胞PSⅡ光化学活性均迅速降低,且都有明显的放氢现象,不同浓度的CCCP对含硫培养和缺硫培养的衣藻细胞在连续光照过程中有不同的代谢方式,PSⅡ对光能的吸收和利用影响不同.

羰基氰化物间氯苯腙促进海洋亚心型扁藻光照产氢过程的研究

海洋亚心型扁藻(Platymonas subcordiformis)在厌氧和解偶联剂羰基氰化物间氯苯腙(carbonylcyanide-m-chlorophenylhydrazone,简写CCCP)的作用下有明显的放氢现象。P.subcordiformis经过32h暗诱导,在15μmol·L^(-1)的羰基氰化物间氯苯腙作用下,能持续光照产氢约12h;760ml藻细胞密度为3.0×10~6 ml^(-1)的P.subcordiformis能够产生氢气7.54 ml。光照产氢过程中,藻液的pH值由7.62逐渐降低到7.49,光合作用系统Ⅱ(PSⅡ)的光化学效率由0.342迅速降到0.002,体系的氧浓度始终维持在较低水平。上述结果表明:CCCP不仅能使电子传递和ATP的形成解偶联,而且还能显著抑制PSⅡ的光化学效率,使反应体系在光照阶段保持厌氧状态而实现持续产氢。

外输泵介导的金黄色葡萄球菌对环丙沙星耐药性的确证

对金葡球菌标准菌株(ATCC25923)和3株临床分离金葡球菌进行环丙沙星(CPLX)耐药性诱导,并通过琼脂稀释法测定环丙沙星对各菌株最低抑菌浓度(MIC)。利用改良间氯苯腙羰基氰化物(CCCP)结合荧光分光光度法检测了耐药性诱导菌株及其母株对环丙沙星的摄取情况。CCCP的作用不同程度地增加了各菌株对环丙沙星的摄入量,确证了金葡球菌中外输泵介导对环丙沙星耐药性的存在。达到稳态浓度后,耐药性较强的菌株对环丙沙星摄入量低于耐药性较弱或标准菌株对环丙沙星的摄入量。

多重耐药鲍曼不动杆菌体外联合用药抗菌活性的研究

目的评价体外联合用药对多重耐药的鲍曼不动杆菌（MDRAB）的杀茵效果以及外排泵抑制剂对抗生素敏感性的恢复作用。方法使用肉汤倍比稀释法分别检测头孢哌酮／舒巴坦（SCF）、米诺环素（MH）、SCF与MH联合用药、碳酰氰间氯苯腙（CCCP）与MH联合用药及CCCP与SCP联合用药对临床分离的24株MDIKAB最低抑菌浓度（MIC），并计算抑菌浓度指数（FIC）。结果SCF、MH单用MIC与联合使用MIC比较。单独用药均明显高于联合用药，差异具有统计学意义（t=2．19，P〈0．01；t=1．68，P〈0．05；C=2．68，P〈0．01）oSCF和MH分别与CCCP联用时的MIC明显低于SCF与MH联用时的MIC，差异具有统计学意义（c=1．76，P〈O．01；t=2．20，P〈0．01）。SCF与MH联合应用FIC指数O．o~0．5占50．00％，O．5～1．0占45．83％，1．0—2．0占4．17％。结论SCF与MH联合用药具有协同和相加作用；抗生素与外排泵抑制剂联用可降低抗生素MIC及用量，恢复其敏感性。

志贺菌属外排泵AcrAB-TolC及其调控基因突变与氟喹诺酮耐药性的关系

目的探讨临床分离耐氟喹诺酮志贺菌外排泵Acr AB-Tol C基因及其调控基因mar OR、acr R、sox S突变与耐药性的关系。方法使用K-B纸片扩散法筛选临床耐药菌,测定加入泵抑制剂羰基氢氯苯腙(CCCP)后萘啶酸、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的变化,PCR扩增外排泵基因acr A、acr B及其调控基因mar OR、acr R、sox S并测序。结果 159株志贺菌中共筛选出11株氟喹诺酮耐药菌株;加入质子泵抑制剂后2株耐药菌株对氟喹诺酮类抗菌药的MIC下降;7株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC不变;2株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC上升。基因测序发现氟喹诺酮耐药菌株外排泵Acr AB-Tol C调控基因mar OR第36、37、38、39位存在CATT碱基缺失。结论泵抑制剂可部分抑制外排泵的活性。mar OR突变可能与志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药有关。

沉默UVRAG对白血病细胞K562线粒体自噬的影响

目的:探讨紫外线抵抗相关基因(UVRAG)对白血病细胞K562线粒体自噬的影响。方法:用不同浓度线粒体自噬诱导剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)诱导K562细胞6、12和24 h,利用CCK-8法检测细胞活力;将K562细胞分为NC、UVRAG-siRNA、UVRAG-siRNA+CCCP和CCCP共4组,采用Western blot检测UVRAG蛋白质表达情况;流式细胞学技术检测活性氧、线粒体结构完整性的变化情况;Western blot检测自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达情况。结果:与NC组相比,UVRAG-siRNA转染组UVRAG蛋白表达显著下降(P<0.01);与CCCP组相比,U VRAG-siRNA+CCCP组活性氧减少(P<0.05),线粒体结构破坏减少(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达下降(P<0.01),P62蛋白表达上升(P<0.05);与NC组相比,UVRAG-siRNA组P62蛋白、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的表达,活性氧及线粒体结构完整性差异不显著(P>0.05)。结论:CCCP作用下,沉默UVRAG能抑制K562细胞的线粒体自噬。