辛伐他汀对大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的抑制作用,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,流式细胞分析技术(FCM)检测细胞周期,分别观察不同浓度Sim对AVP诱导CFs增殖的作用。结果(1)随着Sim浓度的增高,CFsMTT比色法D490值呈明显的递减趋势,其中1×10-6 和1×10-5 mol/LSim组的D490值分别为0.215±0.041和0.163±0.018,均较对照组D490值(0.393±0.048)显著降低(P<0.01);(2)FCM细胞周期分析表明,CFs的S期细胞百分率和细胞增殖指数随Sim刺激浓度的增加而呈递减趋势,G0/G1期细胞百分率呈递增趋势,其中1×10-6 和1×10-5 mol/LSim组与对照组1×10-7 mol/LAVP比较,差异显著(P<0.01)。结论Sim可抑制AVP诱导的CFs增殖,其作用可能与影响CFs细胞周期有关。

外源性IL-33在体外模拟糖尿病条件下抑制心肌成纤维细胞胶原蛋白的表达

目的:探索体外模拟糖尿病状态下外源性IL-33对心肌成纤维细胞的作用。方法:体外分离培养新生乳鼠心脏成纤维细胞,设立对照组(DMEM/F12+30 mmol/L甘露醇),高糖组(DMEM/F12+30 mmol/L葡萄糖),高糖+高迁移率族蛋白1(HMGB1)组(1μg/m L),高糖+HMGB1+IL-33组(3 ng/m L)。经不同处理后,蛋白质印迹检测胶原蛋白Ⅰ、IL-33、二酰基甘油激酶ζ(DGKζ)表达量的变化;ELISA检测二酰基甘油(DAG)的分泌释放,以及蛋白激酶Cβ(PKCβ)活性的改变。结果:心肌成纤维细胞经高糖处理后胶原蛋白Ⅰ生成增加,IL-33产量降低,HMGB1使上述情况进一步加剧,心肌细胞内DGKζ的表达下调,引起DAG的升高,并进一步促进PKCβ的激活,引发心肌纤维化。加入外源性IL-33对上述过程具有抑制作用,可抗心肌纤维化。结论:外源性IL-33在心肌成纤维细胞模拟糖尿病状态下起抗纤维化作用。

蛋白激酶C-细胞外信号调节激酶1/2通路介导精氨酸升压素对成年大鼠心肌成纤维细胞的促增殖作用(英文)

精氨酸升压素(arginine vasopressin,AVP)是高血压和心力衰竭时激活的神经体液和血流动力学因子,同时,它还具有直接的生长刺激作用。我们以往的研究显示AVP可诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖。本研究旨在进一步观察AVP是否对成年大鼠CFs具有促增殖作用,并探计其机制。采用组织块法培养成年大鼠CFs,用[3H]-TdR掺入法和流式细胞仪方法观察AVP作用下CFs的DNA合成和细胞周期分布。根据特异性底物髓磷脂基质蛋白(myelin basic protein,MBP)的磷酸化水平测定细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)的活性。用Western blot检测ERK1/2的磷酸化和p27Kip1、细胞周期蛋白D1、A、E的表达。结果显示,AVP(0.1μmol/L)可促进成年大鼠CFs的DNA合成,该作用可被V1受体拮抗剂d(CH2)5[Tyr2(Me),Arg8]-vasopressin(0.1μmol/L)阻断,而不受V2受体拮抗剂desglycinamide-[d(CH2)5,D-Ile2,Ile4,Arg8]-vasopressin(0.1μmol/L)的影响。AVP可激活ERK1/2,用蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)激动剂佛波酯(phorbol12-myristate13-acetate,PMA,30nmol/L,5min)急性刺激可模拟该作用,而PMA持续慢性作用(2.5μmol/L,24h)耗竭PKC后则抑制AVP对ERK1/2的激活。AVP可抑制p27Kip1的蛋白表达,升高细胞周期蛋白D1、A和E的表达,同时促进细胞周期由G0/G1期进入S期。ERK1/2抑制剂PD98059(30μmol/L)阻断AVP对DNA合成、p27Kip1、细胞周期蛋白D1、A和E蛋白表达的作用,并抑制细胞周期进程。以上结果表明,AVP可促进成年大鼠CFs增殖,该作用由V1受体和PKC-ERK1/2通路介导。AVP可通过ERK1/2调控p27Kip1、细胞周期蛋白D1、A和E的表达,从而促进成年大鼠CFs的细胞周期进程。

sTβRⅡ拮抗新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad信号和肌成纤维细胞分化

目的研究可溶性转化生长因子-β1Ⅱ型受体(sTβRⅡ)对新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad信号和肌成纤维细胞分化的抑制效应。方法培养新生大鼠的心肌成纤维细胞,随机分为4组:PBS对照组、TGF-β1(5ng/ml)组、sTβRⅡ(50ng/ml)组和TGF-β1+sTβRⅡ组。30min、1h和2h后,免疫细胞化学染色检测P-Smad2和Smad3的表达;24h后,免疫细胞化学染色检测α-SMA的表达。结果与PBS对照组相比,TGF-β1组P-Smad2、Smad3(核阳性率)和α-SMA的表达显著性升高(P<0.05);与TGF-β1组相比,TGF-β1+sTβRⅡ组P-Smad2、Smad3(核阳性率)和α-SMA的表达明显降低(P<0.05)。结论sTβRⅡ可拮抗新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad2/Smad3蛋白的磷酸化与核转位,阻断Smad信号转导通路,抑制肌成纤维细胞分化。

qking基因对大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

为探讨qking基因对大鼠心肌成纤维细胞(Cardiac Fibroblast,CF)增殖及胶原合成的影响,进一步完善心肌纤维化的相关机制;为改善心机重构提供新的思路,采用胶原酶消化,差速贴壁法原代培养SD乳鼠心肌成纤维细胞,以血管紧张素II(AngII)诱导CF建立增殖及胶原合成模型,运用western-blot法,RT-PCR法,流式细胞术观察过表达qking对CF增殖及胶原合成的影响。结果在CF中血管紧张素II诱导了qking表达时间依耐性的降低,在24h后降至谷底。过表达qking后通过western-blot法及RT-PCR法检测了CF中增殖细胞核抗原(PCNA)及胶原蛋白1a/3a表达水平的变化,流式细胞术观察细胞周期,数据表明qking基因编码的QKI-6蛋白亚型的过表达能明显抑制CF的增殖;而对于CF中胶原合成未见明显影响。说明qking基因编码的QKI蛋白对CF增殖发挥负性调节作用,但对胶原合成并无明显影响。