邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼脑细胞DNA的损伤

为了研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼(Carassius auratu)脑细胞DNA的损伤作用,采用不同浓度的DEHP溶液(0、25、50、100、200mg·L-1)对体外培养脑细胞进行染毒,应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测脑细胞DNA的损伤效应.结果表明,染毒1.5h后,与对照组相比,DEHP各染毒组细胞尾部DNA百分率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment)均显著升高(p<0.01),即DEHP染毒引起了脑细胞DNA的严重断裂;随着DEHP浓度的增加,DNA损伤程度加剧,细胞尾部DNA百分率及尾距与DEHP染毒浓度呈明显的剂量-效应关系.以上结果表明,DEHP可导致金鲫鱼脑细胞DNA损伤。

鲤脑组织cDNA文库的构建及脑室管膜素基因鉴定

用Gubler-Hoffman法构建了低温下鲤(Cyprinus carpio Linnaeus)脑组织cDNA文库,经测定库容量为5.7×105CFU/mL,文库的重组率接近95%,平均插入片段长度约为1.5kb,符合文库保存和筛选实验的要求。同时,根据鲤与低温相关消减cDNA文库中低温下特异表达基因片段序列,设计PCR引物在此cDNA文库中进行PCR检测和序列测定,使用BLAST软件将测序的10个cDNA序列同GenBank等数据库进行比对,结果显示8个阳性克隆有相关同源性,2个克隆为功能未知的基因,全长率近75%;以上结果说明本实验所构建的cDNA文库质量较高,可作为筛选与鲤低温性状相关的功能基因的重要资源。同时对其中一个与低温相关的基因脑室管膜素基因构建了表达载体,为进一步验证该基因在鱼类低温适应中所发挥的作用及其作用机理奠定了基础。

白细胞介素-1β蛋白在氟暴露鲤鱼血液及脑组织中的表达

以鲤鱼为试验材料,研究氟化钠对其脑组织中白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达的影响。结果显示,在不同浓度(40、80、120 mg/L)氟化钠暴露30、60、90 d后,与对照(氟化钠0 mg/L)相比,鲤鱼血液中、脑组织中的氟含量都有增加,且呈一定的时间-剂量效应关系。在氟暴露90 d时,采用免疫印迹方法检测各组脑组织中IL-1β的表达情况,并测定脑组织中的T-AOC含量,结果显示,与对照相比,不同剂量氟暴露组鲤鱼脑组织中的IL-1β蛋白表达有增加趋势,随着氟剂量的增大T-AOC含量呈下降趋势。CORREL相关分析结果显示,血液中、脑组织氟含量与IL-1β蛋白的表达均呈正相关(r=0.975,r=0.931),与T-AOC含量呈负相关(r=-0.972)。表明鲤鱼血液中氟含量、脑组织中氟含量的上升,可引起脑组织中T-AOC含量的下降和IL-1β表达的上调,进而可能损伤神经系统。

鲫鱼脑氨基酸类神经递质受体在两栖类卵母细胞中的表达

两栖类卵母细胞表达系统经注射鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓｃａｒａｓｓｉｕｓ）脑ｍＲＮＡ后可表达多种神经递质受体和某些离子通道。本工作利用电压箝方法结合药理学手段对ＧＡＢＡ受体和谷氨酸离子型受体作了较详细的研究。结果表明，由ＧＡＢＡ诱发的电流反应中，约９０％由ＧＡＢＡＡ受体介导，剩余约１０％的成分对ＧＡＢＡＡ受体的专一性拮抗剂Ｂｉｃｕｃｕｌｌｉｎｅ不敏感，而ＧＡＢＡＢ受体的专一性激动剂Ｂａｃｌｏｆｅｎ不能引起电流反应，因此这部分受体特性与ＧＡＢＡＣ受体相似。表达的谷氨酸受体包括离子型受体和代谢型受体。离子型受体中除了少量ＮＭＤＡ受体，绝大部分属ＫＡ／ＡＭＰＡ受体亚型。在研究谷氨酸受体各种激动剂的相互作用时，发现ＮＭＤＡ能竞争性地压抑由ＫＡ诱发的电流，提示ＮＭＤＡ可能是ＫＡ／ＡＭＰＡ受体的弱拮抗剂。

草鱼脑的发育和结构

对刚孵化至全长500毫米草鱼脑的发育过程中的形态变化和脑在颅腔中的位置变动作了详细观察;对发育完善脑的结构进行了研究,并叙述了副脑上腺、脑上脑、脑垂体和血管囊的形态和位置变化。全长7.4毫米端脑前端分化出嗅球,全长53.4毫米嗅球开始与大脑分离,真正的嗅神经位于嗅囊和嗅球之间一些细而短的神经。全长125毫米以后脑的发育已基本趋于完善,形态构造亦基本稳定;全长227毫米以后脑已位于颅腔后部。

鲤鱼机器人无线遥控系统设计与应用

为解决有线控制时导线对水生动物机器人缠绕和运动束缚问题,设计一种鲤鱼机器人脑电刺激无线遥控系统。其中,系统硬件包括无线通信模块、电刺激信号生成模块、电源模块,系统软件包括串口通信设置、运动模式选择。将脑电极植入后在颅腔表面进行防水封固,将无线电刺激器放入防水包内搭载于鲤鱼机器人上,利用上位机远程控制无线电刺激器,令电刺激器发射信号通过电极刺激脑运动区,控制鲤鱼机器人运动。将鲤鱼机器人(n=10)置于水迷宫进行水下实验,结果显示该系统可以控制鲤鱼机器人的前进、左转向和右转向运动,成功率分别为60%、70%、80%,表明所设计系统及应用方法对鲤鱼机器人水下无线控制均是有效且可行的。

nov基因的表达与脑的种系发育分化平行相关

用地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学方法研究了鲢、鸡、牛、犬和猫脑肾母细胞瘤过度表达基因阳性神经元的比较发育。结果显示 ,低等脊椎动物鲢脑仅有少量novmRNA阳性神经元 ,分布于延髓的迷走神经背核、三叉神经背核、丘脑前核、丘脑后核、下丘脑背侧核、下丘脑外侧核。鸡脑阳性神经元除广泛分布于脑干外 ,小脑、丘脑的多数核团、下丘脑的背侧核、腹侧核和后核以及大脑纹状体等多数脑区也有一定分布。哺乳动物牛、犬和猫脑中novmRNA阳性神经元广泛分布 ,在脑干、小脑、间脑和大脑都检测到强烈阳性信号。以上结果表明 ,在从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程中nov基因的表达也从低级中枢向高级中枢扩展 ,提示该基因的表达与脑的种系发育、脑功能的分化平行相关。

Zn^(2+)对爪蟾卵母细胞表达鲫鱼脑GABA受体的调制作用

爪赡卵母细胞注射鲫鱼（Caressescaresses）脑mRNA后表达的CABA受体中约85％为GABAA受体。约15％的成分为GABAC受体。本文利用双电极电压箝方法结合药物灌流研究了Zn2＋对这两型受体的作用。我们观察到Zn2＋对它们的调制都是抑制性的、可逆的。然而，与GABAA受体相比，GABAC受体对Zn2＋不太敏感。其中Zn2＋抑制鲫鱼脑GABAA受体的IC50＝48．4±10．1μmol／L，而它调制GABAC受体的IC50却高达255．6±21．5μmol／L。

不同年龄和性腺发育期鲤鱼不同脑区的sGnRH分布及其变化

在不同年龄和不同性腺发育时期，鲤鱼（ＣｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏＬ）脑ｓＧｎＲＨ总含量和ｓＧｎＲＨ在各脑区的分布都有明显的变化。幼鱼脑ｓＧｎＲＨ的功能还不够成熟，主要表现为脑ｓＧｎＲＨ含量低，各脑区ｓＧｎＲＨ分布的变化不明显。３＋龄鱼脑的ｓＧｎＲＨ总含量和１＋龄鱼相比没有明显差异，但嗅球的ｓＧｎＲＨ含量较高，脑垂体的ｓＧｎＲＨ含量较低。１＋龄鱼脑ｓＧｎＲＨ总含量在性腺发育早期低，中期显著升高，并保持到成熟期，退化期又下降，呈明显的季节性变化。参与生殖功能的脑区的ｓＧｎＲＨ含量也显示出比较一致的季节性变化。

鲫脑组织细胞系酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用

为深入研究鲤疱疹病毒Ⅱ型CyHV-2与宿主细胞相互作用机制,以鲫脑组织细胞系(Gibel carp brain,GiCB)总RNA为模板,反转录合成cDNA,扩增获得双链cDNA,与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187,构建了GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库。以CyHV-2 ORF25编码蛋白为诱饵,与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交,筛选与其互作的GiCB细胞受体。结果显示:GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库转化效率为1.03×10~6 CFU/μg,滴度为1.24×10~6 CFU/mL,PCR扩增结果表明文库中插入片段的大小在1.5 kb左右。将表达CyHV-2 ORF25编码蛋白的诱饵菌与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交后,筛选得到与ORF25编码蛋白相互作用蛋白的阳性克隆,为进一步研究CyHV-2的感染机制奠定了前期基础。

鲤脑组织cDNA文库的构建及鉴定

用Gubler-Hoffman法构建了耐低温鲤Cyprinus carpio脑组织全长cDNA文库,经测定库容量为5.7×105cfu/mL,文库的重组率接近95%,平均插入片段长度为1 500 bp,符合文库保存和筛选实验的要求。同时,根据鲤与低温相关的消减cDNA文库中低温下特异表达基因的片段序列,设计了PCR引物,并在此cDNA文库中进行PCR检测和序列测定。使用BLAST软件将测序的10个cDNA序列同GenBank等数据库进行比对,结果显示,8个阳性克隆有相关同源性,2个克隆为功能未知的基因,全长率接近75%。

丁香酚对鲤鱼脑中cAMP浓度的影响

[目的]通过检测丁香酚对鲤鱼脑中环磷酸腺苷(c AMP)浓度变化的影响,探讨c AMP在麻醉机制中的作用。[方法]采用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法测定鲤鱼被丁香酚麻醉后不同脑区在诱导期、麻醉期和复苏期的c AMP浓度。[结果]与对照组相比,诱导期组鲤鱼各脑中c AMP浓度极显著地升高(P<0.01)。[结论]丁香酚麻醉鲤鱼的作用可能与提高脑内c AMP浓度、调节c AMP信号转导系统有关。

八种鲤科鱼类脑的形态构造观察

本文描述了八种鲤科鱼类脑的外部形态和显微结构,并对不同水层鱼的脑进行了比较。 鲤科鱼类的脑除了延脑有显著差异外,其它基本相似。鱼脑的形态构造不完全决定于分类系统,在很大程度上取决于它的生态环境和习性。因此,以鱼脑的形态构造差异,作为分类的鉴别特征是不适宜的。 在生活习性相同的鱼类中,脑的形态构造越相似,其亲缘关系越近.

草鱼脑细胞原代培养

构建细胞体外培养体系是探讨动物生理代谢规律的重要手段。本研究尝试了三种不同的方法——消化法、组织块法及机械法以获得草鱼原代脑细胞。结果表明,采用机械法获得草鱼原代脑细胞,细胞分散较为均匀、形态良好,用含有10%胎牛血清的L-15培养基在28℃进行培养,获得了大量活力较为稳定的脑细胞,为进一步开展体外生理调控机制研究提供基础。原代脑细胞的活力可以稳定地保持3 d,超过3 d后,细胞明显退化。

氟对鲤鱼脑抗氧化系统及细胞凋亡的影响

以鲤鱼为受试材料,研究了氟化钠对其脑组织的抗氧化系统、组织结构和细胞凋亡的影响.结果发现,染毒30 d时,随氟化钠浓度的升高,SOD、GSH活性表现为先诱导后抑制的趋势;暴露60 d与90 d后,SOD、GSH活性主要表现为抑制.而MDA水平在整个暴露实验期间均呈增高趋势.暴露90 d后,脑组织切片的显微观察结果显示,氟化钠能导致鲤鱼脑组织血栓形成及各细胞层结构发生病理学改变,并具有剂效相关性.生物检测结果显示,随着氟化钠暴露剂量增大,鱼脑细胞凋亡率的增加与MDA水平的升高呈正相关关系(r=0.9968),而Bcl-2的表达减弱与SOD、GSH活性呈正相关关系(r=0.9198,0.9889).

面向生物控制的鲤鱼脑组织及脑电极三维重建

为了给鲤鱼机器人脑电极准确植入进行定位导航,本研究拟建立脑结构及脑电极三维立体模型。借助脑立体定位仪将钨电极植入鲤鱼小脑,通过离水电刺激实验和水下控制实验发现脑运动区并获取其三维坐标值,应用3.0 T磁共振成像仪对颅脑及电极成像,应用3D-DOCTOR和Mimics软件进行三维重建。结果显示,所发现的脑运动区及坐标值是准确的,构建的脑组织及脑电极三维重建图再现了脑立体结构,可观察到脑电极与脑组织、脑组织与颅骨表面的相对空间位置关系;通过构建的脑组织三维重建综合显示图,可观察到三维重建的脑组织在磁共振图像中的解剖位置,以及脑组织与颅骨表面的相对空间位置关系。本研究所构建的三维重建模型可为脑电极植入提供定位导航工具。

面向鲤鱼机器人控脑技术的磁共振坐标转换方法研究及应用

为解决鲤鱼脑组织坐标准确定位问题,本文提出一种将鲤鱼脑组织磁共振成像坐标转换为应用脑立体定位仪进行电极植入所需坐标的方法。本研究应用3.0T磁共振成像仪对鲤鱼颅脑成像,自主建立颅脑三维立体定位坐标系、颅骨表面辅助三维坐标系和脑组织内部辅助三维坐标系,经两次坐标转换,将脑电极植入位点磁共振图像坐标转换到三维立体定位坐标系中以引导电极植入。实验分A、B两组,A组为磁共振成像仪结合脑立体定位仪组,B组为脑图谱结合脑立体定位仪组,每组鲤鱼20尾(n=20),分别应用两种方法将电极植入小脑运动区。进行鲤鱼机器人水下实验检验,结果表明A组和B组植入电极准确度分别为90%和60%,A组成功率明显高于B组(P <0.05)。故本文的新方法能够准确定位鲤鱼脑组织的坐标。