Caspase-9和CMYC在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及与患者病理特征和预后的关系

目的探讨半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌基因(CMYC)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及其与患者病理特征和预后的关系。方法选取2017年2月至2020年2月周口市中心医院收治的60例DLBCL患者纳入研究,比较DLBCL肿瘤组织及病灶旁正常组织的Caspase-9、CMYC表达水平,分析Caspase-9、CMYC表达与临床病理特征的关系,比较预后良好和预后不良患者的临床病理特征、Caspase-9、CMYC表达水平,采用二元Logistic回归分析DLBCL患者预后不良的影响因素。结果DLBCL患者肿瘤组织中Caspase-9阳性率为43.33%,明显低于正常组织的80.56%,CMYC阳性率为36.67%,明显高于正常组织的13.88%,差异均有统计学意义(P<0.05);Ann Arbor分期Ⅰ~Ⅱ期、国际预后指数(IPI)评分0~2分患者DLBCL肿瘤组织Caspase-9阳性率明显高于Ⅲ~Ⅳ期和3~4分患者,CMYC阳性率低于Ⅲ~Ⅳ期、3~4分患者,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良患者Ann Arbor分期中Ⅲ~Ⅳ期占比、IPI评分中3~4分占比、CMYC阳性表达占比分别为73.08%、65.38%、69.23%,均高于预后良好组的35.29%、32.35%、11.76%,Caspase-9阳性表达占比为23.08%,低于预后良好组的58.82%,差异均有统计学意义(P<0.05);Ann Arbor分期、IPI评分、Caspase-9、CMYC均为影响DLBCL患者预后不良的独立影响因素(P<0.05),其中Ann Arbor分期Ⅲ~Ⅳ期预后不良风险是Ⅰ~Ⅱ期的9.008倍;IPI评分3~4分预后不良风险是0~2分的10.298倍;Caspase-9表达阳性预后不良风险是阴性的0.622倍;CMYC表达阳性预后不良风险是阴性的19.922倍。结论Caspase-9、CMYC异常表达参与DLBCL的进展,与肿瘤恶性程度有关,且Caspase-9、CMYC异常表达是DLBCL预后不良的独立影响因素,对DLBCL预后具有一定的预测价值,可作为预测DLBCL患者预后的参考指标。

FasL、Caspase-9表达水平对肝细胞性肝癌患者介入治疗后预后的判断价值分析

目的 探讨介入治疗前后肝细胞性肝癌(HCC)患者Fas配体(FasL)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达变化及意义。方法 选取68例接受介入治疗的HCC患者为研究对象。对比治疗前后HCC患者FasL、Caspase-9水平。统计HCC患者复发情况,并分为复发组和未复发组。对比复发组和未复发组临床资料、治疗前后FasL、Caspase-9水平。Logistic多因素回归分析影响HCC患者治疗后复发的危险因素。制作受试者工作特征曲线(ROC),以曲线下面积(AUC)评价FasL、Caspase-9对HCC患者治疗后复发的预测价值。结果 与治疗前相比,治疗后患者FasL水平降低(P<0.05),Caspase-9水平升高(P<0.05)。随访结束,介入治疗的HCC患者复发发生率为47.06%(32/68)。复发组肿瘤最大直径、肿瘤个数、治疗后FasL水平高于未复发组(P<0.05),治疗后Caspase-9水平低于未复发组(P<0.05)。多因素分析结果显示:肿瘤最大直径(OR=2.619,95%CI:1.126~6.092)、治疗后FasL(OR=2.134,95%CI:1.264~3.602)、治疗后Caspase-9(OR=0.975,95%CI:0.954~0.997)是HCC患者治疗后复发的相关因素(P<0.05)。ROC分析显示,治疗后FasL、Caspase-9及两者联合检测对预测HCC患者治疗后复发灵敏度分别为78.12%(95%CI:59.56%~90.06%)、71.87%(95%CI:53.02%~85.60%)、93.75%(95%CI:77.78%~98.91%),特异度分别为72.22%(95%CI:54.57%~85.21%)、80.56%(95%CI:63.43%~91.20%)、72.22%(95%CI:54.57%~85.21%),AUC分别为0.794(95%CI:0.679~0.883)、0.785(95%CI:0.668~0.875)、0.867(95%CI:0.763~0.937)。结论 介入治疗后HCC患者FasL水平降低、Caspase-9水平升高。治疗后FasL、Caspase-9可作为临床评估HCC患者治疗后复发的重要参考指标。

电针对慢性疼痛抑郁共病大鼠海马组织Cyt-C、Caspase-9表达的影响

目的 观察电针“合谷”“太冲”对慢性疼痛抑郁共病(CPDC)大鼠海马组织细胞色素C(Cyt-C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,探讨电针治疗CPDC的可能机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组和电针组,每组15只。采用左后足足底2次注射完全弗氏佐剂复制CPDC模型。电针组于双侧“合谷”“太冲”行电针干预,20 min/次,药物组予10 mg/kg度洛西汀混悬液灌胃,连续14 d。分别于首次注射后7、14、21、28 d检测机械缩足阈值及热缩足潜伏期,14、28 d检测悬尾不动时间和糖水偏好率,尼氏染色观察海马神经元形态及尼氏体数量,Western blot、免疫组化检测海马组织Cyt-C、Caspase-9蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期减少(P<0.01),悬尾不动时间增加(P<0.01),糖水偏好率下降(P<0.01),海马神经元排列稀松,神经元受损、丢失,尼氏体数量减少(P<0.01),海马神经元细胞凋亡率升高(P<0.01),海马组织Cyt-C、Caspase-9表达及cleaved-Caspase-9/Caspase-9比值升高(P<0.01);与模型组比较,药物组和电针组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期增加(P<0.01),悬尾不动时间减少(P<0.01),糖水偏好率升高(P<0.01),海马神经元丢失减少,细胞排列较整齐,核仁清晰,尼氏体数量增加(P<0.01),海马神经元细胞凋亡率降低(P<0.01),海马组织Cyt-C、Caspase-9表达及cleaved-Caspase-9/Caspase-9比值降低(P<0.01)。结论 电针“合谷”“太冲”可减轻CPDC模型大鼠疼痛及抑郁行为,发挥神经保护作用,其机制可能与抑制海马组织Cyt-C、Caspase-9蛋白表达,抑制海马神经元凋亡有关。

N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺通过NLRP3/Caspase-1抑制巨噬细胞泡沫化及焦亡作用

目的设计并合成了嘧啶并吲哚类衍生物N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺(BFPI),探讨其是否通过NLRP3/Caspase-1通路抑制巨噬细胞焦亡和泡沫化作用。方法以2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪和2-氨基吲哚为起始原料合成BFPI,并通过1H NMR、13 C NMR、ESI-MS对其结构进行表征。将体外培养的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7分为空白组、模型组(PA)组和治疗组(BFPI)组,各组细胞用对应培养液处理24 h后,用MTT法检测其增殖活力,油红O染色检测细胞内脂滴形成情况,并用Western blot和RT-qPCR检测NLRP3、Caspase-1和MCP-1 mRNA和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组细胞增殖活力明显下降,脂滴形成量明显增加,与模型组比较,治疗组细胞增殖活力明显增加,脂滴形成量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与空白组比较,模型组细胞NLRP3、Caspase-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,与模型组比较,治疗组细胞上述指标表达水平均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BFPI可通过抑制巨噬细胞NLRP3、Caspase-1和MCP-1的表达进而促进其增殖并抑制脂质吞噬能力,有助于延缓动脉粥化时巨噬细胞来源的泡沫细胞形成。

乙型肝炎病毒感染患者PBMC表面PD-1、Caspase-9在不同病情阶段中临床表达意义

目的探究乙型肝炎患者不同阶段的外周血单个核细胞(PBMC)表面程序性死亡受体-1(PD-1)、半胱氨酸天冬氨酸酶-9(Caspase-9)水平,寻找其临床表达意义。方法选取湘潭市中心医院感染性疾病与肝病科2020年3月至2022年9月进行治疗的224例乙型肝炎患者,根据其病情阶段将所有患者分成乙型肝炎轻度组(n=83)、乙型肝炎中度组(n=76)和乙型肝炎重度组(n=65)。另取同期肝癌患者21例作为肝癌组,同期健康体检人员70例归入健康组。比较各组乙型肝炎患者肝功能指标,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平,统计分析不同病情阶段与PBMC表面PD-1、Caspase-9水平的关系以及其对于病情阶段的预测价值。结果乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌患者的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乙型肝炎DNA(HBV-DNA)都显著高于健康组,乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组AST、ALT依次升高,并且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌组患者PBMC表面PD-1、Caspase-9水平明显高于健康组(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组Caspase-9水平依次降低,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎重度组和肝癌组PBMC表面PD-1依次升高,各组差异有统计学意义(P<0.05);中度组PD-1和轻度组差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC表面PD-1与AST、ALT呈正相关,与HBV-DNA呈负相关,而Caspase-9水平与AST、ALT呈负相关,与HBV-DNA呈正相关,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平联合检测重度乙型肝炎发展为肝癌的AUC值为0.911,敏感度为90.31%,特异度为89.63%。结论乙型肝炎患者不同阶段的PBMC表面PD-1、Caspase-9水平有显著差异,且两者表达水平与肝功能指标存在相关性,进行PD-1、Caspase-9的联合检测可以对重度乙型肝炎发展为肝癌进行预测。

温针灸对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平的影响

目的 分析温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型大鼠软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平的影响,探讨温针灸治疗KOA的可能作用机制。方法 将24只8周龄SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组与温针灸组,每组8只。模型组与温针灸组采用4%木瓜蛋白酶注射法建立KOA模型,空白组不做任何处理,当大鼠出现膝关节肿大,局部刺激有疼痛反应且Lequesne MG行为学评分≥3分时,提示造模成功。造模成功后温针灸组取双侧内膝眼、犊鼻穴,以毫针直刺,深度约5 mm,将艾段点燃放置于针柄末端,共灸2壮,留针20 min;空白组与模型组同等抓取固定20 min,1次/d,不做任何治疗。3组每周均干预6 d,休息1 d,共干预2周。干预后采用Lequesne MG行为学评分评估3组大鼠行为学表现,HE染色法及番红-固绿染色法观察3组大鼠膝关节软骨组织形态变化,Mankin’s评分评估3组大鼠软骨退变程度,TUNEL染色法观察3组大鼠膝关节软骨细胞凋亡率,qPCR检测3组大鼠膝关节软骨组织Caspase-3、Caspase-9 mRNA转录水平。结果 与空白组比较,模型组Lequesne MG行为学评分明显升高(P<0.05);HE染色结果显示膝关节软骨组织各层结构不清,表层出现缺损、裂隙,软骨细胞数量弥漫性增多或局部减少且软骨细胞排列紊乱;番红-固绿染色结果显示软骨基质番红染色不均,固绿染色范围增加,潮线不清;Mankin’s评分升高(P<0.05),膝关节软骨组织细胞凋亡率升高(P<0.05),Caspase-3mRNA转录水平无明显变化(P>0.05),Caspase-9 mRNA转录水平升高(P<0.05)。与模型组比较,温针灸组Lequesne MG行为学评分降低(P<0.05),HE染色结果显示膝关节软骨组织表层较为平整,软骨细胞数量弥漫性增多且排列不规则,但优于模型组;番红-固绿染色结果显示软骨基质番红染色未见明显异常,潮线清晰,Mankin’s评分下降(P<0.05),膝关节软骨细胞凋亡率下降(P<0.05),Caspase-3 mRNA转录水平降低不明显(P>0.05),Caspase-9 mRNA转录水平降低(P<0.05)。结论 温针灸能够有效保护膝关节功能,抑制膝关节软骨细胞的凋亡,延缓KOA软骨退变,其机制可能与调控凋亡因子Caspase-9 mRNA转录水平有关。

外源性H2S对帕金森病模型小鼠神经保护作用及其对基质金属蛋白酶9和Caspase-1表达的影响

目的 探讨外源性硫化氢(H2S)对1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶(MPTP)对诱导的帕金森病(PD)小鼠保护作用及其对基质金属蛋白酶9(MMP-9)和Caspase-1表达的影响。方法 将36只雄性昆明小鼠随机分为对照组(control)、PD组和PD+硫氢化钠(NaHS)组,每组12只。腹腔注射MPTP(30 mg/kg),每天1次,连续7 d诱导PD小鼠模型,PD+NaHS组于模型制作前30 min腹腔注射5.6 mg/kg NaHS(H2S供体),对照组给予等量生理盐水。采用震颤麻痹评分、悬挂实验评估小鼠行为学变化,HE染色观察各组小鼠中脑黑质(SN)神经元的形态学改变;免疫组织化学和Western blotting法检测各组中脑SN区酪氨酸羟化酶(TH)、MMP-9和Caspase-1蛋白表达。结果 与control组比较,PD组小鼠震颤麻痹评分增高(P<0.05),悬挂实验评分降低(P<0.05);光学显微镜下中脑SN区神经元数量明显减少,排列紊乱,部分神经元胞体固缩,胞质红染;SN区TH阳性细胞数及TH蛋白表达降低(P<0.05),MMP-9与Caspase-1阳性细胞数及MMP-9与Caspase-1蛋白表达水平增加(P<0.05)。与PD组相比,PD+NaHS组小鼠震颤麻痹评分降低(P<0.05),悬挂实验评分增加(P<0.05),SN区神经元数量明显增多;SN区TH阳性细胞数及TH蛋白表达水平增加(P<0.05),MMP-9与Caspase-1阳性细胞数及MMP-9与Caspase-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 外源性H2S对PD小鼠黑质多巴胺能神经元具有保护作用,其机制可能与抑制MMP-9与Caspase-1介导的神经炎症反应有关。

基于PI3K/Akt/caspase-9信号通路研究归芪白术方联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过PI3K/Akt/caspase-9通路对荷瘤小鼠的抑瘤作用及细胞凋亡的机制。方法建立荷瘤模型,随机分模型组、奥沙利铂组(10 mg·kg^(-1))、奥沙利铂+归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg^(-1));末次给药后切除移植瘤,计算抑制率;苏木精-伊红染色法(HE)观察瘤组织病理改变;免疫组化法(IHC)检测p-PI3K、p-Akt、caspase-9、caspase-3表达;免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2及PI3K/Akt/caspase-9通路表达情况。结果各用药组瘤重较模型组降低(P<0.01);与奥沙利铂组比,奥沙利铂+归芪白术方高、中剂量组瘤重降低(P<0.05,P<0.01);模型组肿瘤细胞密集,未见组织坏死区;各用药组肿瘤细胞减少,有明显的组织坏死区和广泛炎性细胞浸润;与模型组比,各给药组p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白下降,而caspase-9、cleaved-caspase-9、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax蛋白升高;与奥沙利铂组比,奥沙利铂+归芪白术方高剂量组p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白下降(P<0.05,P<0.01),caspase-9、cleaved-caspase-9、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax升高(P<0.05,P<0.01);奥沙利铂+归芪白术方中剂量组p-PI3K、p-Akt蛋白下降(P<0.05),cleaved-caspase-9和Bax含量升高(P<0.05)。结论归芪白术方可提高奥沙利铂抑瘤作用,促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt/caspase-9信号通路有关。

乙型肝炎病毒感染患者PBMC表面PD-1、Caspase-9在不同病情阶段中临床表达意义

目的:探究乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血单个核细胞(PBMC)表面程序性死亡受体-1(PD-1)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9(Caspase-9)在不同病情阶段中的表达水平及临床意义。方法:选取2019年1月—2021年10月我院收治的240例HBV感染患者,分别处于HBV相关性原发性肝癌(HCC)、乙肝肝硬化、重度乙型病毒性肝炎(CHB)、中度CHB、轻度CHB,根据其病情阶段不同分为HBV相关性HCC组(n=76)、乙肝肝硬化组(n=30)、重度CHB组(n=31)、中度CHB组(n=40)、轻度CHB组(n=63),另选取同期80例健康体检者为健康对照组,均检测对比PBMC表面PD-1、Caspase-9水平,同时检测对比各组肝功能相关指标(AST、ALT、HBV-DNA),分析不同病情阶段HBV感染患者PBMC表面PD-1、Caspase-9水平与肝功能相关指标的相关性,分析二者联合检测对HBV感染进展为HCC的预测价值。结果:与健康对照组相比,HBV感染各组PBMC表面PD-1、Caspase-9水平均明显升高,重度CHB组PBMC表面PD-1水平较中度CHB组、轻度CHB组高,Caspase-9水平较中度CHB组、轻度CHB组低,HBV相关性HCC组Caspase-9水平低于乙肝肝硬化组(P<0.05);与健康对照组相比,HBV感染各组AST、ALT、HBV-DNA水平均明显升高,重度CHB组AST、ALT水平较中度CHB组、轻度CHB组高,HBV相关性HCC组AST、ALT水平高于乙肝肝硬化组,低于重度CHB组(P<0.05);AST、ALT与PBMC表面PD-1呈正相关(r_(1)=0.753,r_(2)=0.785,P<0.05),与PBMC表面Caspase-9呈负相关(r_(1)=-0.724,r_(2)=-0.692,P<0.05);经ROC曲线分析显示,PBMC表面PD-1、Caspase-9联合检测预测重度CHB进展为HCC的AUC值为0.902,敏感度(90.32%)、特异度(89.47%)均较高(P<0.05)。结论:HBV感染患者不同病情阶段PBMC表面PD-1、Caspase-9表达水平存在差异,二者表达水平可作为肝损伤程度的动态观察指标,辅助鉴别诊断肝癌。

GSDMD通过激活caspase-9-caspase-3凋亡信号通路参与脓毒症相关获得性衰弱

目的:探讨gasdermin D(GSDMD)-胱天蛋白酶9(caspase-9)-caspase-3在脓毒症相关获得性衰弱发生发展中的机制。方法:诱导C2C12小鼠成肌细胞分化为肌管,设置3个组:control组,加入与脂多糖(LPS)组等体积的无菌磷酸盐缓冲液(PBS);LPS组:加入LPS,使LPS在培养液中的终浓度为1 mg/L,干预12 h;LPS+腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)组:加入LPS,使LPS在培养液中的终浓度为1 mg/L,干预12 h后加入ATP,使ATP在培养液中的终浓度为5 mmol/L,干预0.5 h。光镜观察肌管形态;Western blotting检测肌球蛋白重链(MHC)、成肌蛋白(myogenin)、caspase-1、caspase-11、GSDMD、caspase-9、cleaved caspase-9、caspase-3、cleaved caspase-3、肌肉环指蛋白1(MuRF-1)和atrogin-1蛋白水平;腺病毒转染敲减GSDMD;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;碘化丙啶(PI)染色观察细胞损伤情况;JC-1染色检测线粒体膜电位。结果:诱导5~7 d后,光镜观察到细胞由多角形分化为管状;Western blotting结果显示,与成肌细胞相比,肌管中肌管标志蛋白MHC和myogenin表达显著升高,证明肌管诱导成功。Western blotting结果显示,与control组比较,LPS组和LPS+ATP组caspase-1、caspase-11、GSDMD、caspase-9、cleaved caspase-9、caspase-3、cleaved caspase-3、MuRF-1和atrogin-1蛋白水平均显著升高;与si-NC+LPS组比较,si-GSDMD+LPS组caspase9、cleaved caspase-9、caspase-3、cleaved caspase-3、MuRF-1和atrogin-1蛋白水平显著降低;与si-NC+LPS+ATP组比较,si-GSDMD+LPS+ATP组caspase-9、cleaved caspase-9、caspase-3、cleaved caspase-3、MuRF-1和atrogin-1蛋白水平显著降低。Western blotting结果显示,与control组比较,si-NC组GSDMD表达无显著差异,si-GSDMD组GSDMD表达显著降低,说明腺病毒转染敲减肌管GSDMD表达成功。TUNEL染色结果显示,与control组比较,LPS组和LPS+ATP组细胞凋亡水平均显著升高;与si-NC+LPS组比较,si-GSDMD+LPS组细胞凋亡水平显著降低;与si-NC+LPS+ATP组比较,si-GSDMD+LPS+ATP组细胞凋亡水平显著降低。PI染色结果显示,与control组比较,LPS组和LPS+ATP组的PI阳性细胞比例均显著上升。JC-1染色结果显示,与control组比较,LPS组和LPS+ATP组JC-单体比例均显著升高;与si-NC+LPS组比较,si-GSDMD+LPS组JC-单体比例显著降低;与si-NC+LPS+ATP组比较,si-GSDMD+LPS+ATP组JC-单体比例显著降低。结论:GSDMD-caspase-9-caspase-3信号通路可能参与脓毒症相关肌萎缩的发生发展。

一氧化碳中毒后迟发性脑病患者血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9水平与病情、预后的关系

目的 探讨急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(DEACMP)患者血清B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)水平与病情、预后的关系。方法 选取2019年1月—2022年9月收治的DEACMP 92例作为DEACMP组,急性一氧化碳中毒(ACMP)后未发生DEACMP 50例作为ACMP组,健康体检者50例作为健康体检组。比较DEACMP组、ACMP组和健康体检组3组,DEACMP患者急性期和恢复期,以及预后不良和预后良好DEACMP患者血清Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9水平,采用Pearson相关性分析探讨DEACMP患者血清Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9与长谷川痴呆量表(HDS)、格拉斯哥预后量表(GOS)的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9单独及联合检测对DEACMP患者预后预测价值。结果 DEACMP组、ACMP组和健康体检组血清Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9依次降低(P<0.05)。DEACMP患者血清Bcl-2和Caspase-3、Caspase-9急性期均高于恢复期,预后不良均高于预后良好(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,DEACMP患者血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9与HDS、GOS均呈负相关(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9单独及联合检测对DEACMP患者预后不良预测的曲线下面积分别为0.859、0.780、0.798和0.921。结论 DEACMP患者血清Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9水平与病情和预后相关,三者联合检测对DEACMP患者预后预测价值较高。

Bcl-2和Caspase-9对儿童癫痫持续状态近期预后的预测价值

目的探讨血清B细胞淋巴瘤相关蛋白-2(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)对儿童癫痫持续状态(SE)近期预后的预测价值。方法选择SE患儿62例为SE组,选择同期体检健康儿童62例为对照组;按照预后将SE患儿分为预后不良组和预后良好组。癫痫持续状态严重程度量表(STESS)评估SE患儿SE严重程度。ELISA检测各组血清Bcl-2和Caspase-9水平。结果SE组Bcl-2和Caspase-9水平高于对照组(P<0.05)。预后不良组和预后良好组STESS评分、Bcl-2和Caspase-9水平比较,差异有显著性(P<0.05)。STESS评分、Bcl-2和Caspase-9是影响SE患儿近期预后的独立影响因素(P<0.05);入院血清Bcl-2和Caspase-9联合检测对SE患者近期预后具有较好的预测效能(P<0.05)。结论血清Bcl-2和Caspase-9是SE患儿近期预后的有效预测指标。

Caspase-9蛋白在亚慢性砷染毒大鼠睾丸间质细胞中的表达研究

[目的]探讨亚慢性砷染毒对大鼠睾丸间质细胞Caspase-9蛋白表达的影响。[方法]将40只健康成年清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照组以及低、中、高剂量染毒组,每组10只。采用自由饮水方式进行染毒,低、中、高剂量染毒组亚砷酸钠的染毒剂量分别为2.4、12、60 mg/L,对照组给予生理盐水,染毒试验持续14周。染毒试验结束后,检测大鼠外周血白细胞数量;采用ELISA法检测大鼠血清TNF-α及IL-1的浓度;利用透射电镜观察大鼠精子的超微结构;应用免疫组化法检测大鼠睾丸间质细胞Caspase-9蛋白的表达定位及表达水平。[结果]与对照组相比,中、高剂量染毒组大鼠血清中TNF-α、IL-1浓度及白细胞计数均显著(P<0.05)升高。透射电镜下,对照组精子顶体结构完整,厚度及染色均匀;低剂量染毒组可见精子胞膜肿胀,核染色质较均匀;中剂量染毒组精子顶体与核分离,胞膜肿胀;高剂量染毒组精子尾部中断,轴丝排列紊乱。免疫组化法分析表明,Caspase-9蛋白主要表达于睾丸间质细胞的细胞质,表达信号呈棕褐色;与对照组相比,各剂量染毒组大鼠睾丸组织内Caspase-9蛋白的表达水平均显著(P<0.05)升高。[结论]睾丸间质细胞Caspase-9蛋白表达水平升高可能是亚砷酸钠致雄性大鼠慢性生殖毒性的机制之一。

芒柄花素通过miR-1229/ZDHHC9分子轴对胶质瘤细胞增殖、活力及凋亡的影响

目的:探讨芒柄花素对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子作用机制。方法:构建皮下移植瘤小鼠模型,灌胃给予5.72、14.31、22.9、31.49 mg/kg剂量的芒柄花素,观察肿瘤重量、体积变化;免疫组织化学法检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达。用不同浓度(20、50、80、110μmol/L)的芒柄花素处理TJ905细胞,并将TJ905细胞分为空白对照组、110μmol/L芒柄花素组、110μmol/L芒柄花素+miR-1229组、110μmol/L芒柄花素+miR-1229+ZDHHC9组、miR-NC组、miR-1229 mimic组。用Edu实验、CCK-8实验检测细胞增殖能力,TUNEL实验检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验检测miR-1229、ZDHHC9 mRNA表达水平,在线网站及双荧光素酶报告基因法验证miR-1229与ZDHHC9靶向结合。结果:与空白对照组比较,不同剂量的芒柄花素处理组肿瘤体积、重量及PCNA蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。与对照组比较,不同浓度(20、50、80、110μmol/L)的芒柄花素处理后,细胞增殖率显著降低,凋亡率显著升高(均P<0.05);与110μmol/L芒柄花素组比较,110μmol/L芒柄花素+miR-1229组细胞增殖率、细胞活力均显著降低,凋亡率显著增加(均P<0.05);与110μmol/L芒柄花素+miR-1229组比较,110μmol/L芒柄花素+miR-1229+ZDHHC9组细胞增殖率、细胞活力均显著增加,凋亡率显著下降(均P<0.05);双荧光素酶报告基因实验验证miR-1229与ZDHHC9靶向结合。结论:芒柄花素可能通过miR-1229/ZDHHC9分子轴抑制胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡。

经鼻加温湿化高流量氧疗对重症肺炎患儿血气指标、MMP-9及TNF-α的影响

目的 探讨经鼻加温湿化高流量氧疗(HFNC)治疗小儿重症肺炎的疗效及对血气指标、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法 选取2018年5月—2020年8月河北省人民医院收治的123例重症肺炎患儿作为研究对象,按照随机抽样法分为观察组(HFNC治疗,n=62)与对照组(面罩吸氧治疗,n=61)。对比两组临床症状、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、血氧分压(PaO_(2))、TNF-α、MMP-9、血氧饱和度/吸入氧浓度与呼吸频率的比值(ROX指数)。结果 观察组的退热时间、体征消失时间、咳嗽咳痰消失时间、住院时间分别为(5.21±1.02)d、(10.02±1.32)d、(7.41±0.96)d、(9.02±2.69)d,均短于对照组(t=5.688、10.332、10.253、2.180,P<0.05)。观察组治疗后2、6、12、24 h的ROX指数分别为(6.31±1.62)、(9.85±1.96)、(11.65±2.39)、(13.46±3.25),均高于对照组(t=2.467、3.380、4.251、4.902,P<0.05);治疗后,观察组的PaCO_(2)(35.69±5.21)mmHg低于对照组,而PaO_(2)(87.52±18.69)mmHg高于对照组(t=2.379、4.647,P<0.05);治疗后,观察组的MMP-9、TNF-α分别为(6.32±1.05)pg/mL、(10.40±1.30)pg/mL,低于对照组(t=13.425、13.060,P<0.05)。结论 HFNC用于重症肺炎患儿中具有显著效果,有利于改善患儿血气指标,降低MMP-9、TNF-α水平。

MMP-9与肺部疾病的相关性研究

基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)属于Zn2+依赖性蛋白酶家族中的一员,参与机体多种生理、病理过程。MMP-9在细胞外基质重塑、细胞侵袭及免疫反应、血管生成中发挥重要作用。近年来研究表明,MMP-9与肺部疾病发生、发展密切相关,本文就MMP-9在慢性阻塞性肺疾病、肺间质纤维化、非小细胞肺癌疾病中的研究现状进行简要综述。

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的:探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法:采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果:与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05);抑制组转染后的细胞中miR-223-3p和LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均降低(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力均增加(P<0.05)。转染72 h后,TGFBR3蛋白表达水平及mRNA的表达水平细胞增殖与迁移能力:抑制组>观察组>过表达组(P<0.01)。3组miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2 mRNA表达水平逐渐降低,抑制组<对照组<过表达组(P<0.01)。结论:miR-223-3p抑制肺癌H1299细胞的增殖和迁移,靶向下调TGFBR3和上调LncRNA ADAMTS9-AS2表达可能为其作用机制。

血清缺氧诱导因子-1α、内皮素-1及基质金属蛋白酶-9联合检测对颅内动脉瘤破裂出血142例手术预后的价值

目的探讨血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)联合预测颅内动脉瘤破裂出血术后预后不良的价值。方法选取2020年1月至2022年1月东台市人民医院收治的颅内动脉瘤破裂出血病人142例作为研究组,另选取同期健康体检者140例作为对照组,检测病人术前、入院1周(均为术后)、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平并进行比较。另依据病人出院6个月后预后情况,将其分为预后良好组(101例)和预后不良组(41例),对比预后良好组和预后不良组术前、入院1周、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平,分析颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的影响因素及血清HIF-1α、ET-1、MMP-9单项及联合检测对颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的预测价值。结果研究组术前血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于对照组(P<0.05);研究组随访6个月预后不良发生率为28.87%(41/142),血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平经重复测量方差分析差异有统计学意义(P<0.05),预后不良组入院1周、术后6个月血清HIF-1α(42.43±3.05)μg/L和(41.53±4.52)μg/L、ET-1(14.27±1.24)ng/L和(13.96±2.04)ng/L、MMP-9(15.57±1.81)μg/L和(14.68±2.65)μg/L均低于术前(51.19±4.38)μg/L、(16.50±1.45)ng/L、(18.26±2.29)μg/L;预后良好组入院1周、术后6个月血清HIF-1α(40.78±1.53)μg/L和(34.87±4.68)μg/L、ET-1(13.12±2.16)ng/L和(10.05±1.96)ng/L、MMP-9(14.87±1.20)μg/L和(12.21±2.87)μg/L均低于术前(47.82±4.13)μg/L、(14.89±2.75)ng/L、(17.41±1.21)μg/L;预后良好组术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均低于入院1周(P<0.05)。预后不良组术前、入院1周、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组多发动脉瘤、脑积水、Hunt-Hess分级Ⅳ~Ⅴ级、CT Fisher分级3~4级、手术时机为≥72 h、并发脑血管痉挛、并发脑梗死病人占比均高于预后良好组(P<0.05);Hunt-Hess分级Ⅳ~Ⅴ级、手术时机为≥72 h、术前及入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9高水平均是颅内动脉瘤破裂出血预后不良的危险因素(P<0.05);受试者操作特征曲线显示,术前及入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9三者联合预测颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的灵敏度(97.56%、95.12%)和曲线下面积(0.93、0.91)高于单独预测(P<0.05),特异度与单独评估比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论颅内动脉瘤破裂出血病人术前血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于健康人群,术前和入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9高水平均是术后预后不良的独立危险因素,且对颅内动脉瘤破裂出血术后预后不良具有一定预测价值,但三者联合预测价值更高。

miR-126过表达和ADAM9基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨微小RNA-126(miR-126)过表达和解整联蛋白金属蛋白酶9(ADAM9)基因沉默对胃癌细胞生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养人胃低分化腺癌SGC-7901细胞和人正常胃黏膜上皮NGEC细胞,提取细胞中总RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2种细胞中miR-126和ADAM9 mRNA表达水平。将处于对数生长期的SGC-7901细胞分为miR-126过表达组(miR-126-OE组)和ADAM9基因沉默组(ADAM9 siRNA组),以LipofectamineTM 2000为载体分别转染miR-126模拟物(miR-126 mimics)和敲低ADAM9的RNA寡核苷酸,并设置相应的阴性对照组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平。TargerScan网站预测miR-126的靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-126和ADAM9的靶向调控关系,采用RT-qPCR法和Western blotting法检测转染miR-126 mimics后SGC-7901细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法检测,与人正常胃黏膜上皮NGEC细胞比较,胃癌SGC-7901细胞中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),而ADAM9mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。MTT法检测,SGC-7901细胞过表达miR-126或沉默ADAM9基因48和72 h后,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞增殖活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验检测,与相应阴性对照组比较,48 h后miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组细胞迁移率明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验检测,与相应阴性对照组比较,miR-126 OE组和ADAM9 siRNA组迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与相应阴性对照组比较,miR-126-OE组和ADAM9 siRNA组细胞中E-钙黏蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),而N-钙黏蛋白和波形蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。靶基因预测,ADAM9的3´-UTR含有与miR-126-3p互补的核苷酸序列。双荧光素酶报告基因实验,ADAM9是miR-126靶向负调控的下游基因。SGC-7901细胞转染miR-126 mimics 48 h后,与mimics NC组比较,miR-126 OE组细胞中ADAM9 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:胃癌SGC-7901细胞中miR-126低表达而ADAM9基因高表达。miR-126过表达可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖活性、迁移和侵袭能力,其机制可能与miR-126靶向负调控ADAM9并抑制胃癌细胞的上皮-间质转化(EMT)进程有关。

IFN-γ、MMP-9水平在肺结核中的表达及与其病情活动性的相关性

目的 分析血清干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平在肺结核患者中的表达及与其病情活动性的相关性。方法 选取2019年1至2022年12月新乡医学院第一附属医院收治的264例疑似肺结核患者作为研究对象,经确诊后分为结核组(n=204例)及非结核组(n=60例),根据病情活动情况将结核组分为活动性肺结核组(n=86例)及非活动性肺结核组(n=118例),另选取同期于本院进行健康体检者80名为健康组。比较结核组、非结核组、健康组与结核组中活动性肺结核组、非活动性肺结核组及活动性肺结核中轻症组、重症组间血清IFN-γ、MMP-9水平;分析IFN-γ、MMP-9单一及联合检测肺结核的诊断效能;采用多元Logistic回归分析影响活动性肺结核患者病情程度的相关性因素。结果 三组血清IFN-γ、MMP-9水平比较:结核组>非结核组>健康组,差异具有统计学意义(P<0.05);活动性肺结核患者血清IFN-γ、MMP-9水平均显著高于非活动性肺结核,差异有统计学意义(P<0.05);86例活动性肺结核患者中轻症54例,重症32例。重症患者病程比轻症患者长,吸烟比例及血清IFN-γ、MMP-9水平均显著高于轻症患者,差异有统计学意义(P<0.05);IFN-γ、MMP-9联合诊断肺结核的灵敏度、特异度、准确度分别为93.55%、61.54%、84.09%,均高于三者单独检测(P<0.05);经Logistic回归分析,吸烟、血清IFN-γ及MMP-9均为影响活动性肺结核患者病情程度的相关因素(P<0.05)。结论 肺结核患者血清IFN-γ及MMP-9水平显著升高,二者联合对肺结核具有较好的诊断效能,且为影响活动性肺结核病情严重程度的重要影响因素,对肺结核病情评估具有重要价值。