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Identification and molecular characterization of Cathepsin L gene and its expression analysis during early ontogenetic development of kuruma shrimp Marsupenaeusjaponicus 被引量:1
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作者 QIAO Ying WANG Jun +5 位作者 MAO Yong LIU Min SONG Xiaohong SU Yongquan WANG Chunzhong ZHENG Zhipeng 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2017年第6期52-60,共9页
Cathepsin L gene is a member of the cysteine proteinase gene group. In this study Cathepsin L gene was isolated from Kuruma shrimp Marsupenaeusjaponicus (Mj-Cathepsin L) and the full-length DNA sequence was 1 963 bp... Cathepsin L gene is a member of the cysteine proteinase gene group. In this study Cathepsin L gene was isolated from Kuruma shrimp Marsupenaeusjaponicus (Mj-Cathepsin L) and the full-length DNA sequence was 1 963 bp. Mj-Cathepsin L protein showed high homologies with other Cathepsin L proteins documented in vertebrates, mollusks and other crustaceans. Expression analysis of Mj-Cathepsin L gene in different tissues revealed that it was predominant in hepatopancreas. During early ontogenetic development stages Mj-Cathepsin L showed a development-regulated expression, and the Mj-Cathepsin L showed a molting stage-regulated expression during the five molting stages, inferring its role in the ontogenic development of M.japonicus. Two kinds of forms of Mj- Cathepsin L protein: pro-Cathepsin L and Cathepsin L were measured in hepatopancreas, stomach and intestine by Western Blotting. 展开更多
关键词 cathepsin L gene larval development molting cycle tissue distribution Marsupenaeusjaponicus
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双拷贝v-cath基因的重组HaNPV的构建及毒力分析 被引量:2
2
作者 刘德立 段媛媛 齐义鹏 《中国病毒学》 CSCD 2003年第3期254-258,共5页
利用HaNPV的Bac-to-Bac系统(Hanpvid)构建了双拷贝v-cath基因的重组HaNPV,即:除病毒自身的v-cath基因外,还带有由ie1启动子控制的早期表达v-cath基因的重组病毒dciHaNPV.Dotblot和Northernblot分析证明:重组病毒构建正确.用重组病毒感染... 利用HaNPV的Bac-to-Bac系统(Hanpvid)构建了双拷贝v-cath基因的重组HaNPV,即:除病毒自身的v-cath基因外,还带有由ie1启动子控制的早期表达v-cath基因的重组病毒dciHaNPV.Dotblot和Northernblot分析证明:重组病毒构建正确.用重组病毒感染Hz-AM1细胞,测定了dciHaNPV的TCID5o为3.16×107 TCID50/mL. 展开更多
关键词 双拷贝v-cath基因 重组HaNPV 构建 毒力 棉铃虫核型多角体病毒 生物杀虫剂
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猪Cathepsin B基因cDNA分子克隆、序列分析及遗传多态性分析 被引量:4
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作者 陈磊 李学伟 +2 位作者 朱砺 李强 李明洲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期385-392,共8页
采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆出了猪组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)基因的cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。猪CTSB基因开放阅读框(ORF)全长1008 bp,编码335个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛... 采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆出了猪组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)基因的cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。猪CTSB基因开放阅读框(ORF)全长1008 bp,编码335个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛的CTSB基因cDNA编码区(CDS)同源性分别为85%、81%、90%,推测的氨基酸序列同源性分别为81%、79%、91%。利用同源性结合序列特征预测表明该蛋白具有信号肽和前肽序列。蛋白质结构同源建模分析表明,该蛋白具有木瓜蛋白酶家族的典型空间结构,包括1个底物结合凹槽和3个相互靠近的活性位点。另外采用PCR-SSCP方法,在147头个体中分析了CTSB基因第6内含子内的SS-CP位点多态性,检测到3个等位基因6种基因型。FF基因型个体的各项嫩度指标最高,其最大剪切力与硬度值分别为6.56 kg和23.55 kg.s,极显著地高于EE和EF基因型个体(P<0.01),平均剪切力为4.85 kg,显著地高于EF基因型个体(P<0.05)。 展开更多
关键词 CTSB基因 基因克隆 嫩度
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猪Cathepsin B基因和Cystatin B基因mRNA表达的发育性变化及组织差异 被引量:2
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作者 陈磊 王金勇 +1 位作者 李学伟 刘良 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期4341-4348,共8页
【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)和半胱氨酸蛋白酶抑制素B(cystatin B,CSTB)在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分... 【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)和半胱氨酸蛋白酶抑制素B(cystatin B,CSTB)在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分析CTSB和CSTB mRNA在两个品种猪的多个组织、多个发育时间点的表达量。【结果】RT-PCR结果表明,CTSB和CSTB mRNA表达量最高的组织为肾脏,心肌和骨骼肌中表达丰度低,股四头肌CSTB mRNA表达量极显著高于背最长肌。CTSB mRNA表达量在0~5月龄长白猪和梅山猪背最长肌中表现出先升高后降低的变化趋势,梅山猪峰值出现较早,并在4月龄后再次出现急剧上升。CSTB mRNA表达量在梅山猪中表现出生初期较高,随后逐渐降低的表达模式,长白猪的表达模式则为出生后表达量急剧升高,2月龄达到峰值,随后逐渐降低。2品种猪背最长肌组织CTSB和CSTB mRNA表达量表现出显著正相关。【结论】CTSB和CSTB mRNA表达量受到组织、发育阶段和品种影响,2基因mRNA表达量呈显著正相关。 展开更多
关键词 组织蛋白酶B基因(CTSB) 胱抑素B基因(CSTB) 表达量 嫩度
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失活ChiA和v-cath基因的重组BmNPV表达hGM-CSF
5
作者 贡成良 薛仁宇 +2 位作者 曹广力 石晓燕 沈卫德 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第10期947-952,共6页
利用DNA同源重组技术使家蚕核型多角体病毒的多角体蛋白基因取代v-cath、ChiA两基因的部分编码区域和共同的启动子区域,获得了v-cath、ChiA两基因同时失活的、可形成多角体的、并能表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的重组病毒BmNPVpol... 利用DNA同源重组技术使家蚕核型多角体病毒的多角体蛋白基因取代v-cath、ChiA两基因的部分编码区域和共同的启动子区域,获得了v-cath、ChiA两基因同时失活的、可形成多角体的、并能表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的重组病毒BmNPVpolh+CP-ChiA-GMCSF+.研究结果显示:v-cath、ChiA两基因的失活不影响病毒的复制及多角体的形成,但感染细胞的存活时间比野生病毒感染的多2天,可明显改善外源基因在培养细胞和家蚕中的表达水平;感染BmNPVpolh+CP-ChiA-GMCSF+的家蚕幼虫体表保持正常,无野生病毒感染后引起的破皮流脓现象. 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 半胱氨酸蛋白酶 几丁质酶 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
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Cystatin M,Cathepsin B双基因共表达载体的构建及鉴定
6
作者 张和军 王海燕 +4 位作者 葛爱敏 林丛 高美钦 郑伟 万榕 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2009年第10期881-884,共4页
目的:构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂M(Cystatin M,CST6),反义组织蛋白酶B(CB)单/双基因共表达载体.方法:从人胎盘组织中用TRIzol试剂提取总RNA,巢式PCR扩增人Cystatin M基因全长cDNA片段,RT-PCR扩增CB基因cDNA片段.将扩增的Cystatin M插入... 目的:构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂M(Cystatin M,CST6),反义组织蛋白酶B(CB)单/双基因共表达载体.方法:从人胎盘组织中用TRIzol试剂提取总RNA,巢式PCR扩增人Cystatin M基因全长cDNA片段,RT-PCR扩增CB基因cDNA片段.将扩增的Cystatin M插入到真核表达载体pBudCE4.1的HindⅢ位点上,将CB插入到带有及不带Cystatin M基因真核表达载体pBudCE4.1的XhoI位点上.构建pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB单基因表达载体及pBudCE4.1/CST6-CB双基因共表达载体.利用PCR、酶切分析和序列测定方法进一步验证所构建质粒的准确性.结果:人CST6,CB的RT-PCR扩增产物片段大小分别为447,257bp.对pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB,pBudCE4.1/CST6-CB进行测序分析证实CST6,CB序列均正确,酶切鉴定及PCR结果显示,CST6,CB的大小分别为447,257bp且已克隆至pBudCE4.1中.结论:成功构建了pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB,pBudCE4.1/CST6-CB表达载体,为深入探讨2种基因在肿瘤侵袭中的生物学作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 组织蛋白酶B 基因表达调控 基因 DNA 重组 遗传载体
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Cathepsin B反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞中CB mRNA表达的影响
7
作者 楚广民 杨红梅 +1 位作者 孙海斌 陈奎生 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2007年第12期1623-1624,1630,共3页
目的:探讨组织蛋白酶B(CB)反义寡核苷酸(ASODN)对CB mRNA表达的影响。方法:将食管癌EC9706细胞分5组培养,5组分别用设计合成的3条封闭CB不同基因位点的反义寡核苷酸(ASODN1、ASODN2、ASODN3)及1条无关寡核苷酸(N-ODN)转染,另1组不转染(... 目的:探讨组织蛋白酶B(CB)反义寡核苷酸(ASODN)对CB mRNA表达的影响。方法:将食管癌EC9706细胞分5组培养,5组分别用设计合成的3条封闭CB不同基因位点的反义寡核苷酸(ASODN1、ASODN2、ASODN3)及1条无关寡核苷酸(N-ODN)转染,另1组不转染(空白对照组)。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中CB mRNA表达情况。结果:3条CB ASODNs转染的EC9706细胞中CB mRNA表达均下调,差异无统计学意义,但均明显低于N-ODN组及空白对照组。结论:CB ASODN可抑制食管癌EC9706细胞中CB mRNA表达,为临床预防食管癌等恶性肿瘤浸润转移奠定理论了基础。 展开更多
关键词 食管肿瘤/免疫学 寡核苷酸类 反义/免疫学 @EG9706细胞学 组织蛋白酶B/免疫学 基因表达
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Cathepsin B基因的沉默对香蕉穿孔线虫繁殖力的影响 被引量:3
8
作者 李宇 谢辉 +2 位作者 徐春玲 李丹蕾 张超 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1608-1616,共9页
【目的】通过研究cathepsin B基因对香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)繁殖力的影响,探索cathepsin B基因的功能,为利用该基因防治香蕉穿孔线虫和植物寄生线虫组织蛋白酶的进一步研究提供科学依据。【方法】根据已知香蕉穿孔线虫catheps... 【目的】通过研究cathepsin B基因对香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)繁殖力的影响,探索cathepsin B基因的功能,为利用该基因防治香蕉穿孔线虫和植物寄生线虫组织蛋白酶的进一步研究提供科学依据。【方法】根据已知香蕉穿孔线虫cathepsin B基因(Rs-cb-1)的序列,从香蕉穿孔线虫克隆cathepsin B基因,以含有目的基因的质粒DNA为模板合成特异的双链RNA(dsRNA),采用dsRNA浸泡的方法对香蕉穿孔线虫进行RNA干扰(RNAi)试验,通过室内接种胡萝卜愈伤组织繁殖线虫的方法,研究cathepsin B基因的沉默效应对香蕉穿孔线虫繁殖力的影响。【结果】用Rs-cb-1dsRNA浸泡12、24、48、72h后香蕉穿孔线虫的平均繁殖倍数分别为165、93、54、53,而未经dsRNA处理的该线虫繁殖倍数均大于420;并且Rs-cb-1dsRNA浸泡的时间不同,对应各处理之间的繁殖倍数差异显著。RT-PCR检测,经Rs-cb-1dsRNA浸泡12h后,目的基因在香蕉穿孔线虫的表达量明显减弱,浸泡24h后其表达量进一步减弱,但还有微量表达,经dsRNA浸泡48、72h后目的基因基本不表达。【结论】Rs-cb-1与香蕉穿孔线虫的繁殖力相关;Rs-cb-1dsRNA的浸泡可以明显抑制cathepsin B基因的表达量,从而影响香蕉穿孔线虫的繁殖力,但浸泡时间不同Rs-cb-1的沉默效率也不同,沉默效率最好的干涉时间是48h。 展开更多
关键词 香蕉穿孔线虫 cathepsin B基因 RNA干扰 繁殖力
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日本血吸虫(中国大陆株)Cathepsin L基因的克隆、表达及其免疫保护功能的研究 被引量:1
9
作者 张慧 苑纯秀 +4 位作者 冯新港 傅志强 刘金明 蔡幼民 林矫矫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期11-15,18,共6页
目的开展日本血吸虫组织蛋白酶L(SjCL)功能研究,为研发血吸虫病抗病疫苗提供基础。方法应用RT-PCR技术分离、克隆日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L保守功能域编码基因,并在大肠杆菌系统中表达,应用免疫亲和层析法纯化组织蛋白酶L重组抗... 目的开展日本血吸虫组织蛋白酶L(SjCL)功能研究,为研发血吸虫病抗病疫苗提供基础。方法应用RT-PCR技术分离、克隆日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L保守功能域编码基因,并在大肠杆菌系统中表达,应用免疫亲和层析法纯化组织蛋白酶L重组抗原,用该基因纯化重组表达产物进行小鼠免疫保护实验。结果获得了672 bp的血吸虫组织蛋白酶L保守功能域cDNA序列,成功构建了原核表达载体pET28a(+)-SjCL,并在大肠杆菌中进行了表达,经免疫亲和层析获得了高纯度的SjCL融合蛋白,以该纯化物免疫小鼠,结果实验组减虫率为36.04%,肝组织减卵率为34%,粪卵减少率达49%,与对照组进行方差分析,差异均显著。结论获得日本血吸虫组织蛋白酶L保守功能域cDNA克隆,其原核表达产物免疫小鼠对抗血吸虫感染具有一定的保护性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 组织蛋白酶L 基因克隆表达 免疫
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日本囊对虾Cathepsin B基因在不同卵巢发育时期的表达 被引量:3
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作者 程成 林鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期159-163,共5页
采用实时定量PCR技术,以18SrRNA为内标基因,检测日本囊对虾Cathepsin B基因在mRNA水平不同卵巢发育时期的表达。结果显示,Cathepsin B在卵黄合成前期表达最高,内源性卵黄合成期和外源性卵黄合成期表达水平基本一致,而在成熟期表达水平... 采用实时定量PCR技术,以18SrRNA为内标基因,检测日本囊对虾Cathepsin B基因在mRNA水平不同卵巢发育时期的表达。结果显示,Cathepsin B在卵黄合成前期表达最高,内源性卵黄合成期和外源性卵黄合成期表达水平基本一致,而在成熟期表达水平急剧下降。其中卵黄合成前期与其它3期相比具有显著性差异(P<0.05),内源性卵黄合成期和外源性卵黄合成期Cathepsin B不具有显著性差异(P>0.05),而成熟期与前边三期相比具有显著性差异(P<0.05)。推测Cathepsin B可能在日本囊对虾卵巢发育中发挥了作用。 展开更多
关键词 日本囊对虾 卵巢发育 基因表达
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蠋蝽组织蛋白酶基因鉴定及表达特征分析
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作者 刘莎 梁文凯 +4 位作者 王玉琴 李美娇 陈芬莲 罗云菲 朱家颖 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2024年第5期1161-1170,共10页
组织蛋白酶在昆虫的消化、发育与变态中起重要作用,是捕食性蝽唾液(毒液)中普遍存在的成分,但其生理功能尚不清楚。本文利用同源比对的方法从蠋蝽Arma custos基因组中鉴定出组织蛋白酶基因,使用生物信息学软件分析其序列特征和进化关系... 组织蛋白酶在昆虫的消化、发育与变态中起重要作用,是捕食性蝽唾液(毒液)中普遍存在的成分,但其生理功能尚不清楚。本文利用同源比对的方法从蠋蝽Arma custos基因组中鉴定出组织蛋白酶基因,使用生物信息学软件分析其序列特征和进化关系,采用RT-PCR技术分析它们在成虫不同组织中的表达特征。结果表明,蠋蝽基因组中有37个组织蛋白酶基因,根据结构域分为组织蛋白酶B(AcCAB1-4)、组织蛋白酶D(AcCAD1-13)和组织蛋白酶L(AcCAL1-20)。多序列比对及结构域预测结果表明,组织蛋白酶B和组织蛋白酶L均含有Peptidase_C1结构域、保守的酶催化位点(谷氨酰胺、半胱氨酸、组氨酸和天冬酰胺)以及1个由半胱氨酸残基(C)和组氨酸残基(H)构成的催化二联体,而组织蛋白酶D中存在保守Asp结构域和2个保守的酶催化位点(天冬氨酸)。RT-PCR结果显示,除AcCAL7和AcCAB2外,其余33个组织蛋白酶基因均在肠道中表达,且绝大多数表现特异性或高表达。AcCAL2、AcCAL5-7、AcCAL9等20个组织蛋白酶基因在唾液腺中表达,且AcCAL2仅在主腺后叶和副腺表达,AcCAL7仅在主腺前叶表达,AcCAD13仅在主腺后叶表达,AcCAB2仅在主腺前叶和主腺后叶表达。这些结果表明,多数组织蛋白酶基因在蠋蝽口外消化和肠道消化中发挥消化功能。 展开更多
关键词 蠋蝽 组织蛋白酶 消化 基因鉴定 表达特征
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桃蚜组织蛋白酶基因CTSB-16D和CTSB-348的克隆、表达谱及对不同环境胁迫的响应
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作者 姜万千 杨磊 +2 位作者 孟建玉 杨昌利 张长禹 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期137-145,共9页
为了探索组织蛋白酶基因CTSB-16D和CTSB-348在桃蚜Myzus persicae(Sulzer)响应高低温和UV-B胁迫中的作用,通过RT-PCR技术克隆了桃蚜CTSB-16D和CTSB-348基因,利用生物信息学方法分析了它们的序列特征;采用实时荧光定量PCR(quantitative r... 为了探索组织蛋白酶基因CTSB-16D和CTSB-348在桃蚜Myzus persicae(Sulzer)响应高低温和UV-B胁迫中的作用,通过RT-PCR技术克隆了桃蚜CTSB-16D和CTSB-348基因,利用生物信息学方法分析了它们的序列特征;采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)技术检测了2个基因在桃蚜不同发育阶段的相对表达量及经高温、低温和UV-B胁迫不同时长的无翅成虫中的相对表达量。克隆获得了桃蚜CTSB-16D(GenBank登录号:MZ962352)和CTSB-348(GenBank登录号:MZ962353)基因,序列长度分别为1 096 bp和1 101 bp,开放阅读框(ORF)分别为1 017 bp和1 023 bp,分别编码338个和340个氨基酸,蛋白相对分子量为38.14 kD和37.52 kD,等电点(pI)为5.46和5.99。系统发育分析表明,桃蚜CTSB-16D和CTSB-348均与豌豆蚜Acyrthosiphon pisum(XP_003246386.1、NP_001119608.1) CTSB亲缘关系最近。RT-qPCR分析表明,CTSB-16D和CTSB-348在桃蚜不同发育阶段均有表达,分别在1龄若虫和无翅成虫中的表达量最高。高、低温和UV-B胁迫对CTSB-16D和CTSB-348基因的表达具有明显的诱导作用,且表达量均随时间的延长呈先上升后下降的趋势;4℃胁迫下,CTSB-16D和CTSB-348表达量均在90 min时达到峰值;36℃胁迫下,CTSB-16D和CTSB-348表达量均在30 min时达到峰值;UV-B胁迫下,CTSB-16D和CTSB-348表达量分别在60 min和120 min时达峰值。桃蚜CTSB-16D和CTSB-348基因在不同发育阶段差异表达,且响应温度和UV-B的胁迫,推测两个基因参与桃蚜的生长发育并在桃蚜响应环境胁迫中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 桃蚜 组织蛋白酶 基因克隆 表达分析
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中国大鲵组织蛋白酶D基因克隆及其表达特征分析
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作者 商文聪 彭国玲 +3 位作者 黎琴容 苏淑贤 白禹 李灿 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1170-1180,共11页
【目的】明确组织蛋白酶D基因(CTSD)在中国大鲵不同组织中的表达模式及其免疫防御功能,为深入探究大鲵抵抗病原入侵的作用机理提供理论依据。【方法】通过RACE克隆中国大鲵CTSD基因cDNA序列,采用ProtParam、SignalP-5.0、TMHMM 2.0、CE... 【目的】明确组织蛋白酶D基因(CTSD)在中国大鲵不同组织中的表达模式及其免疫防御功能,为深入探究大鲵抵抗病原入侵的作用机理提供理论依据。【方法】通过RACE克隆中国大鲵CTSD基因cDNA序列,采用ProtParam、SignalP-5.0、TMHMM 2.0、CELLO、NetPhos 3.1及NetNGlyc 1.0等在线软件进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR检测健康中国大鲵不同组织及嗜水气单胞菌感染后的CTSD基因表达情况。【结果】中国大鲵CTSD基因cDNA序列全长1992bp,包括1197bp的开放阅读框(ORF)、136bp的5’端非编码区(5’-UTR)和659bp的3’端非编码区(3’-UTR),共编码398个氨基酸残基。中国大鲵CTSD蛋白相对分子量为43 kD,理论等电点(pI)为6.07,属于酸性稳定疏水性蛋白,主要定位于溶酶体,具有跨膜结构和信号肽,包含1个典型的天冬氨酸蛋白酶结构域和2个天冬氨酸蛋白酶活性位点,以及3个N-糖基化位点(131Asn、222Asn和249Asn)和33个潜在的磷酸化位点。中国大鲵CTSD氨基酸序列与东北小鲵CTSD氨基酸序列的相似性最高,达88.68%;基于CTSD氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示中国大鲵与东北小鲵的亲缘关系最近。CTSD基因在健康中国大鲵的肺脏、肌肉、皮肤、肾脏、肝脏、脾脏、心脏、胃、脑和肠道等10个组织中均有表达,且以肺脏、肌肉、肠道和脾脏中的相对表达量较高;嗜水气单胞菌感染后72 h,中国大鲵肾脏和肝脏中的CTSD基因相对表达量极显著升高(P<0.01,下同),分别是对照组的13.88和35.67倍;脾脏和皮肤中的CTSD基因相对表达量显著升高(P<0.05),分别是对照组的5.43和1.74倍;肌肉中的CTSD基因相对表达量则在感染后12 h极显著升高至最高值,是对照组的42.96倍。【结论】中国大鲵CTSD氨基酸序列具有高度的保守性,包含1个典型的天冬氨酸蛋白酶结构域和2个天冬氨酸蛋白酶活性位点;CTSD基因呈组成性表达,可能在中国大鲵抗病原菌入侵的免疫反应中发挥作用。 展开更多
关键词 中国大鲵 组织蛋白酶 CTSD基因 嗜水气单胞菌 免疫
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与宿主昆虫液化相关的杆状病毒基因及其蛋白 被引量:5
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作者 金利容 刘凯于 胡秋婷 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期76-80,共5页
昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾... 昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾多角体病毒(AcMNPV)中能特异性降解昆虫细胞内的肌动蛋白。几丁质酶不仅参与了虫体体表面几丁质的降解,同时还参与V-CATH蛋白前体的加工过程,起分子伴侣的作用。对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的研究表明其FP25K基因表达产物通过影响组织蛋白酶的释放与分泌而参与虫体液化。简要综述了此3种基因及其表达产物的结构、功能与特性,并讨论了它们在生产上的应用前景。 展开更多
关键词 宿主液化 组织蛋白酶基因 几丁质酶基因 FP25K基因
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大腹园蛛Avg1 cDNA的克隆和序列分析 被引量:2
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作者 任洪林 柳增善 +1 位作者 卢士英 潘风光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期561-564,共4页
Quantity and activity of cathepsin B (CB) are increased during the progress of carcinoma cells’ invasion and metastasis. So, CB is being applied to the diagnosis of cancers and inhibiting their diffusion. The complet... Quantity and activity of cathepsin B (CB) are increased during the progress of carcinoma cells’ invasion and metastasis. So, CB is being applied to the diagnosis of cancers and inhibiting their diffusion. The complete Avg 1 cDNA was randomly cloned from the cDNA library of major ampullate gland of Araneus ventricousus . It is 1 253 bp and encode 334 amino acids in its 1 002 bp encoding region. The molecular weight of the protein is 36 953.00 .GenBank accession number is AY302573. The 3′ non coding region is composed of 179 bp with a polyadenylation signal AATAAA sequence appearing at the position 129 nt and the poly(A) tail is at the position 153 nt downstream of stop codon TAA. The signal peptide cleavage site of its deduced protein is between codon 16 and 17. Two glycosylation sites of AsnThrThr and AsnValSer, respectively, appear at codon 23 and 202. The high homology genes are not found in all genes known in NCBI, but the typical conserved domain of peptidase_C1 has been detected in NCBI BLASTp, and high homologies with CB of some kinds of creatures are shown. The objective function of the Avg1 has not been studied in the spide silk gland yet. 展开更多
关键词 ARANEUS ventricousus major ampullate GLAND cathepsin B gene CLONING sequence analysis
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脊尾白虾组织蛋白酶L基因的克隆及其表达分析 被引量:16
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作者 段亚飞 刘萍 +3 位作者 李吉涛 李健 高保全 陈萍 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期39-46,共8页
根据本实验室构建的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)血细胞全长cDNA文库获得的EST序列,利用RACE技术克隆获得脊尾白虾组织蛋白酶L基因的cDNA全长,命名为EcCatL基因。该序列全长1136bp,包括5'非编码区24bp,开放阅读框960bp和3'... 根据本实验室构建的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)血细胞全长cDNA文库获得的EST序列,利用RACE技术克隆获得脊尾白虾组织蛋白酶L基因的cDNA全长,命名为EcCatL基因。该序列全长1136bp,包括5'非编码区24bp,开放阅读框960bp和3'非编码区152bp,开放阅读框共编码319个氨基酸,预测相对分子量为35.30×103,理论等电点为5.27。同源性分析表明,脊尾白虾组织蛋白酶LEcCatL氨基酸序列与其它甲壳动物高度保守,与变色小长臂虾(Palaemonetes varians)及北极甜虾(Pandalus borealis)CatL的同源性分别为92%和76%。系统进化分析表明,EcCatL基因氨基酸序列与变色小长臂虾的CatL聚为一支。荧光定量PCR分析结果表明,EcCatL基因在血细胞、鳃、肝胰腺、肌肉、卵巢、肠、胃及眼柄中均有表达,其中肝胰腺中的相对表达量最高。感染鳗弧菌及WSSV后6h和12h,脊尾白虾血细胞和肝胰腺中EcCatL的表达量较对照组均极显著增加(P<0.01),且具有明显的时间差异性,表明EcCatL基因在脊尾白虾免疫反应中具有重要作用。 展开更多
关键词 脊尾白虾 组织蛋白酶L 基因克隆 基因表达
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组织蛋白酶B研究进展 被引量:13
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作者 卢士英 任洪林 +2 位作者 柳增善 赵广英 华育平 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第3期306-309,共4页
组织蛋白酶B(cathepsinB:EC3.4.22.1)是溶酶体内半胱氨酸内切蛋白水解酶,其作用非常广泛,参与机体多种生理、病理过程.尤为重要的是,它能促进肿瘤细胞浸润转移,因此成为目前诊断、治疗恶性肿瘤的研究热点.综述了组织蛋白酶B的生物学特... 组织蛋白酶B(cathepsinB:EC3.4.22.1)是溶酶体内半胱氨酸内切蛋白水解酶,其作用非常广泛,参与机体多种生理、病理过程.尤为重要的是,它能促进肿瘤细胞浸润转移,因此成为目前诊断、治疗恶性肿瘤的研究热点.综述了组织蛋白酶B的生物学特性、基因与蛋白结构特点、表达调控机制,以及应用方面的研究. 展开更多
关键词 组织蛋白酶B 生物学特性 肿瘤细胞 浸润转移 病理功能 表达调控机制
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烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达 被引量:9
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作者 赵艳艳 刘建兵 +2 位作者 罗梅浩 郭线茹 原国辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1121-1128,共8页
利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完... 利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(Gen Bank登录号:EF154237)。序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5kDa,等电点为5.96。氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性。将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符。用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1∶51200。通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB。 展开更多
关键词 烟夜蛾 组织蛋白酶B 基因克隆 序列分析 原核表达 免疫印迹
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脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)组织蛋白酶D基因的克隆及其表达分析 被引量:4
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作者 段亚飞 刘萍 +5 位作者 李吉涛 李健 陈萍 高保全 徐文斐 王有昆 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期599-605,共7页
采用RACE技术获得了总长为1853bp的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)组织蛋白酶D基因全长cDNA序列。该基因5′和3′非编码区分别为120bp和572bp,开放阅读框为1161bp,推测编码386个氨基酸,预测分子量为42.36kDa,理论等电点为7.54,命名... 采用RACE技术获得了总长为1853bp的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)组织蛋白酶D基因全长cDNA序列。该基因5′和3′非编码区分别为120bp和572bp,开放阅读框为1161bp,推测编码386个氨基酸,预测分子量为42.36kDa,理论等电点为7.54,命名为EcCatD基因。同源性和系统进化分析表明,EcCatD基因与斑节对虾、美洲螯龙虾的相似性分别为86%和80%,与斑节对虾和美洲螯龙虾紧密聚为一支。荧光定量RT-PCR结果表明,EcCatD基因在血细胞中的相对表达量最高,其次为肝胰腺。该基因在鳗弧菌和WSSV感染后的脊尾白虾血细胞和肝胰腺中的表达量显著增加,并具有不同的时空表达趋势。结果表明EcCatD基因在脊尾白虾免疫反应中具有重要作用。 展开更多
关键词 脊尾白虾 组织蛋白酶D 基因克隆 表达
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亚硝酸盐胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺抗氧化酶、热休克蛋白和组织蛋白酶B基因表达量的影响 被引量:13
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作者 郭慧 谭翠婷 +3 位作者 游林玉 申玉春 卢芷程 朱春华 《广东海洋大学学报》 CAS 2017年第3期117-122,共6页
用实时荧光定量PCR技术研究在20 mg/L亚硝酸盐胁迫下,凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和硫氧还蛋白(TRx)等抗氧化相关酶以及热休克蛋白HSP70、组织蛋白酶... 用实时荧光定量PCR技术研究在20 mg/L亚硝酸盐胁迫下,凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和硫氧还蛋白(TRx)等抗氧化相关酶以及热休克蛋白HSP70、组织蛋白酶B(CTSB)的基因表达量变化。结果表明,与对照组相比,在胁迫24 h时Mn-SOD基因表达量显著升高,CAT基因表达量在12~48 h升高,GPx基因表达量在24和48 h时升高,TRx基因表达量24 h时升高,而后在48和72 h时降低,Hsp70基因表达量在48和72 h时升高,CTSB基因表达量在48 h和72 h时升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在亚硝酸盐胁迫下,抗氧化酶相关基因、Hsp70和CTSB基因的表达量均被显著诱导进行免疫防御,4种抗氧化相关基因和Hsp70、CTSB基因对亚硝酸盐胁迫敏感度不同,在抗亚硝酸盐胁迫过程中有一定协同作用。 展开更多
关键词 亚硝酸盐 凡纳滨对虾 抗氧化基因 热休克蛋白 组织蛋白酶B 基因表达
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