磷酸化caveolin在内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ开放血肿瘤屏障中的表达水平变化

目的:检测质膜微囊结构蛋白caveolin-1和caveolin-2在低剂量内皮-单核细胞激活多肽-Ⅱ(EMAP-Ⅱ)开放血肿瘤屏障(BTB)过程中的磷酸化水平变化。方法:荷瘤Wistar大鼠被随机分成4组(每组12只):EMAP-Ⅱ0h、1h、2h和4h组。采用伊文思蓝渗透性实验评估各组BTB通透性变化情况;Western blot和免疫荧光法检测大鼠脑胶质瘤组织毛细血管上磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平变化。结果:EMAP-Ⅱ作用1h时,BTB的通透性显著增强,随后逐渐降低,4h时恢复正常;EMAP-Ⅱ作用1h时,脑胶质瘤组织毛细血管上磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平均显著增高,随后逐渐降低,4h时恢复正常。结论:EMAP-Ⅱ可能通过caveolae介导的跨细胞途径来增强BTB的通透性,其机制与磷酸化caveolin-1和caveolin-2的表达水平上调有关。

白介素-1β增加血脑肿瘤屏障通透性的作用机制

目的研究白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)对胶质瘤细胞内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、脑血管内皮细胞内质膜微囊结构蛋白caveolin-1表达和质膜微囊小凹的影响,初步探讨IL-1β开放血肿瘤屏障的可能机制。方法利用Transwell制备体外血肿瘤屏障模型。Western blot法动态监测IL-1β对胶质瘤细胞内VEGF、脑血管内皮细胞内caveolin-1蛋白表达水平的影响。透射电镜观察脑血管内皮细胞内质膜微囊小凹的数量,荧光素钠渗出实验评估IL-1β对血肿瘤屏障通透性的影响。结果成功建立了体外血肿瘤屏障模型。当IL-1β作用于体外血肿瘤屏障模型后,VEGF蛋白的表达量增加,于60min时达到峰值,至120min时恢复到初始状态。体外血肿瘤屏障通透性亦于IL-1β作用60min时最大。另外,我们的研究结果还发现,IL-1β作用于血肿瘤屏障模型60min时,脑微血管内皮细胞中质膜微囊结构蛋白caveolin-1的蛋白表达水平及质膜微囊小凹的数量达到峰值,其后减少,并于120min时恢复到未给药状态。结论 IL-1β增加了血肿瘤屏障的通透性,此作用可能与IL-1β通过VEGF/caveolin-1途径增加了质膜微囊小凹数量有关。

睡眠剥夺对缺血再灌注后心肌Caveolin-3表达与细胞凋亡的影响

目的:探究睡眠剥夺对缺血再灌注(I/R)后心肌Caveolin-3(Cav-3)表达与细胞凋亡的影响。方法:采用改良多平台水环境法建立小鼠急性睡眠剥夺模型,睡眠剥夺4 d后通过结扎小鼠冠状动脉左前降支45 min,随后再灌注120 min建立心肌I/R模型。采用苏木精-伊红染色法观察小鼠心肌病理改变,TTC染色测定I/R后小鼠心肌梗死面积,ELASA法测量血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,Western Blot法检测Cleaved caspase-3和Cav-3的表达水平。结果:与对照组比较,睡眠剥夺4 d后小鼠变得易怒、激惹,病理学观察提示睡眠剥夺后心肌组织纤维排列紊乱,进一步研究发现小鼠睡眠剥夺后血浆CK-MB含量及心肌细胞凋亡水平明显增加(TUNEL染色阳性细胞与Cleaved caspase-3水平均显著增加),而心肌Cav-3表达水平明显降低。在睡眠剥夺小鼠进一步遭受心肌I/R后,其心肌梗死面积、CK-MB含量及细胞凋亡水平进一步增加,而Cav-3表达进一步下调(P<0.05)。结论:睡眠剥夺可导致心肌更不易耐受缺血再灌注损伤,其机制可能与Cav-3表达下调及心肌细胞凋亡过度激活有关。

盐酸布桂嗪对神经病理性疼痛模型小鼠痛行为及前扣带回小窝蛋白1表达的影响

目的采用慢性坐骨神经结扎（chronicconstrictioninjury，CCI）小鼠模型，探讨盐酸布桂嗪对神经病理性疼痛模型小鼠痛行为及前扣带回（anteriorcingulatecortex，ACC）小窝蛋白1（Caveo-lin-1，Cav-1）表达的影响。方法将20～25g的成年雄性昆明小鼠64只按完全随机分组法分为4组（每组16只）：Sham＋BH（BucinnazineHydrochloride，盐酸布桂嗪）组、Sham＋NS（normalsaline，生理盐水）组、CCI＋BH组、CCI＋NS组。从CCI第4天开始腹腔注射相应药物，每天1次，连续给药3d。热辐射刺激仪检测小鼠热缩足潜伏期（thermalwithdrawallatency，TwL），电子测痛仪检测小鼠机械痛缩足阈值（mechanicalwithdrawahhreshold，MWT），免疫组化法检测前扣带回c-Fos蛋白的表达，免疫印迹法检测总Car-1蛋白（t-Car-1）、磷酸化Car．1蛋白（p-Car-1）的表达变化。结果腹腔注射盐酸布桂嗪（0．1ms／10g）能够改善神经病理性疼痛小鼠痛行为，CCI＋BH组小鼠热缩足潜伏期在CCI后第5天[（5．92~0．61）S，P〈0．05]、第6天[（7．93±0．91）S，P〈0．01]、第7天[（9．12±0．69）S，P〈0．01]与第4天[（4．92±0．41）S]相比延长；与第4天[（1．55±0．31）g]相比，机械缩足阈值在第6天[（2．54±0．41）g，P〈0．01]、第7天[（3．68±0．61）g，P〈O．01]提高。免疫组化结果显示，盐酸布桂嗪可使神经病理性疼痛小鼠前扣带回c-Fos蛋白表达降低（P〈0．01）。免疫印迹显示，与CCI＋NS（t．Cav-1：2．87＋0．15，p-Car-1：0．48±0．09）组比较，盐酸布桂嗪可使神经病理性疼痛小鼠前扣带回t-Cav-1（1．97±0．31）、p-Cav-1（0．11±0．09）表达降低（均P〈O．01）。结论盐酸布桂嗪能够缓解神经病理性疼痛模型小鼠的热痛和机械痛行为，降低神经病理性疼痛小鼠前扣带回c-Fos、t-Cav-1、p-Car-1蛋白的表达。