瘦素受体长胞内段mRNA表达增加对骨骼肌细胞葡萄糖氧化的影响

目的 研究原代骨骼肌细胞中瘦素受体长胞内段mRNA表达增加对葡萄糖氧化的影响。方法 RT－PCR扩增瘦素受体长胞内段cDNA，将扩增产物插入真核表达质粒,构建重组体。重组表达质粒经脂质体介导转染原代骨骼肌细胞，转染后48 h加瘦素和D－［U－14C］葡萄糖，收集14CO2，液体闪烁检测其放射性。另经RT－PCR半定量方法检测瘦素受体长胞内段mRNA在骨骼肌细胞的表达。结果 扩增的瘦素受体长胞内段cDNA及其重组体在限制性内切酶酶切后所得各片段大小均与理论值一致。在重组表达质粒转染组、空表达质粒转染组和非转染组，前者特异性条带和β－actin条带积分光密度比值较后两者升高（均P<0.05）；但3组细胞间葡萄糖氧化差异无显著性。结论 成功构建含有瘦素受体长胞内段cDNA的重组真核表达质粒。单纯增加瘦素受体长胞内段mRNA表达不能改善瘦素对骨骼肌细胞的葡萄糖氧化作用。