U0126对黑素瘤细胞A375侵袭的抑制作用

目的:评价U0126对人黑素瘤细胞A375侵袭的抑制作用。方法:人黑素瘤A375细胞在6孔细胞培养板中培养,加U0126处理过夜,然后通过观察A375细胞的细胞形态、细胞移动及细胞侵袭判断U0126对A375细胞的抑制。蛋白电泳试验检测U0126对黑素瘤细胞A375的ERK1/2蛋白磷酸化的影响。结果:U0126诱导A375细胞产生肌动蛋白(actin)张力丝,导致细胞形态改变;A375细胞的移动和细胞侵袭被抑制。结论:U0126可能通过抑制黑素瘤的ERK1/2蛋白的磷酸化从而抑制人黑素瘤细胞A375的侵袭。

小檗碱对喉癌细胞克隆、转移及Toll样受体4蛋白的作用

目的:研究不同浓度小檗碱对喉癌细胞克隆、转移及Toll样受体4蛋白的影响与表达。方法:将喉癌细胞分为空白对照组、5μmol/L小檗碱干预组、10μmol/L小檗碱干预组、20μmol/L小檗碱干预组。蛋白质印迹法检测Toll样受体4、Toll样受体2蛋白水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移情况;流式法检测细胞凋亡。结果:在24 h时,空白对照组的细胞克隆形成能力与5μmol/L小檗碱干预组相似(P>0.05),空白对照组的细胞克隆能力较10μmol/L小檗碱干预组、20μmol/L小檗碱干预组高(P<0.05);在48 h和72 h时,与空白对照组比较,其他加入小檗碱进行干预的3组细胞克隆形成率均有明显下降(P<0.05)。且20μmol/L小檗碱干预组的克隆形成率明显低于10μmol/L小檗碱干预组、5μmol/L小檗碱干预组(P<0.05);与空白对照组比较,5μmol/L小檗碱干预组、10 mol/L小檗碱干预组、20μmol/L小檗碱干预组细胞中Toll样受体2及Toll样受体4蛋白表达降低(P<0.05),与5μmol/L小檗碱干预组、10μmol/L小檗碱干预组比较,20μmol/L小檗碱干预组Toll样受体2及Toll样受体4蛋白下降(P<0.05);与空白对照组比较,5μmol/L小檗碱干预组、10μmol/L小檗碱干预组、L4组细胞增殖率、划痕距离降低,凋亡率升高(P<0.01);与5μmol/L小檗碱干预组、10μmol/L小檗碱干预组比较,20μmol/L小檗碱干预组细胞的增殖率、划痕距离降低,凋亡率升高(P<0.05)。结论:不同浓度小檗碱均可降低喉癌细胞克隆、增殖及迁移能力,其作用机制可能通过抑制Toll样受体2、Toll样受体4蛋白活性从而促进喉癌细胞凋亡。

干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织的表达及其对5637细胞生物学特性调节

目的研究干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织中的表达及对5 637细胞生物学的影响,为临床治疗提供依据。方法选取2015年1月至2016年1月74例膀胱癌组织、32例癌旁组织以及24例正常膀胱癌组织病理标本。采用免疫组化法检测标本中的Oct4表达;体外培养膀胱肿瘤细胞,采用MTT法检测siRNA敲除Oct4后对与细胞增殖作用的影响;采用细胞划痕及Transwell试验测定细胞迁移、侵袭能力的影响;分析干细胞关键转录因子Oct4在人膀胱癌组织中的表达及对5 637细胞生物学的影响。结果人膀胱癌组织中12例Oct4蛋白检测阴性,62例Oct4蛋白检测阳性,阳性率为83.78%,显著高于膀胱癌组织的21.87%(P<0.05);正常组织中Oct4蛋白阳性率为16.67%,三种不同细胞组织Oct4蛋白阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。膀胱癌组织Oct4蛋白表达在不同临床分期中无统计学意义(P>0.05);膀胱癌组织Oct4蛋白表达在不同病理分级、淋巴结转移中差异具有统计学意义(P<0.05);病理分级越高、淋巴结转移,Oct4蛋白表达越高;免疫组化结果显示:膀胱癌组织中Oct4蛋白表达阳性率为83.78%,膀胱癌旁组织Oct4蛋白表达阳性率为21.87%;正常组织Oct4蛋白表达阳性率为16.67%。三种不同的细胞进行划痕试验2 h后进行观察:结果显示:Oct4-siRNA转染后细胞迁移显著减弱,而其他细胞大量迁入划痕区域。结论 Oct4的表达与人膀胱癌的分级、淋巴结转移关系密切,但是不同临床分期差异不具有统计学意义;Oct4高表达在膀胱癌的发生、发生中发挥重要作用,能抑制膀胱癌细胞系Oct4基因表达,抑制肿瘤细胞增殖,细胞细胞凋亡,具有较高的临床应用价值。

硫酸酯化天麻多糖抗脑胶质瘤活性的研究

目的:研究硫酸酯化天麻多糖(sulfated gastrodia elata polysaccharides,GEPs)抗脑胶质瘤的活性。方法:将大鼠脑胶质瘤细胞(C6)实验分为空白对照组和GEPs各剂量组(0.10,0.25,0.50,1.00,1.50 mg·ml^-1),采用CCK-8法检测细胞存活率,并观察细胞形态变化;采用DAPI荧光染色法观察细胞凋亡形态;采用划痕实验检测不同浓度GEPs对细胞迁移能力的影响。结果:GEPs各剂量组作用于C6胶质瘤细胞24 h和48 h时可显著降低细胞生存率(P<0.05),并呈浓度依赖性(P<0.01)。倒置显微镜下可见,随着GEPs浓度的上升,C6细胞体积变小,细胞间隙变大,失去原有的细胞形态,并且贴壁不良,产生大量漂浮物。DAPI染色观察到C6细胞数量明显锐减,细胞核缩小,凋亡的细胞明显增多。细胞划痕实验表明,GEPs各剂量组作用于C6细胞24 h后,愈合率逐渐下降,并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:硫酸酯化天麻多糖能显著抑制神经胶质瘤细胞生长的活性,并可有效抑制神经胶质瘤细胞的迁移。

冲击波对糖尿病慢性创面微环境下HaCat细胞增殖及迁移的影响

背景体外冲击波疗法可促进糖尿病慢性创面愈合,其机制有待深入研究。目的观察不同剂量冲击波干预对糖尿病慢性创面微环境中HaCat细胞增殖和迁移能力的影响,尝试从细胞水平揭示体外冲击波疗法促进糖尿病慢性创面愈合的作用机制。方法以人表皮角质形成细胞(HaCat细胞)为研究对象,分为对照组、糖尿病慢性创面模型(chronic diabetic wound,CDW)组以及不同剂量冲击波(shock wave,SW)干预组(SW1组:0.05 mJ/mm^(2),500脉冲;SW2组:0.10 mJ/mm^(2),500脉冲;SW3组:0.10 mJ/mm^(2),1000脉冲),通过高糖低氧孵育条件建立糖尿病慢性创面细胞模型,采用倒置显微镜观察细胞形态学改变,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕试验检测细胞迁移能力,观察不同能流密度和脉冲输出的冲击波对糖尿病慢性创面微环境中HaCat细胞增殖和迁移能力的影响。结果与对照组比较,冲击波干预后HaCat细胞形态未见明显改变。CCK-8实验显示,HaCat细胞增殖活性呈现“先增加、后下降”的趋势,其OD450值:Day6>Day4>Day8>Day2>Day1,Day2及其后各时点与Day1比较差异有统计学意义(P均<0.01)。各组HaCat细胞增殖活性:SW2组>SW1组>SW3组>对照组>CDW组(以Day6为例)(P均<0.05)。倒置相差显微镜观察显示,各组HaCat细胞划痕愈合率均随时间延长逐渐增加,划痕愈合率:SW2组>SW1组>SW3组>对照组>CDW组(P均<0.05)。结论离体条件下,冲击波可促进糖尿病慢性创面微环境中功能受损的HaCat细胞的增殖和迁移能力;0.10 mJ/mm^(2)、500脉冲的冲击波干预剂量对HaCat细胞的促增殖效应更为明显。

艳山姜挥发油对TGF-β_1诱导人脐静脉内皮细胞间质转分化的保护作用

目的:研究艳山姜挥发油(EOFAZ)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)间质转分化的干预保护作用。方法:采用TGF-β_1(10μg·L^(-1),孵育48 h)诱导建立内皮-间质转化(End MT)细胞模型。实验分组为正常组,模型组(10μg·L^(-1)TGF-β_1),EOFAZ高剂量组(10μg·L^(-1)TGF-β_1+4μg·L^(-1)EOFAZ)及EOFAZ低剂量组(10μg·L^(-1)TGF-β_1+2μg·L^(-1)EOFAZ)。EOFAZ于造模前干预给药2 h,加入TGF-β_1共孵育复制End MT细胞模型。倒置显微镜下观察细胞形态,划痕实验分析细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EOFAZ对内皮细胞特异性标志物血管内皮细胞钙粘素(VE-cadherin),间充质细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),锌指转录因子(Snail)及核转录因子-κB(NF-κB)p-p65蛋白表达的影响。结果:TGF-β_1诱导孵育后,细胞形态多呈长梭形,并可见明显的细胞丝状伪足,细胞间的紧密连接减少;划痕实验结果表明模型组细胞迁移能力增强(P<0.01);VE-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.01),α-SMA,Snail,NF-κB p-p65蛋白表达量明显增多(P<0.01)。EOFAZ高、低剂量组干预给药后,能够明显抑制TGF-β_1诱导的细胞迁移能力(P<0.01),同时能增加VE-cadherin的表达,降低α-SMA,Snail及NF-κB p-p65蛋白的表达。结论:艳山姜挥发油对TGF-β_1诱导的HUVECs间质转分化具有干预保护作用,其机制与抑制NF-κB p65的磷酸化激活有关。

上调miRNA-100对胃癌SGC-7901细胞侵袭和转移的影响

目的探讨微小核糖核酸(miRNA)-100对人胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移能力的影响。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为空白对照组、阴性对照组和miRNA-100转染组。应用脂质体法,miRNA-100转染组、阴性对照组分别用构建的miRNA模拟物、阴性对照转染SGC-7901细胞。采用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)法检测各组细胞中miRNA-100的表达水平,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Tranwell实验检测细胞的侵袭能力。结果 RT-PCR结果显示,miRNA-100转染组miRNA-100的表达量明显高于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05)。细胞划痕实验显示,与空白对照组及阴性对照组比较,24 h和48 h时miRNA-100组周边细胞迁移至中央划痕区的距离明显增大,差异有统计学意义(P均<0.01)。Transwell实验显示,与空白对照组和阴性对照组相比,转染miRNA-100后,穿越小室的SGC-7901细胞数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论转染miRNA-100可使SGC-7901细胞的迁移能力明显降低、细胞的侵袭能力被抑制,上调miRNA-100能抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭、转移能力。

派特灵对Ect1/E6E7细胞增殖迁移能力及Wnt/β-catenin通路的影响

目的:研究派特灵对Ect1/E6E7细胞增殖迁移能力及Wnt/β-catenin通路的影响。方法:以含10%胎牛血清的DMEM培养基培养细胞,将细胞分为对照组和派特灵组(3.906、2.604、1.953、1.563、1.302、1.116、0.977g/L),加药干预24h,镜下观察细胞形态变化,并采用MTT法检测细胞活力,计算派特灵对Ect1/E6E7细胞的半数抑制浓度(IC50);将Ect1/E6E7细胞分为对照组,顺铂组(0.01g/L),抑制剂组,派特灵高、中、低浓度组(2.974、1.487、0.991g/L),分别用CCK-8、划痕、Transwell方法检测派特灵对Ect1/E6E7细胞增殖迁移能力的影响;以及用免疫组化、Western Blotting方法检测各组细胞Wnt4、β-catenin蛋白的表达。结果:对照组细胞呈扁平多边形,顺铂组、派特灵各浓度组细胞皱缩、体积变小、数量减少,以派特灵高浓度组最明显;MTT实验显示,派特灵对Ect1/E6E7细胞增殖有明显抑制作用,IC50为2.974g/L;CCK-8法结果示顺铂组和派特灵高浓度组对Ect1/E6E7细胞增殖有较强抑制作用;划痕实验示派特灵高浓度组、顺铂组药物干预12h后,划痕面积均显著高于对照组(P<0.01,P<0.05),派特灵高浓度组划痕面积高于派特灵低浓度组(P<0.05);药物干预24h后,派特灵高浓度组、顺铂组划痕面积显著高于对照组和派特灵中、低浓度组(P<0.01);Transwell迁移实验示顺铂组、派特灵各浓度组细胞迁移数量显著低于对照组(P<0.01),顺铂组、派特灵高浓度组细胞迁移数量显著低于派特灵中、低浓度组(P<0.01);Western Blotting实验结果显示,与抑制剂XAV939组比较,对照组、顺铂组、派特灵各浓度组Wnt4蛋白表达量显著升高(P<0.01);派特灵高、中浓度组Wnt4蛋白表达量比派特灵低浓度组显著降低(P<0.01);Western Blotting、免疫组化实验结果显示与对照组比较,顺铂组、抑制剂组、派特灵各浓度组β-catenin蛋白表达量显著减少(P<0.01);与抑制剂XAV939组比较,顺铂组、派特灵各浓度组β-catenin蛋白表达量显著增加(P<0.01)。结论:派特灵可抑制Ect1/E6E7细胞增殖迁移能力且呈一定量效关系,可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

DLC-3表达对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的探讨外源性过表达DLC-3对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及凋亡活动的影响。方法对数生长期乳腺癌MCF-7细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组细胞转染DLC-3基因过表达质粒,阴性对照组细胞转染空白质粒,空白对照组细胞仅进行换液处理。3组采用实时PCR法检测细胞DLC-3mRNA相对表达量;转染12、24h后,采用细胞划痕实验检测细胞划痕愈合率;转染48h后,采用CCK-8实验检测细胞增殖率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果实验组DLC-3mRNA相对表达量(17563.57±2880.85)高于空白对照组(0.56±0.43)和阴性对照组(1.00±0.00)(P<0.05),空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染48h后,实验组细胞增殖率[(31.47±5.57)%]低于阴性对照组[(36.27±3.71)%]和空白对照组[(37.90±5.70)%],但差异无统计学意义(P>0.05);转染12、24h后,实验组划痕愈合率[(32.769±4.349)%、(38.237±4.286)%]低于空白对照组[(37.506±1.836)%、(49.052±4.090)%](P<0.05),阴性对照组[(35.659±3.970)%、(48.724±5.092)%]与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染48h后,实验组细胞凋亡率[(15.893±1.597)%]高于阴性对照组[(10.277±1.947)%]和空白对照组[(11.973±1.564)%](P<0.05),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论提高MCF-7细胞中DLC-3表达可降低细胞增殖水平,抑制其迁移能力,并促进细胞凋亡。

小窝蛋白-1与食管癌细胞迁移之间的关系

目的探讨小窝蛋白(Cav)-1在食管癌细胞迁移中的作用,并探讨两者之间的关系。方法体外培养人食管癌TE13细胞株,采用Cav-1小干扰RNA(siRNA)转染TE13细胞(转染组),以未转染细胞为对照(NC)组。采用蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测细胞的Cav-1表达水平,采用划痕实验观察细胞迁移情况,探讨Cav-1和食管癌细胞迁移的关系。结果 Western blot实验结果显示,食管癌TE13细胞高表达Cav-1,转染siRNA后细胞Cav-1表达水平较转染前明显下降,转染组和未转染组细胞的灰度值分别为(1.98±0.34)和(3.15±6.10),两者比较差异有统计学意义(t=4.26,P<0.05)。划痕试验结果显示,未转染组在划痕后24 h痕间距明显缩窄,部分痕区域细胞密集;而转染组细胞在划痕后24 h痕间距未见明显缩窄。表明转染后细胞的迁移能力较转染前明显下降。结论 Cav-1在食管癌的发生、发展过程中扮演着促癌基因的角色,抑制Cav-1表达可能抑制食管癌的进展。

微通道中细胞划痕尺寸的定量控制

细胞划痕尺寸的定量控制是探究细胞迁移过程的先决条件。该文基于微流控技术,设计了一种利用胰蛋白酶消化法制造细胞划痕的微流控芯片,提出了基于流量控制定量调控细胞划痕尺寸的方法,并通过数值仿真、荧光素可视化实验以及细胞实验对该方法进行了分析和验证。荧光粉实验与数值仿真结果表明,荧光粉溶液宽度,等效于划痕宽度,与荧光粉溶液流量比成正比例线性关系。在总流量一定情况下(Q0=100μl/min),增加荧光粉溶液流量(Q2=50μl/min)可减小分子横向扩散的影响,维持主通道内划痕宽度的一致性。内皮细胞划痕实验结果有效证明了基于流量控制胰蛋白酶消化产生细胞划痕方法的可行性,且与数值仿真和荧光粉可视化实验结果吻合良好。该文设计的微流控芯片及细胞划痕尺寸定量控制方法为研究细胞迁移和开展内皮细胞划痕愈合实验提供了有效的实验平台。