体外培养的SD大鼠类成牙骨质细胞生物学性状初步探讨

目的 :对SD大鼠磨牙牙骨质的类成牙骨质细胞分泌碱性磷酸酶、骨钙素以及形成矿化结节的能力进行初步研究。方法 :对 12周龄SD大鼠第一磨牙类成牙骨质细胞进行骨钙素免疫组化染色和碱性磷酸酶活力测定 ,并利用茜素红S ,检测在条件培养基下细胞形成钙化结节的情况 ;利用计算机图像分析仪对细胞骨钙素免疫组化染色切片进行光密度定量分析。结果 :骨钙素在体外培养的类成牙骨质细胞中被强烈表达 ,而碱性磷酸酶在类成牙骨质细胞中几乎无活性。类成牙骨质细胞形成钙化结节茜素红S染色阳性。结论 :体外培养的类成牙骨质细胞表达矿化相关蛋白 ,但几乎没有碱性磷酸酶活性 ;钙化条件下 ,能在体外形成钙化结节。

SD大鼠类成牙骨质细胞体外培养的实验研究

目的:探讨体外培养源于SD大鼠磨牙牙骨质的类成牙骨质细胞的可行性。方法:仔细取得12周龄SD大鼠第一磨牙,使用组织块结合酶消化的二步法体外培养源于牙骨质的类成牙骨质细胞,进行形态观察,测定其生长曲线、贴壁率,并以牙周韧带成纤维细胞为对照进行骨钙素免疫组化染色测定。结果:SD大鼠的类成牙骨质细胞约在第14～18天从根面长出;生长曲线呈“S”形;接种后12小时约有94%的细胞贴壁。骨钙素在体外培养的类成牙骨质细胞中被强烈表达,在成纤维细胞中几乎不表达。结论:SD大鼠的类成牙骨质细胞可以在体外成功培养。

缺氧对成牙骨质细胞增殖、凋亡及缺氧相关基因的影响

目的探讨不同时间缺氧微环境对成牙骨质样细胞OCCM-30增殖、凋亡及缺氧相关基因的影响,了解缺氧在正畸导致的牙骨质吸收中所起的作用。方法利用三气培养箱构建细胞缺氧模型,以常氧条件培养为对照组,利用MTT法测定细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA等相关基因的表达变化。结果缺氧可以抑制OCCM-30细胞的增殖,明显提高细胞的凋亡率,并能显著诱导HIF-1α和VEGF mRNA基因的表达,HIF-1αmRNA的表达水平在24 h达到顶峰后进入平台期;而VEGF mRNA的表达水平在36 h后开始逐步上调。结论缺氧微环境能抑制OCCM-30细胞增殖,促进调亡及缺氧相关基因的表达。

成牙骨质细胞在缺氧条件下破骨功能调节的相关研究

目的探讨成牙骨质样细胞OCCM-30在不同时间缺氧微环境下破骨功能的调节变化。方法利用三气培养箱构建细胞缺氧模型,以常氧条件培养为对照组,应用RT-PCR检测缺氧后OCCM-30细胞骨桥蛋白(OPN)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的变化。结果 OPN mRNA的表达随缺氧时间逐步上调,36h达到顶峰后进入平台期。OPG mRNA的表达,随着缺氧的开始快速上调,在12h达到顶峰后进入平台期,在36h后逐步下降;RANKL mRNA的诱导表达呈现先上升后下降的趋势。结论缺氧微环境能显著诱导OCCM-30细胞表达破骨调节功能。