鸡卵黄免疫球蛋白的mPEG修饰及其稳定性研究

研究了单甲氧基聚乙二醇(mPEG)对鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的化学修饰,并通过傅里叶变换红外光谱、圆二色光谱和荧光光谱分析比较了修饰前后IgY的稳定性。首先用N-羟基琥珀酰亚胺活化的单甲氧基聚乙二醇(NHS-mPEG)对IgY进行化学修饰,确定了mPEG的最佳修饰条件,即IgY与mPEG摩尔比为1∶10、pH值为7、反应时间为1h,所得产物mPEG-IgY修饰率为20.56%,活性保持率为87.62%。其次通过光谱分析法对IgY以及mPEG-IgY的热稳定性和酸碱稳定性进行了研究。结果表明,70℃温育120min后,IgY的α-Helix,β-sheet,β-Turn,Random各二级结构含量由14.5%,42.1%,6.2%,37.2%变为1.6%,55.25%,5.8%,37.5%;mPEG-IgY的各二级结构含量由12.9%,42.7%,6.3%,38.1%变为3.1%,50.5%,7.2%,39.2%。同样酸碱处理后,mPEG-IgY比修饰前IgY所引起的二级结构变化更小。因此可以推断出IgY经过mPEG修饰后对温度、酸碱处理所引起的变性有着更强的稳定性。

牛珀至宝丹合鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的实验研究

为研究牛珀至宝丹 (主药 :水牛角、羚羊角、郁金、琥珀等 )合鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的作用与机理 ,6 0只SD大鼠均分为 6组 :空白对照组 (A)、模型组 (B)、普通鸡卵黄对照组 (C)、鸡卵黄免疫球蛋白组 (D)、牛珀至宝丹组 (E)、牛珀至宝丹合鸡卵黄免疫球蛋白 (F)。除A组外 ,其余 5组大鼠均以粗制大肠杆菌内毒素制成内毒素休克 ,并应用相应药物 (B组以生理盐水代替 )。观察各组大鼠的血压与淋巴细胞亚群的变化。结果 :除A组外 ,其余 5组大鼠的血压均明显下降 ,但三个用药组下降的程度低于其他组。T细胞亚群中 ,CD3 各组间无明显差异 ;B、C组的CD4、CD8低于A组 ,而三个用药组均高于B组 ,并与A组接近 ;E、F组的CD4/CD8比值高于B组 ,并与A组接近。提示 ,调整淋巴细胞亚群含量和比值 ,可能是牛珀至宝丹、鸡卵黄免疫球蛋白抗内毒素休克的作用机理之一 。

抗HLA-A~*0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定

目的制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(Yolk immunoglobulin,IgY)抗体。方法用纯化HLA-A*0201重链抗原加完全福氏佐剂免疫岭南黄鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定。结果获得ELISA效价为1×106的抗重链IgY抗体,蛋白含量为9.77 mg/ml。经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达90%以上。结论用重链抗原加福氏佐剂免疫种鸡制备的IgY抗体产量多、效价高,为结合HLA-A*0201复合体诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞活化奠定了基础。

IgY抗体用于弓形虫感染小鼠病原学检测的研究

[目的 ]将抗弓形虫鸡卵黄抗体 (Ig Y)应用于免疫酶染色 ,探索弓形虫感染的病原学诊断途径。 [方法 ]取急性感染弓形虫小鼠的肝、脾和肾组织切片 ,用 Ig Y作为第 1抗体 ,间接酶免疫染色 ,检查细胞内弓形虫速殖子。 [结果 ]在细胞内可见呈弧形、半月形紫红色半透明的弓形虫速殖子 ,虫体完整 ,一般 1～ 4个虫体 /细胞 ,以 2～ 3个多见。 [结论 ]Ig Y抗体的间接酶免疫染色试验用于诊断急性感染弓形虫的小鼠 。

抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白IgY的制备及生物活性的研究

目的:从免疫了幽门螺杆菌(Hp)抗原的母鸡蛋黄中提取抗Hp-IgY。方法:用超声破碎的Hp抗原免疫21周龄罗曼产蛋母鸡,取免疫后所产鸡蛋卵黄,利用水稀释法加硫酸铵盐析方法,提纯IgY,ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测抗体蛋白含量,SDS-PAGE法检测其相对分子质量及纯度。结果:母鸡初次免疫后第7天,抗体效价即渐渐升高,约第45天达到高峰;蛋黄抗体经纯化后,抗Hp-IgY蛋白纯度可达90%以上,含量为6.25 g/L。结论:用超声破碎的Hp抗原免疫母鸡,盐析法提纯免疫母鸡产蛋黄中的抗Hp-IgY,可获得高纯度及高效价的抗Hp的特异性蛋黄抗体。

鸡PLA2基因的克隆与原核表达及PLA2蛋白卵黄抗体的制备

【目的】克隆并原核表达鸡PLA2基因,小量制备鸡PLA2卵黄抗体,为大规模制备PLA2卵黄抗体作为饲料添加剂提供参考。【方法】提取鸡胰脏总RNA,利用RT-PCR方法获得鸡PLA2基因,将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,构建表达载体pGEX-4T-1-PLA2,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-PLA2融合蛋白。将GST-PLA2融合蛋白免疫青年蛋鸡,每次0.3mg/只,共免疫4次,收集鸡蛋,提取卵黄抗体,采用West-ern Blotting检测抗体的特异性。【结果】成功克隆出了鸡PLA2基因,构建了pGEX-4T-1-PLA2原核表达载体,并诱导表达了分子质量为44.59ku的GST-PLA2融合蛋白。GST-PLA2融合蛋白免疫蛋鸡后获得了卵黄抗体,经West-ern Blotting检查,制备的卵黄抗体具有很好的特异性。【结论】构建了表达鸡PLA2基因的表达系统,并成功的制备了抗鸡PLA2的卵黄抗体。

家禽卵黄抗体作用机理及应用现状分析

卵黄抗体(IgY)来源廉价、特异性好、见效快,其作为一种理想的绿色饲料(食品)添加剂的应用正倍受关注。本文就其作用机理、产业化研究与应用现状、存在的问题进行了综述,并提出了建议,以加速其在畜牧养殖业和食品添加剂行业的推广应用。

两种鸡蛋黄IgG提取方法的对比研究

从免疫鸡的蛋黄中提取特异性IgG抗体,是一条简便而廉价的制备诊断用抗体制品的途径。作者建立并比较了两种鸡蛋黄IgG提取方法。结果显示,两法均可从每毫升超免疫鸡的蛋黄中提取到16～17mg IgG制品,而且法Ⅱ提取之蛋黄IgG制品的纯度和抗体活性比法Ⅰ高。由于法Ⅰ和法Ⅱ提取的蛋黄IgG制品分别含有22％和16％的无关蛋白质,因此,如需高纯度蛋黄IgG制品,还须对其进一步纯化。

鸡卵黄免疫球蛋白的糖基化及其构效关系研究进展

鸡卵黄免疫球蛋白(egg yolk immunoglobulin,IgY)是鸡卵黄中的一种免疫球蛋白。由于其具有原料易得、制备简单、不与类风湿因子以及哺乳动物的补体发生交叉反应等优点,IgY是一种颇具潜力的抗生素替代品,但由于IgY性质不稳定,易受温度、pH值、酶的影响,从而限制了其实际应用。糖链在维持IgY理化性质、抗原特性等功能中扮演着重要角色。因此,对IgY进行糖基化修饰,从而改善其理化性质和抗原特性,不仅能使鸡蛋资源得到充分利用,也为开发蛋黄保健食品、添加剂以及相应的医药产品提供科学依据。本文归纳几种常见的IgY的糖基化方法,并论述IgY糖基化与其结构、理化性质之间的关系。

抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白耐酸碱性的研究

在pH2～12不同酸碱度环境中37℃保温0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h后对抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的中和效价、分子结构变化及其耐酸耐碱性进行了测定。结果显示,在pH2～9范围内,37℃保温至4h,抗轮状病毒IgY的中和效价无明显变化,SDS-PAGE非还原性电泳图中未出现降解带;pH≥10时,37℃保温至1h,中和抗体效价即开始下降,电泳图中出现降解带,pH达11、12时处理1h以上样品则全部降解,生物活性丢失。提示抗轮状病毒IgY的耐酸性较耐碱性强,能耐受正常人体消化道内酸碱度。为制备成口服制剂提供试验依据。

鸡卵黄抗体研究进展

当用某种抗原免疫产蛋母鸡时,可产生相应的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)储存于卵黄中。母鸡经免疫应答后,可从其不断产出的鸡卵黄中得到大量的、均一的、高效的IgY。IgY类似哺乳动物的IgG,但又有其独特的优点。本文对IgY的性质、免疫程序、分离提纯方法及其在检测诊断上和疾病防治方面的应用作了较详细的论述。可以预见,随着研究的进一步深入,IgY的应用将不断扩大。