鹰嘴豆种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与鉴定

为了寻找具有药物作用的天然胰蛋白酶抑制物,采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析(DEAE-纤维素52)及Sephadex G-100凝胶层析等方法,从鹰嘴豆种子中分离出一种鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂(CPTI).研究表明:CPTI对胰蛋白酶有较强的抑制作用,抑制率达80%,而对胰凝乳蛋白酶抑制作用较弱,抑制率为32%,对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶均无抑制作用;用SDS-PAGE测得CPTI近似分子质量为25.7 kD;CPTI具有较高的热稳定性,在100℃下加热60min,对胰蛋白酶活性仍保持78%抑制率;Lineveaer-Burk作图得知该抑制剂属竞争性抑制类型.动力学测定显示,来自鹰嘴豆中的CPTI对胰蛋白酶的抑制作用常数(Ki)为3.99×10-7 mol/L.

竹笋胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其性质

为寻找天然胰蛋白酶抑制剂,经过葡聚糖凝胶G25、G50柱、二乙二胺乙基纤维素-葡聚糖凝胶A50分离纯化从竹笋中获得了竹笋胰蛋白酶抑制剂(BSTI),纯化后浓度比粗提物提高了1 200倍,SDS-PAGE显示纯化胰蛋白酶抑制剂为单一条带。其性质研究表明:经100℃热变性15 min后,BSTI仍保持50%的抑制活性,表明BSTI有较强的热稳定性;BSTI的等电点为4.4左右;BSTI在CoCl_2溶液中还有94.7%的活性,但是在FeSO_4溶液中活性却完全被压制;BSTI在氧化剂中活性不高;几种还原剂对其活性有一定的抑制,但是维生素C不仅不会抑制其活性反而能够提高它的活力;螯合剂KCN能大幅提高BSTI的活性,EDTA和喔星会抑制其活性。