不同修饰对壳聚糖转基因效果的影响

目的:探讨不同修饰的壳聚糖包裹的质粒(Chi-DNA)纳米复合物在口服发送中外源基因在消化道中的表达差异。方法:分别使用明胶、海藻酸钠、PEG及乙酰化修饰包裹含LacZ的质粒pCMVβ的壳聚糖纳米颗粒,通过口服发送后经X-gal染色检测目的基因在小鼠体内的表达。结果:修饰后的Chi-DNA纳米复合物都能抵抗胃酸的降解0.5h以上,其中PEG及乙酰化修饰的Chi-DNA纳米复合物在胃酸处理1h时仍有部分残留。X-gal染色显示,修饰后的Chi-DNA纳米复合物都有β半乳糖苷酶的表达,其中PEG、海藻酸钠修饰的Chi-DNA纳米复合物在鼠胃和小肠中表达量最高。结论:PEG、海藻酸钠修饰的Chi-DNA纳米复合物有望成为高效的基因治疗用非病毒口服发送系统。

聚乙二醇修饰的壳聚糖包裹DNA的转染效果研究

目的:为探讨聚乙二醇(PEG,MW4000)修饰的壳聚糖用于包裹质粒DNA(Chi-DNA)是否能有效提高口服发送的外源基因在消化道中的表达量。方法:用PEG修饰的壳聚糖包裹不同剂量(10μg,50μg,100μg)的质粒(pCMVβ),形成壳聚糖纳米复合物,通过口服发送后经X-gal染色法检测pCMVβ在小鼠消化道内的表达效果。结果:胃酸消化实验及DNaseⅠ消化实验均表明经PEG修饰的壳聚糖纳米粒能有效地保护DNA,使其免受胃酸及DnaseⅠ的降解。同时在小鼠消化道内的表达量较修饰前明显增加,随着所发送DNA剂量的增加,表达量也相应增加,且包裹10μg质粒的DNA纳米复合物的表达量相当于100μg未修饰复合物的表达水平。结论:经PEG修饰的Chi-DNA纳米复合物有较高的基因转染效果,有望作为基因治疗中高效非病毒口服发送系统的材料。