蟾毒灵抑制胆总管癌细胞QBC-939增殖和诱导凋亡的实验研究

目的观察蟾毒灵对人胆管癌细胞QBC-939增殖和凋亡的影响,以及凋亡相关蛋白表达量的变化。方法体外培养人胆管癌QBC-939细胞,运用MTT检测蟾毒灵对胆管癌细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测蟾毒灵对胆管癌细胞凋亡率和线粒体膜电位的影响;并采用Western blotting检测凋亡相关蛋白Caspase3、激活型的Caspase3(Cleaved-Caspase3)和Cleaved-PARP的表达量变化。结果蟾毒灵对人胆管癌细胞QBC-939增殖具有明显抑制作用,在一定浓度下表现出时间、剂量依赖性。流式细胞仪检测显示:细胞的凋亡率明显增加;线粒体膜电位随蟾毒灵浓度增加,膜电位发生下调。Western blotting结果显示:蟾毒灵处理QBC-939细胞48h后,Caspase3蛋白被剪接活化,激活型的Caspase3(Cleaved-Caspase3)表达量升高;同时,Caspase3的作用底物多聚聚合酶PARP的降解产物(Cleaved-PARP)表达明显升高,且呈浓度依赖性。结论蟾毒灵能够明显抑制人胆管癌QBC-939细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性;线粒体凋亡途径在蟾毒灵的抗癌过程中发挥了作用。

Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制研究

目的探讨Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制。方法通过Western Blot技术检测PP2对人胆管癌QBC939细胞中Src激酶活化的影响;用Transwell小室法观察PP2对QBC939细胞的影响;用RT-PCR和Western Blot技术检测PP2对QBC939细胞侵袭能力相关分子的作用。结果 PP2组中p-Src蛋白的表达水平明显低于对照组;PP2组QBC939细胞的体外侵袭能力较对照组显著降低;与对照组相比,PP2组E-cadherin的表达显著增强,CD44的表达则明显减弱。结论 PP2能通过抑制Src激酶的活化,增强QBC939细胞侵袭抑制分子E-cadherin、减弱促侵袭分子CD44的表达,进而抑制人胆管癌QBC939细胞的侵袭能力。

LPS对5-FU杀伤QBC939细胞影响的实验研究

目的探讨LPS联合化疗药物5-FU对人胆管癌QBC939细胞生长和诱导细胞凋亡的影响。方法四甲基唾哇蓝(MTT)试验检测LPS对5-FU抑制QBC939细胞增殖的影响,流式细胞术观察LPS对5-FU诱导QBC939细胞凋亡的影响。结果 1MTT法检测显示5-FU对胆管癌细胞株QBC939杀伤作用明显,但易出现耐药性,LPS可以增强5-FU后期杀伤作用,能一定程度上防止耐药的出现;2流式细胞术结果显示化疗药物5-FU后能显著诱导QBC939细胞发生凋亡,凋亡指数为11.50±2.15(P<0.05),对照组为3.53±0.32,加用LPS后,能更明显地诱导凋亡,凋亡指数达到26.50±3.12,与单用加化疗药物5-FU比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS能增强5-FU对胆管癌细胞株QBC939的后期杀伤作用,LPS联合化疗药物可能是胆管癌临床治疗的一种合理策略。

十字孢碱对人胆管癌QBC-939细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制药十字孢碱(STS)对人胆管癌QBC-939细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测STS对QBC-939细胞增殖的影响;透射电子显微镜观察STS对QBC-939细胞超微结构的影响;流式细胞术检测STS对QBC-939细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白质印迹法检测STS对QBC-939细胞周期蛋白cyclin B1、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cdk1)和磷酸化周期蛋白依赖性激酶(p-Cdk1)表达的影响。结果 STS能显著抑制QBC-939细胞的增殖(P<0.05),抑制作用呈浓度依赖性,对QBC-939细胞的半数抑制浓度(IC50)24 h为334 nmol·L-1,48 h为118 nmol·L-1。透射电镜观察发现,STS能诱导QBC-939细胞出现典型的凋亡小体。Annexin V-FITC/PI双标法检测0,12,24和48 h凋亡率分别为(10.16±4.52)%,(22.35±2.19)%,(34.27±2.30)%和(59.70±5.97)%。流式细胞术检测发现,与对照组相比,STS可显著诱导QBC-939细胞凋亡率增加(P<0.05),并引起G0/G1期细胞比例减少,而G2/M期细胞比例增加(P<0.05)。蛋白质印迹法检测发现,经STS处理后的QBC-939细胞cyclin B1和Cdk1蛋白表达明显降低(P<0.05),而p-Cdk1蛋白表达则明显增加(P<0.05)。结论 STS可显著抑制人胆管癌QBC-939细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制QBC-939细胞生长并促进细胞凋亡。

阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939增殖的影响

目的:研究阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939生长增殖的影响。方法:常规培养QBC939细胞,采用PDTC(100μmol/L)阻断NF-κB信号通路,Western blot检测核内P65蛋白水平的表达,CCK-8检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞仪观察细胞周期与凋亡的变化情况。结果:经PDTC阻断NF-κB信号通路后,与对照组相比,细胞核内P65蛋白水平明显下降(P<0.05)。CCK-8检测显示细胞增殖活性明显受到抑制,并随时间的延长而愈渐明显,12、24、36h后细胞增殖抑制率分别为(22.53±0.03)%、(46.54±0.03)%、(58.02±0.03)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现实验组G0/G1期细胞比例高于对照组,分别为(68.53±1.72)%、(38.3±1.35)%,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率在实验组为(27.68±2.77)%,对照组仅为(9.27±2.36)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:阻断NF-κB信号通路诱导人肝门部胆管癌细胞G_0/G_1期阻滞及细胞凋亡,从而抑制细胞生长与增殖,提示NF-κB信号通路组成性激活参与人肝门部胆管癌的发生发展,以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给人肝门部胆管癌带来新的治疗选择。

冬凌草甲素对胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响

目的探讨冬凌草甲素对胆管癌细胞系QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响。方法采用不同浓度冬凌草甲素(0、10、20、40、80、100μmol/L)处理QBC939细胞24、48、72 h,MTT法测定QBC939细胞活力并计算增殖抑制率;不同浓度冬凌草甲素(0、20、40、80μmol/L)处理QBC939细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western Blot法检测QBC939细胞B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,端粒酶重复序列扩增法检测QBC939细胞的端粒酶活性。结果 QBC939细胞增殖抑制率随冬凌草甲素的药物浓度升高、作用时间延长而升高;与0μmol/L冬凌草甲素组相比,其他浓度冬凌草甲素组的S期细胞比例降低;0、20、40、80μmol/L冬凌草甲素组QBC939细胞的凋亡率分别为0.5%、14.8%、25.8%及37.7%;Western Blot结果显示随着药物浓度的升高,QBC939细胞的Bax表达量逐渐升高,Bcl-2表达量逐渐降低;其他浓度冬凌草甲素组QBC939的端粒酶活性均低于0μmol/L冬凌草甲素组,且QBC939细胞的端粒酶活性随冬凌草甲素浓度的升高而降低(P<0.05)。结论冬凌草甲素可抑制QBC939细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Bcl-2表达以降低端粒酶活性有关。

AMD3100对胆管癌CXCR4基因、蛋白表达及QBC939细胞增殖能力的影响

目的:探讨CXCR4基因在胆管癌组织标本及人胆管癌细胞株QBC939中的表达情况,分析AMD3100应用对CXCR4基因表达及QBC939细胞的生物学行为变化。方法:收集人胆管癌组织标本,培养人胆管癌细胞株QBC939,加入不同浓度的AMD3100抑制剂。采用RT-PCR和Western blot方法,分别检测人胆管癌标本及转染AMD3100抑制剂前后QBC939胆管癌细胞株中CXCR4基因和蛋白的表达。应用CCK-8试剂盒对转染后细胞增殖活性进行检测。通过克隆形成实验观察AMD3100对细胞克隆形成的抑制。结果:CXCR4基因及其蛋白在胆管癌组织标本及人胆管癌细胞株QBC939中均高度表达。不同浓度AMD3100抑制剂对QBC939胆管癌细胞株的增殖抑制活性取决于AMD3100抑制剂的孵育浓度、孵育时间。其中,转染不同浓度抑制剂24 h,并未对细胞增殖造成影响;转染48 h后,0.1μg·ml^(-1)AMD3100无明显影响,1μg·ml^(-1)、5μg·ml^(-1)的AMD3100抑制剂明显抑制了细胞的增殖;转染72 h后,各浓度均对细胞增殖有明显抑制作用。克隆形成实验分析显示,抑制CXCR4基因表达明显延长了克隆体形成时间,使克隆体体积和数目减少。结论:AMD3100抑制剂影响人胆管癌细胞株QBC939的增殖能力,抑制CXCR4基因和蛋白的表达。

蛇床子素对胆管癌QBC939细胞的诱导凋亡研究

目的研究蛇床子素对胆管癌细胞的影响及其作用机制特点。方法采用MTT方法、Giemsa染色、Hoechst33258荧光染色、AO/EB荧光染色、流式细胞术和Western blot方法研究蛇床子素对胆管癌QBC939细胞增殖、形态变化,凋亡率、周期分布和凋亡相关蛋白表达变化的影响。结果蛇床子素对人胆管癌细胞QBC939的增殖有明显的抑制效果,且呈现剂量和时间依赖性,处理24 h和48 h的IC_(50)分别为0.169 63mmol/L和0.100 19 mmol/L;蛇床子素可诱导人胆管癌细胞QBC939的凋亡,0.15 mmol/L蛇床子素作用48 h后QBC939细胞凋亡率达到37.15%,并出现细胞凋亡的特征性形态变化,周期进程阻滞在G2/M期;蛇床子素可改变依赖于Caspase的凋亡途径中相关的蛋白Fas和Caspase-3的表达水平。结论蛇床子素具有良好的抗癌效果,依赖于Caspase的外源信号凋亡途径可能其凋亡机制之一。

circAGFG1靶向miR-4429对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其可能的机制

目的:探讨circAGFG1对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:收集2017年4月至2019年10月于联勤保障部队第九八八医院接受手术的33例胆管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,qPCR法检测组织中circAGFG1和miR-4429表达水平。体外培养胆管癌QBC939细胞,分别转染si-circAGFG1、miR-4429 mimic、共转染si-circAGFG1与anti-miR-4429后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell法分别检测对细胞迁移和侵袭的影响,WB法检测对细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-4429之间的靶向调控关系。结果:胆管癌组织中circAGFG1的表达量高于癌旁组织(3.89±0.26 vs 1.00±0.08,P<0.05),而miR-4429的表达量低于癌旁组织(0.28±0.03 vs 1.00±0.05,P<0.05)。干扰circAGFG1或过表达miR-4429后,QBC939细胞增殖水平、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数及细胞中N-cadherin蛋白表达均显著降低(均P<0.05),而E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circAGFG1可靶向结合miR-4429,且干扰circAGFG1会促进QBC939细胞中miR-4429表达(均P<0.05)。下调miR-4429表达能够逆转干扰circAGFG1对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响(均P<0.05)。结论:circAGFG1在胆管癌组织中表达升高,其可能通过靶向抑制miR-4429促进胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭。

人肝门部胆管癌细胞QBC939中Vimentin基因的siRNA构建研究

目的 构建可抑制Vimentin基因表达的siRNA并转染进入人肝门部胆管癌QBC939细胞株,初步鉴定siRNA的干扰效果。方法 设计并合成Vimentin(NM-003380)基因的可作用于不同位点的3种siRNA及一组siRNA阴性对照序列,使用脂质体法将3种不同的siRNA序列及阴性对照序列瞬时转染进入人肝门部胆管癌QBC939细胞,分别命名为T1组(siVIM-1)、T2组(siVIM-2)、T3组(siVIM-3)及NC组(siCtrl),使用RT-PCR、Q-PCR技术测定实验中各组细胞Vimentin在mRNA水平上的表达情况。结果 T1、T2及T3组Vimentin在基因表达水平上均较NC组受到抑制,T2组的抑制效果较T1及T3组更明显,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 成功建立并筛选出人肝门部胆管癌细胞QBC939细胞Vimentin基因的siRNA。为后续进一步研究Vimentin的生物学特性及在肝门部胆管癌QBC939细胞中的作用奠定了基础。

反义RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株基质金属蛋白酶-9的抑制作用

目的 探讨反义RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株的金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 通过质粒转染的方法向QBC939细胞中转染反义RhoC cDNA真核表达载体pcDNA 3.1Hyp(+)质粒,RT-PCR和Western-Blot检测MMP-9在QBC939细胞、转染空载体的QBC939细胞(QBC939-V)、转染反义RhoC的QBC939细胞(QBC939-AS)的mRNA和蛋白相对表达量.结果 对照组细胞QBC939中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.265±0.059)和(0.242±0.063),QBC939-V细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.257±0.039)和(0.303±0.031),而反义RhoC cDNA质粒转染组细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值分别为(0.125±0.062)和(0.095±0.043);对照组中MMP-9 mRNA和蛋白的平均光密度值均高于反义RhoC转染组,统计学分析表明在QBC939-AS组和对照组之间,MMP-9的平均光密度值差异有统计学意义(P<0.05).结论 反义RhoC基因在QBC939细胞株中可以抑制MMP-9表达.

平消胶囊对胆管癌细胞生长及CD44v6蛋白表达的影响

目的通过观察平消胶囊(郁金、马钱子粉、仙鹤草、五灵脂、白矾、硝石、干漆、枳壳)血清作用于人肝外胆管癌细胞QBC939后,对癌细胞的生长和转移的影响,探讨其抗癌及转移机制。方法将平消胶囊灌喂大鼠,制备含药血清,血清培养胆管癌细胞,MTT法检测不同剂量含药血清对人胆管癌细胞QBC939的生长抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期、细胞膜上黏附分子CD44v6表达的变化。结果平消胶囊血清能明显抑制人肝外胆管癌细胞QBC939的增殖,具有时间、剂量依赖关系。药物作用后,QBC939细胞生长受阻于G0/G1期,并且黏附分子CD44v6在细胞膜上表达下调,剂量越大,CD44v6下调越明显。结论平消胶囊能有效地抑制QBC939细胞增殖,通过影响细胞生长、诱导细胞膜上黏附分子CD44v6表达下调,导致细胞凋亡,防止癌细胞转移。

姜黄素增强人胆管癌细胞株QBC939对吉西他滨敏感性的研究

目的探讨姜黄素对人胆管癌细胞株QBC939吉西他滨的增敏作用及其机制研究。方法将人胆管癌细胞QBC939培养后分为对照组、5μg／m1单药姜黄素组、0．625μg／m1单药吉西他滨组及5μg／m1姜黄素联合0．625μg／m1吉西他滨组，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化，同时用Westernblot法检测相关蛋白核因子±κB（NF±κB）、细胞周期蛋白（Cyclin）B1、凋亡抑制蛋白（1AP）-1的表达改变。结果姜黄素联合吉西他滨处理人胆管癌细胞QBC939后12、24、48、72h的抑制率分别为（10．00±0．02）％、（23．10±0．03）％、（33．234±0．01）％、（48．304±0．05）％，显著高于对照组及单药组（P=0．001、0．000、0．000、0．000）。两药联合作用后能使（28．75±3．23）％的人胆管癌细胞QBC939被阻滞在G2／M期，显著高于单药姜黄素组及单药吉西他滨组[（14．494±2．20）％、（11．824±2．10）％；P=0．000]，且细胞凋亡率为（13．644±3．40）％，显著高于对照组、单药姜黄素组及单药吉西他滨组[（4．534±0．56）％、（6．47±0．98）％、（9．874±1．12）％，P=0．000]；姜黄素联合吉西他滨作用于人胆管癌细胞株QBC939后NF±κB及下游分子CyclinB1和IAP±1蛋白的相对表达量分别为0．3004±0．001、0．4074±0．036、0．4754±0．032，显著低于对照组、单药姜黄素组及单药吉西他滨组（P=0．000、0．001、0．003）。结论姜黄素可增强人胆管癌细胞株QBC939对吉西他滨的敏感性，其机制可能与NF±κB信号通路的抑制相关。

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的 探讨HCVC蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF κB)调控作用。方法 利用稳定表达HCVC蛋白的QBC939细胞株 (QBC93 9HCVC+) ,通过NF κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析 (EMSA)检测HCVC蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF κB的DNA结合活性和反式激活活性。RT PCR、Westernblot检测HCVC蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及 p5 0、p6 5、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响。 结果 ①EMSA结果显示QBC93 9HCVC+细胞系中NF κB相对信号密度明显比QBC939细胞高。②将pNF κB lun表达质粒转染稳定表达HCVC蛋白胆管癌细胞系中 ,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性 ,结果显示QBC93 9HCVC+细胞中活化NF κB为 12 .8倍 ,而QBC939细胞中NF κB为 2 .6倍。③RT PCR显示IκBαmRNA在QBC93 9HCVC+细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异 ;Westernblot结果显示稳定表达HCVC蛋白的QBC93 9HCVC+细胞株的胞核中的p5 0、p6 5蛋白高水平表达 ,而未转染HCVC蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p5 0、p6 5蛋白。在QBC93 9HCVC+细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达 ,QBC939细胞高水平表达 ,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论 HCVC蛋白通过增加IкBα降解激活的NF

Oddi括约肌成型术后患者胆汁促增殖活性的探讨

目的 观察经十二指肠Oddi括约肌成型术 (TS)后患者胆汁 (TSB)对人胆管癌细胞QBC 93 9生长的影响 ,探讨TS与胆管癌发生与发展的关系。方法 应用四唑蓝 (MTT)比色法检测 12份TSB和10份正常胆汁 (NB)对QBC93 9细胞增殖的影响 ,应用流式细胞仪测定细胞周期和凋亡。结果 TSB与NB比较 ,前者明显促进QBC 93 9细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ;TSB处理 2 4h的QBC93 9细胞增殖指数显著上升 (P <0 .0 5 )。结论 TSB具有潜在的促增殖活性 ,TS与胆管癌的发生与发展关系密切。

野生型P73β转染对胆管癌细胞的生物学影响

目的应用野生型P73β转染胆管癌QBC939细胞,探讨P73β基因转染对胆管癌细胞生长的抑制机制。方法应用野生型P73β转染胆管癌QBC939细胞,并以未作处理的QBC939细胞作为空白对照。用RT-PCR及Western blotting检测细胞中P21、Cyclin D1及Cdk2表达量的变化。使用四甲基偶氮唑盐法(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化。结果转染了野生型P73β重组质粒的胆管癌QBC939细胞,P21相对表达量增高,Cdk2相对表达量明显减少,胆管癌细胞增殖率受到抑制。结论野生型P73β基因转染后对胆管癌细胞的生长有抑制作用,P73β基因可通过增加P21基因的表达,抑制Cdk2基因的表达,进而作用于S期的细胞,使细胞周期停滞,从而抑制胆管癌细胞增殖。

反义CD147分子对人胆管癌细胞株侵袭性影响的实验研究

目的探讨反义CD147分子对人胆管癌细胞株QBC939侵袭性的影响。方法构建含反义CD147分子片段的重组真核表达质粒,将人胆管癌细胞株QBC939分为三组:(1)反义CD147组,运用重组真核表达质粒as CD147-pc DNA3.1(-)转染QBC939细胞;(2)空质粒组,运用pc DNA3.1(-)空质粒转染QBC939细胞;(3)对照组,运用DMEM常规处理细胞。采用MTT法检测各组QBC939细胞的生长情况,RT-PCR和Western blotting法分别对三组QBC939细胞中的CD147、MMP-2、MMP-9、TIMP-2的m RNA表达水平及其对应蛋白的表达水平进行检测。结果成功构建了携带反义CD147分子片段的重组真核表达质粒。MTT法检测显示:三组QBC939细胞的生长曲线及对数生长期情况无统计学差异(P>0.05)。RT-PCR法检测显示:反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的m RNA表达均低于空质粒组和对照组(P<0.05),且空质粒组与对照组相比无统计学差异(P>0.05);反义CD147组QBC939细胞中MMP-9和TIMP-2分子的m RNA表达与空质粒组和对照组相比无统计学差异(P>0.05)。Western blotting检测发现:与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的蛋白表达明显降低(P<0.05),空质粒组与对照组相比无统计学差异(P>0.05);与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞株中MMP-9和TIMP-2分子的蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。结论 (1)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939的生长无影响;(2)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939中MMP-9和TIMP-2的m RNA表达及对应蛋白表达无影响;(3)反义CD147降低胆管癌细胞株QBC939中CD147和MMP-2的m RNA表达及对应蛋白表达,可能会降低胆管癌细胞株的侵袭性。

PP2对人胆管癌细胞株QBC939侵袭能力的影响

目的:探讨Src激酶特异性抑制剂PP2对人胆管癌QBC939细胞侵袭能力的影响和机制。方法:通过Western Blotting技术检测PP2对人胆管癌QBC939细胞中Src激酶活化的影响;用Transwell小室法观察PP2对QBC939细胞的影响;用RT-PCR和Western Blotting技术检测PP2对QBC939细胞侵袭能力相关分子的作用。结果:实验组p-Src蛋白表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组QBC939细胞体外侵袭能力较对照组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,实验组E-cadherin表达显著增强,CD44表达明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:PP2通过抑制Src激酶活化,增强E-cadherin表达、减弱CD44表达,抑制人胆管癌QBC939细胞侵袭能力。

NF-κB特异性抑制剂PDTC对人肝门部胆管癌细胞增殖及SMYD3表达的影响

【目的】研究核转录因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸对肝门部胆管癌QBC939细胞增殖及组蛋白甲基转移酶表达的影响。【方法】不同浓度的PDTC作用于QBC939细胞不同时间后,CCK-8测定其对QBC939细胞增殖的抑制率,流式细胞仪观察QBC939细胞的周期变化情况,RT-PCR检测PDTC作用下QBC939细胞中SMYD3 mRNA的表达情况,Western blot法检测QBC939细胞内SMYD3蛋白的表达。【结果】经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05),呈时间和剂量依赖性;与对照组相比,PDTC作用后QBC939细胞G0/G1期细胞比例上升(P<0.05),并同时伴有癌细胞内SMYD3 mRNA和蛋白表达的降低(P<0.01),且呈明显的剂量依赖关系。【结论】PDTC具有显著抑制肝门部胆管癌QBC939细胞生长的作用,其机制可能与细胞增殖抑制、周期阻滞、以及NF-κB、SMYD3表达抑制有关。

基于新型光敏剂的光动力治疗在胆管癌中的应用

目的验证新型叶绿素类光敏剂——2-1-己氧乙基-2-去乙烯基卟吩e6三钠盐(HCE6),光动力疗法对于QBC939系胆管癌细胞的光动力治疗作用,并探讨其量效关系。方法 CCK-8检测652 nm不同激光光强度下不同浓度(0、0.3、0.5、1.0、15、2.0 mg·L-1)光敏剂HCE6光动力处理下细胞的增殖率,得出最适光动力剂量。建立QBC939系胆管癌细胞荷瘤裸鼠模型,光敏剂尾静脉注射0.5 mg·kg-1,24 h后接受激光治疗(激光剂量:120 J·cm-2,功率0.2 W,治疗20 min),激光治疗后1、3、5、7、10 d观察实验组和对照组瘤体体积变化差异,并对比观察瘤体病理变化。结果在最适光照强度2.7 J·cm-2(功率0.9 W,PDT处理5 min)剂量,随着光敏剂浓度升高,细胞增殖率逐渐下降,最适完全抑制浓度为1.5 mg·L-1;超过这个浓度,细胞增值率变化无差异。荷瘤裸鼠模型实验中实验组和对照组有明显肿瘤体积差异(P<0.05),光动力治疗第10天,实验组与对照组体积差异明显(P<0.05),实验组瘤块体积(0.5±0.010)cm3,而对照组(2.25±0.015)cm3。接受PDT组与对照组比较肿瘤生长速度明显受限。结论体内外实验表明光敏剂HCE6对QBC939系人胆管癌细胞生长具有明显的抑制作用。