水蛭、斑蝥对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响

目的研究中药水蛭、斑蝥对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。方法将12只Wistar大鼠随机分为水蛭组(高低剂量组)、斑蝥组(高低剂量组)、血清组和空白组,中药水蛭、斑蝥各制成水煎液,灌胃7d,采血清备用。建立6d鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,观察各组血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。结果水蛭高剂量组有明显地抑制新生血管数量的作用,与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);斑蝥高、低剂量组与空白组比较,亦能较强地抑制新生血管数(P<0.05);水蛭、斑蝥高低剂量组有抑制血管生成面积的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论虫类中药水蛭、斑蝥对CAM血管生成有一定的抑制作用。

改良CAM移植瘤模型的制备及其对肿瘤血管新生抑制药物的筛选效果

目的：以改良方法在鸡胚绒膜尿囊膜（chickchorioallantoicmembrane，CAM）上接种人成神经胶质瘤U87细胞制备移植瘤，验证改良模型筛选抗肿瘤血管新生药物的有效性和可行性。方法：将鸡胚种蛋随机分为2组，分别使用传统方法与改良方法建立CAM-U87移植瘤模型；改良方法在鸡胚孵育中增加9—16h的开窗适应期，再将特制的硅胶圈放置在CAM组织-级血管的半侧；硅胶圈内接种U87细胞建立CAM—U87移植瘤模型。模型的硅胶圈内分别加入经典抗血管新生药物沙利度胺（50、100、200μg／ml）和自主研发抗血管新药G386，以DMSO为对照；体视显微镜观察肿瘤形态，H—E染色法观察瘤组织新生微血管密度（microvesseldensity，MVO），原位杂交（insituhybridization，ISH）技术检测血管标记物VEGFR2的表达。结果：成功制备改良CAM—U87细胞移植瘤，改良模型不影响CAM本身的血管生成，其瘤细胞接种成功率较传统模型显著升高[（70．00±4．226）％vs（41．25±5．154）％；t=4．314，P=0．0007]，移植瘤体积显著增大[（60．20±6．012）vs（15．97±2．403）mm3；t=6．012，P〈0．0001]。沙利度胺和G386两药均能显著抑制移植瘤组织中的血管形成，使瘤组织中MVD显著降低[沙利度胺200μg／ml时（15．85±1．15）％vs（29．80±4．16）％；t=2．49，P=0．0474]、VEGFR2表达明显减少。结论：改良方法成功制备CAM—U87移植瘤模型，经沙利度胺和G386验证，该模型对抗肿瘤血管新生药物的筛选具有良好的有效性和可行性。

通过转CaM基因提高了棉花抗寒性

为了获得耐低温棉花新材料,通过花粉管通道法获得了转CaM基因棉花,经过分子检测得到了3个转基因株系。同时对得到的转基因株系的T4代(C1、C2、C3)和棉花受体(CK)在低温处理后的相关生理生化指标进行了初步测定。发现在低温(4℃)处理24 h后,C1、C2、C3叶片中的丙二醛(MDA)含量明显低于对照,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)的活力、可溶性糖的含量明显高于对照,而常温下(23℃)测定值没有明显的差异。表明转CaM基因棉花在低温时能够通过减轻叶片膜脂过氧化程度,提高抗氧化酶活力等反应来缓解低温对棉花叶片的损伤。本研究筛选出了3个具有一定抗寒能力的转基因株系,为下一步选育抗寒新品种奠定了基础,也为其他棉花抗寒转基因技术提供了理论依据。

益气养阴方对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响

目的:评价益气养阴方鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。方法:制备CAM模型,比较大鼠含药血清和无药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响情况。结果:含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成产生明显抑制作用。结论:益气养阴方对活体血管的生成具有抑制作用,在肿瘤和其他病理情况下的血管形成治疗中具有一定的应用价值。

Ca^(2+)、CaM及CaM拮抗剂对粟酒裂殖酵母质膜H^+-ATP酶活性的影响

经差速离心,酸处理,蔗糖密度梯度离心制备粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pom be)质膜H+-ATP酶,以研究Ca2+、CaM以及CaM拮抗剂对纯化的质膜H+-ATP酶活性的影响.结果表明Ca2+强烈的抑制该酶的活性,而CaM对该酶的活性没有影响,但TFP与Compound R24571这两类CaM拮抗剂又都能强烈地抑制该酶的活性.推测TFP等抑制该酶的活性不是通过与CaM结合作为CaM的拮抗剂竞争性抑制该酶的活性,而是直接对该酶发生作用或者通过磷脂或其它的CaM依赖性的膜蛋白间接对该酶产生作用.

通心络促血管生成作用的实验研究

目的 探讨中药通心络对鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)模型血管生成作用的影响。方法 运用血清药理学的方法制备药物血清 ,鸡胚随机分为空白血清组、贝复济组及通心络大、小剂量组 ,检测尿囊膜的血管增生程度。结果 通心络大剂量组CAM的血管增生数明显高于空白血清组 (P <0 .0 5) ,而与贝复济组无明显差异 (P >0 .0 5) ;通心络小剂量组与空白血清组相比无明显差异 (P >0 .0 5)。结论 通心络可促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生 。

中药当归、川芎、丹参提取液促血管生成作用的实验研究

目的:观察中药当归、川芎、丹参对体外培养的心肌微血管内皮细胞及鸡胚尿囊膜模型的血管数的影响。方法:采用酶消化法培养心肌微血管内皮细胞;应用MTT比色法检测中药对内皮细胞的增殖活性;通过鸡胚尿囊膜模型观察中药对血管生成的作用。结果:与空白对照组比较,川芎高剂量组、当归中、高剂量组及丹参高、中、低剂量组对微血管内皮细胞有明显促增殖作用(P<0.05),当归、丹参有剂量依赖性关系;同时它们具有促进微血管再生的作用。结论:当归、丹参、川芎对微血管内皮细胞和微血管有促进增殖的作用,这可能是其促血管生成的作用机制之一。

26种活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:采用鸡胚绒毛尿囊膜(ChickChorioallantoicMembrane,CAM)法从26种活血化瘀中药中初筛血管生成抑制剂。方法:试验组分别为26种活血化瘀中药,所用片剂、胶囊剂、丸剂、散剂溶解成饱和溶液,汤剂制成含生药2g/ml的水煎醇沉液,注射液、口服液、膏剂用原药物浓度。种鸡蛋孵化7天,建立CAM模型,按20μl胚加药液于明胶海绵载体上,每日1次,连续3天。孵化第10天,计数CAM载体周围5mm的血管分支点。结果:15种活血化瘀中药CAM的血管分支点数量降低(P<0.05)。结论:榄香烯乳剂、莪术油葡萄糖注射液、磷酸川芎嗪注射液、注射用阿魏酸钠、雷公藤多苷片、火把花根片、祖师麻片、复方斑蝥胶囊、大黄广廿灬虫虫丸、大活络丸、复方丹参滴丸、七厘散、活血通脉片、三棱丸及桃红四物汤Ⅱ号具有抑制CAM血管生成的作用。

黄芪、当归配伍后促鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的药效比较研究

目的 :探讨黄芪、当归不同配伍对鸡胚绒毛尿囊膜 (chorioallantoicmembrane ,CAM )新生血管生成的影响。方法 :制备CAM模型 ,观察应用黄芪与当归 5∶1配比的含药血清后CAM血管生成的情况。结果 :黄芪与当归合用后 ,在血管生成表现以及血管计数方面 ,均明显优于生理盐水对照组及其他配比组。结论 :黄芪与当归按 5∶1配伍具有较好的促进CAM新生血管生成的作用 ,表明当归补血汤原方配比为最佳组合 。

和厚朴酚抗血管生成作用的实验研究

目的:本研究通过检测和厚朴酚在体内对鸡胚尿囊膜(chicken chorilallantoic membranes,CAM)血管生成的抑制作用及体外对肿瘤血管生成的影响,探讨和厚朴酚的抗血管生成作用及其初步机制。方法:(1)用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测和厚朴酚对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)、人成纤维细胞及人结肠癌RKO细胞增殖的抑制作用;(2)采用鸡胚绒毛尿囊膜模型,观测和厚朴酚对CAM新生血管生成的抑制作用;(3)逆转录聚合酶链反应(RT-RCR)方法检测和厚朴酚对RKO细胞血管内皮生长因子A(VEGF-A) mRNA表达及细胞培养上清液VEGF蛋白分泌的影响。结果:和厚朴酚对血管内皮细胞具有优先抑制作用,对HUVEC的半数抑制剂量(inhibitory concentration 50%,IC50)为14.5μmol/L,而对原代培养的人成纤维细胞的IC50高达150μmol/L,对人结肠癌RKO细胞的IC50为42μmol/L;和厚朴酚0.1μg/只和0.2μg/只剂量时显著抑制CAM新生血管形成,抑制率分别为58%和86%;和厚朴酚在10μmol/L和20μmol/L剂量时显著抑制RKO细胞的VEGF-A mRNA表达及细胞培养上清液中VEGF蛋白的分泌,具有显著性差异。结论:和厚朴酚在非凋亡剂量时具有抗血管形成作用,其机制与抑制血管内皮细胞增殖以及抑制肿瘤细胞表达VEGF有关。

芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:探讨芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。方法:用溶剂萃取法制备芥子碱,通过CAM模型,检测芥子碱对CAM新生血管生成的影响。结果:与生理盐水对照组相比,中、大剂量芥子碱组(5.0、10.0g/L)CAM实验作用部位的血管生成明显受抑,周围血管网模糊,密度减少(P<0.01),抑制率分别达到54.24%和71.62%,而小剂量组(2.5g/L)差异不显著(P>0.05)。结论:芥子碱具有一定的抗血管生成活性,且其作用效果呈剂量依赖性。

β-七叶皂苷钠对鸡胚血管新生的影响

目的:研究β-七叶皂苷钠对鸡胚血管新生的抑制作用。方法:采用平皿法,观察β-七叶皂苷钠对鸡胚卵黄囊和绒毛尿囊膜血管(chick chorioallantoic membrane,CAM)的作用。结果:β-七叶皂苷钠(100和500μmol·L-1,10μL／药膜)显著抑制卵黄曩血管网的发育,使血管走形发生改变。β-七叶皂苷钠(500和1 000μmol·L-1,10μL／药膜)能够显著抑制鸡胚绒毛尿曩膜血管生成,500μmol·L-1组作用12和24 h后其抑制率分别为59．7％(P<0．01)和54．5％(P<0．01),1 000μmol·L-1组作用12和24 h后抑制率分别为67．7％(P<0．01)和65．3％(P<0．01)。结论:β-七叶皂苷钠能显著抑制鸡胚血管的新生,可能成为抗血管形成抑制剂。

疮灵液载入胶原对血管新生影响的实验研究

目的探讨疮灵液及其载入胶原后对血管新生的影响。方法将不同剂量的疮灵液及其载入胶原后,通过鸡胚尿囊膜模型(CAM)测定筛选其血管新生疗效;通过血管内皮细胞增殖实验(MTT)、迁移划痕实验、血管生成素1(Ang1)、血管内皮生长因子(VEGF)与整合素(Integraаv)Western blot检测探查筛选适合剂量的疮灵液胶原的作用靶点与机制。结果 CAM实验显示疮灵液0.2mL及0.3mL组血管新生少于控制组(P<0.05),创灵液0.2mL与0.3mL组之间没有明显差异;载入胶原后其抑制微血管新生作用得到逆转,结果与控制组无统计学差异。选择疮灵液0.2mL及其载入胶原进行细胞实验,结果显示修饰后胶原可以显著促进HUVEC的增殖,增殖率达86%,而单纯疮灵液则抑制了HUVEC增殖约21%,相同剂量疮灵液载入胶原后,增殖率得到升高,高于控制组约24%(P<0.01);疮灵液组显著抑制了细胞的迁移运动,在12、24h时均显著低于其他各组;疮灵液载入胶原后,细胞迁移速度开始加速,24h迁移速度显著快于控制组(P<0.01);机制在于疮灵液组Integraаv蛋白表达明显低于控制组,而Ang1表达高于控制组,载入胶原后Integraаv、VEG F及Ang1蛋白表达均明显上升。结论疮灵液抗血管内皮细胞的迁移与增殖,抑制血管新生;将疮灵液载入胶原后,可以改善其抑制血管新生的作用,有利血管成熟,提高了其促进创面愈合的疗效。

隐丹参酮对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用

目的评价隐丹参酮对鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管生成的抑制作用。方法在六日龄CAM上植入含隐丹参酮的甲基纤维素膜片并孵化48 h。解剖显微镜下计数加药组和对照组局部血管数,用抑制率反映药物对CAM新生血管形成的影响。结果隐丹参酮0.1μg/egg和0.2μg/egg剂量相关性减少CAM局部的血管数,抑制率分别达到65%和72%;与对照组相比用药组局部血管明显变细受损。结论隐丹参酮对CAM血管生成有显著的抑制作用。

水体沉积物中有效砷的测试新方法研究

一种氧化铁/醋酸纤维素复合膜（FeO/CAM）被用于太湖沉积物中砷的生物有效性评估.结果发现,在水介质中,FeO/CAM对沉积物中砷的富集量随土水比增加而呈乘幂函数减少,在土水质量比为0.025（即1∶40）之后趋于某一平台值;在土水比为0.025并得到充分振荡的条件下,沉积物中释放的有效砷被FeO/CAM富集至膜中,并随时间增加而增加,至24h后逐渐趋于平衡,这一过程恰当地模拟了生物对砷的吸收,因此,FeO/CAM可以用于有效砷的体外测试.利用FeO/CAM对12个总砷含量为6.4-34.6mg·kg^-1的太湖沉积物样品中的有效砷进行了测定.结果发现,FeO/CAM提取的有效砷含量与磷酸盐缓冲液提取的有效砷含量之间显著相关.太湖沉积物中的有效砷含量与总砷、总磷、有机质和吸附磷含量以及磷吸附饱和度显著相关,说明沉积物理化属性对有效砷含量有重要影响.FeO/CAM克服了化学试剂提取过程中引起的非有效态砷释放的根本缺陷,因此,FeO/CAM方法在沉积物有效砷含量的测定时比化学试剂提取法可能更准确.

人IL-24重组蛋白免疫刺激及血管形成抑制作用

目的探讨人重组白细胞介素-24(rhIL-24)蛋白体外免疫刺激功能和血管形成抑制作用。方法将原核稳定表达得到的rhIL-24蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC),ELISA检测其刺激免疫细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)的活性;利用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型观察rhIL-24蛋白抑制血管形成的效应。结果rhIL-24蛋白孵育的PMBC在不同时段分泌的IL-6、TNF-α及IFN-γ浓度与阴性对照组相比存在显著差异;rhIL-24蛋白能明显抑制CAM二级和三级血管形成,与阴性组比较,差异极显著。结论rhIL-24蛋白具有明显的免疫刺激功能和血管形成抑制作用。

去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究

目的 观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对在体血管生成的影响。方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)试验 ,检测NDGA对血管生成的影响。结果 2 .5× 1 0 -6mmol以上量的NDGA均对血管生成有抑制作用 ,在实验剂量 ( 0 .5～ 5 0 )× 1 0 -6mmol范围内 ,随给药量的增加 ,其抑制作用愈加明显。采用Bouin’s液原位固定后取膜、DAB染色、普通显微镜下观察或用图像分析方法可使结果更具可信性与可比性。结论 NDGA可抑制血管生成 。

重组人促红细胞生成素对人脐静脉内皮细胞及鸡胚尿囊绒毛膜促血管生成的作用

目的探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及鸡胚尿囊绒毛膜(CAM)促血管生成作用。方法分别以生理盐水(NS)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)为阴性和阳性对照,通过三维培养模型,观察rHuEPO对体外培养人脐静脉内皮细胞管腔结构形成的影响;并采用鸡胚尿囊绒毛膜法,通过一级、二级微血管计数来评价rHuEPO在体促血管生成作用。结果rHuEPO组内皮细胞形成管腔数目及在CAM上形成血管数均较NS组明显增多。结论rHuEPO具有促进培养HUVEC及鸡胚CAM的血管生成作用。

鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域的应用及研究进展

鸡胚因发育过程清楚,长久以来作为基础和应用科学研究领域重要的实验模型,尤其在鸡胚发育早期绒毛尿囊膜阶段,因其血管丰富,是天然的免疫缺陷宿主,是病理学、药理学和肿瘤学等研究领域的理想实验模型。作者简述了发育早期的鸡胚组织结构,并介绍了鸡胚绒毛尿囊膜在肿瘤研究、血管生成、器官移植、烧伤等疾病机理研究中的应用,以及在鸡胚病理模型基础上进行的抗肿瘤药物筛选的应用。重点介绍了鸡胚及禽类细胞系在病毒繁殖和疫苗生产、治疗性蛋白和单抗生产方面的应用研究进展。多种人源病毒、禽源病毒、支原体等可在鸡胚及禽类细胞上增殖,并用于疫苗生产。作者对常用的禽类纤维原细胞和多能干细胞的发展和特点进行了阐述,并总结了商业化的禽类细胞系来源以及部分易感病毒。鸡胚表达系统能够在目的蛋白特定位点产生人源化糖基,减少目的蛋白对人的过敏反应,且禽蛋廉价易得,可作为生产人用单克隆抗体和治疗性蛋白的合适供体。作者介绍了鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域应用的最新进展,并对鸡胚作为动物模型在未来的应用进行了展望。

奥沙利铂联合复方苦参注射液抗血管生成作用的实验研究

背景与目的:肿瘤的生长、转移、复发和预后均与肿瘤血管生成密切相关。以肿瘤血管生成为靶点,开发血管生成抑制剂在抗肿瘤研究中是一个十分活跃的研究领域。近年来,研究发现某些化疗药物,在小剂量、高频率的给药方式下可以选择性地显著抑制肿瘤组织内新生血管内皮细胞的生长,使肿瘤细胞因为血供不足而生长受阻。这称为小剂量化疗或抗血管生成化疗。中医药治疗肿瘤具有独到的疗效,近年来发现许多中药制剂及中药来源的药物有抗血管新生作用。本研究旨在在国内外现有的研究基础上探讨奥沙利铂联合复方苦参注射液对体内外血管生成的抑制作用。方法:采用MTT法观察奥沙利铂(L-OHP)联合复方苦参注射液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人结肠癌LoVo细胞增殖的影响;采用transwell板,观察L-OHP联合复方苦参注射液对HUVEC迁移的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察L-OHP联合复方苦参注射液对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用。结果:HUVEC和LoVo细胞对不同浓度两种药物进行联合的敏感性不同。2μg/m l奥沙利铂和25μl/m l复方苦参注射液对HUVEC增殖的抑制率分别为31.6%、32.1%,联合应用后的抑制率为54.4%,具有协同作用;0.5μg/m l奥沙利铂和6.25μl/m l复方苦参注射液具有抑制HUVEC迁移的作用,联合应用具有协同效应。奥沙利铂联合应用复方苦参注射液具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用。结论:小剂量L-OHP和复方苦参注射液在体外有抑制细胞生长,在体内具有抑制血管生成作用,两者联合具有协同效应。