嗜热四膜虫Tcd1蛋白功能结构域的突变分析

有性生殖过程特异表达的Tcd1在四膜虫大核基因组重排和修复中起到重要调节作用,Tcd1含有进化中保守的chromodomain(CD)结构域以及chromo shadow domain(CSD)结构域,然而不同结构域的具体功能并不清楚。本研究首先鉴定了TCD1基因仅含有1个CD结构域的选择性剪切本TCD1β,免疫荧光定位表明,Tcd1β定位在胞质中。定点突变Tcd1中CD1内159位色氨酸为丙氨酸,Tcd1W159A点状定位在亲本大核,然后转移到新发育的大核上围绕核膜致密分布,发育的晚期逐步消失。进一步突变CD2中437位的色氨酸为丙氨酸后,Tcd1W159AW437A在早期亲本大核形成异常的环状分布,而在新发育大核中形成点状分布。截短CSD结构域C端35个氨基酸后,Tcd1Δ35在亲本大核和新大核上的定位不受影响。然而,截短CSD结构域C端的53个氨基酸后,Tcd1Δ53定位在细胞质中,无核内定位。结果表明,Tcd1中的CD1和CD2结构域决定了Tcd1蛋白在核内的分布,CSD结构域决定了Tcd1入核转运,Tcd1的3个功能结构域共同决定了Tcd1在四膜虫中的功能定位。