青钱柳染色体的制片技术及核型分析

采集母树生长于湖北省宜昌市五峰土家族自治县的青钱柳(Cyclocarya paliurus)二倍体和四倍体种子,在室外自然层积至萌发,待根长(L)分别达到0.5 cm<L≤1.0 cm、1.0 cm<L≤2.0 cm、L>2.0 cm时,选取根部嫩白且完整的根尖,按照试验设定的处理条件进行预处理、固定、解离、染色。取长度达到0.5 cm<L≤1.0 cm的二倍体青钱柳胚根的根尖,采用常规压片法,比较预处理条件、解离方法、染色时间对染色体制片效果的影响,获取优化的二倍体青钱柳根尖染色体制片技术;按照优化后的二倍体青钱柳根尖染色体制片技术,对四倍体青钱柳根尖进行染色体制片。对不同倍性青钱柳各选取30个以上染色体分散良好的细胞分裂相进行染色体数目统计,选取5张染色体分散良好、形态清晰的中期细胞照片,采用测量和分析工具(MATO)软件对染色体的长臂、短臂进行测量,计算相对长度和臂比,再进行染色体类型划分、核型分类、核型不对称系数计算。结果表明:①选取根长为0.5 cm<L≤1.0 cm的根尖,4℃避光条件时,用质量浓度为2 g/L的秋水仙素与浓度为2 mmol/L的8-羟基喹啉等体积比例混合溶液处理1~2 h(或对二氯苯饱和水溶液处理6 h)、常温时浓盐酸和乙醇混合溶液解离10 min、卡宝品红溶液染色30 min,制片效果最佳。②二倍体青钱柳核型公式为2n=2x=32=32m,核型不对称系数为57.61%,属于1B型,染色体全由中部着丝粒染色体组成;四倍体青钱柳核型公式为2 n=4x=64=60m+4sm,核型不对称系数为58.83%,属于1B型,染色体由中部和近中部着丝粒染色体组成。③试验建立了青钱柳染色体制片的适宜方案;核型分析表明,青钱柳二倍体和四倍体在进化中均处于较原始地位。

染色体短期培养法的改良及在白血病患者染色体核型分析中的应用

目的改良骨髓染色体短期培养法并对130例白血病患者进行染色体核型分析。方法通过单因子梯度实验,对影响骨髓染色体短期培养法的秋水仙素浓度、作用时间、低渗时间等主要因素进行优化,并在改良基础上,进行了3因素3水平正交实验优化骨髓染色体制备体系,进一步对我院130例白血病患者进行了染色体核型分析。结果秋水仙素浓度、秋水仙素作用时间、低渗时间等因素都有适宜的范围,过高或过低都会影响染色体制备成功率,正交实验结果表明骨髓染色体制备的最适体系为秋水仙素质量浓度0.07μg/mL,作用时间80min,低渗时间35min。通过改良的染色体短期培养法对130例白血病患者进行了染色体核型分析,染色体制备成功率达到了97.69%,异常核型检出率为82.3%。结论 0.07μg/mL秋水仙素作用80min,低渗时间35min的改良骨髓染色体制备体系值得临床推广。

青花菜染色体制片技术及核型分析

以青花菜为材料,筛选染色体制片流程,采用常规压片法制片,并进行核型分析。结果表明:根尖长度为13～15mm时,中期分裂相最多;在4种预处理中,0.002 mol.L-18-羟基喹啉预处理2.5 h效果最好;青花菜染色体数为2n=18,核型公式为:2n=2x=18=8m+10sm(2SAT),其中第1、2、5、6、9对为近中着丝粒染色体(sm),第6对染色体具有随体,第3、4、7、8对为中着丝粒染色体(m)。青花菜染色体的相对长度变化范围为(9.05%±0.56%)～(13.63%±0.06%),相对长度组成为2n=18=8M2+10M1。着丝粒指数变化范围为(32.13%±3.37%)～(42.23%±1.57%),臂指数为18。核型分类标准为2A型,属于基本对称核型。

菜用大黄染色体制片优化及核型分析

以菜用大黄根尖为材料,探讨不同取材时间、预处理溶液、解离时间对菜用大黄根尖染色体制片的影响,并对2个菜用大黄品种RAMB和RO进行了核型分析,以期为菜用大黄的起源、演化及遗传育种提供一定理论依据。结果表明,在上午8:00取材,用冰水混合物预处理24 h,然后在60℃条件下用1 mol/L HCl解离15 min,最后用改良石碳酸品红染色3～5 min,此时染色体制片效果最佳;RAMB和RO的染色体数目均为2n=44,其核型公式分别为2n=4x=44=36m+8sm和2n=4x=44=32m+12sm,核型均为1B型,核型不对称系数分别为57.46%和58.60%,核型对称程度均较高,这表明菜用大黄在进化中处于比较原始类型。

中华蚊母树染色体制片及核型分析

以中华蚊母树根尖为材料,采用常规压片法制片,比较材料的不同采集时间、预处理方法、固定剂、解离方法、解离时间及染色方法对中华蚊母树根尖染色体制片的影响.结果表明最佳的制片技术为：取材时间为上午9：00-11：00或下午13：00-15：00,以饱和对二氯苯预处理3 h,用1 mol.L^-1盐酸60℃下解离8 min,卡诺固定剂固定,以改良石碳酸品红染色10 min.以该最佳制片方案对中华蚊母树进行体细胞染色体核型分析,首次揭示了中国特有植物———中华蚊母树体细胞染色体数目为2n=2x=24,染色体基数x=12,染色体核型公式为2n=2x=24=12m（2SAT）＋10sm＋2st,主要由中部和近中部着丝点染色体组成;染色体相对长度组成为2n=24=2L＋8M2＋12M1＋2S,核型不对称指数为64.29%,属于2A型.结果显示中华蚊母树核型对称程度较高,在进化中属于比较原始的类型.

树型金银花染色体制片优化及核型分析

以树型金银花茎尖为材料,比较材料的不同采集时间、预处理方法、解离时间和染色方法对树形金银花茎尖染色体制片的影响。结果表明,取材时间为上午10:00-11:00、预处理方式为饱和对二氯苯处理3～4 h、解离采用1mol/L HCl在60℃下13min、染色液以改良石碳酸品红染色10min染色体制片效果最佳。核型分析结果表明:染色体核型公式为2n=18=8m+8sm+2st,其中第9对染色体具随体,染色体相对长度组成为2n=18=4L+8M2+4M1+2S,属于"2B"型,核型不对称指数为64.47%,属于由对称向不对称演化的过渡型,表明树型金银花是较野生型金银花进化类型。

黄花芥蓝染色体制片优化及核型分析

以黄花芥蓝典型品种＂福州黄花＂为材料,对影响染色体制片效果的取材时间点、预处理时间和解离时间等条件进行优化,并进行核型分析。结果表明：上午9：00取材,分裂相细胞和中期分裂相细胞最多;0.002mol/L 8-羟基喹啉预处理5h染色体收缩性最好,形态最佳,分散性好;1mol/L HCl 60℃解离8min细胞分散,染色体着色良好而细胞质透明,对比度高。黄花芥蓝的染色体数目为2n=2x=18,染色体相对长度变化范围为9.66%-14.29%,染色体长度比为1.48,其染色体类型包括长染色体（large chromosomes,L）、中长染色体（middle chromosomes 2,M2）和中短染色体（middle chromosomes 1,M1）,染色体相对长度组成为2L＋2M2＋14M1,着丝粒指数变化范围为27.86%-48.19%,臂比值变化范围为1.08-2.59,其中第1、4、6、9对染色体为近中部着丝粒染色体（submetacentric chromosomes,sm）,其余5对为中部着丝粒染色体（metacentric chromosomes,m）,第6对染色体具有随体（satellites,SAT）,核型不对称系数为61.95%,核型分类标准属2A型。同时,本研究还比较了黄花芥蓝与已报道的白花芥蓝的核型结果,发现两者在核型公式、染色体长度比和相对长度范围等方面存在明显差异。研究结果丰富了对芥蓝遗传组成的认知,为芥蓝分类地位与种内亲缘关系研究提供细胞学证据。

棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂)F_1染色体制备方法及核型分析

探索了在鱼类大小规格不同情况下制备鱼类染色体的最佳策略和方法,并对棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂)杂交子代(俗称珍珠龙胆)的染色体核型进行研究。本研究根据预实验的结果,对所选取的珍珠龙胆幼鱼,采用小鱼游泳法进行前处理,取其鳍条并以冷、热两种不同的滴片方法制备染色体,观察染色体形态并对其染色体核型进行分析。结果显示,选用的染色体制备方法能获得图像清晰、形态良好的细胞分裂相;不同的滴片处理方法细胞分裂指数存在一定差异,即热滴片法的有丝分裂指数为2.58%,明显高于冷滴片法的有丝分裂指数(0.83%),此外,热滴片法所获得的染色体的质量也明显优于冷滴片法。珍珠龙胆石斑鱼二倍体染色体数为48,22对染色体为端部着丝粒染色体,2对染色体为亚端部着丝粒染色体,其染色体臂数(NF)为52,核型公式为2n=48,4st+44t。珍珠龙胆与父本鞍带石斑鱼的染色体数目、核型基本一致,而与母本棕点石斑鱼的核型存在很大差异。研究表明,珍珠龙胆的2n数与其亲本相同,其核型特点符合典型的高位类群鱼类核型特征。在对珍珠龙胆与其亲本的核型进行比较的同时,对已报道的25种石斑鱼进行了核型的比较和综合分析,为石斑鱼的种质鉴定、遗传资源保护利用、育种提供基础资料和理论依据。

叶用甜菜染色体制片条件优化及核型分析

以叶用甜菜绿梗品种为材料,对影响染色体制片效果的解离时间、预处理时间和取材时间等条件进行优化,并进行核型分析。结果表明,1 mol·L^(-1)HCl 60℃解离12 min,染色体着色良好而且细胞质透明,对比度高;0.002 mol·L^(-1)8-羟基喹啉预处理9 h染色体收缩性最好,形态最佳,分散性好;上午9:00取材,分裂相细胞和中期分裂相细胞最多。叶用甜菜的染色体数目为2n=2x=18,核型公式为2n=2x=18=16m+2sm(2SAT),染色体长度比为1.52,染色体相对长度组成为8M2+10M1,染色体相对长度变化范围为8.75%~13.29%,着丝粒指数变化范围为36.67%~47.04%,臂比值变化范围为1.13~1.73,其中,第2对染色体为近中部着丝粒染色体(sm),且具有随体,其余均为中部着丝粒染色体(m),核型不对称系数为58.50%,核型分类标准属1A型。同时,该研究还比较了叶用甜菜与已报道的糖用甜菜的核型结果,发现两者在核型公式、核型分类、随体和核型不对称系数等方面存在明显差异。研究结果从细胞遗传学角度揭示叶用甜菜的核型特征,为今后进行不同类型叶用甜菜的核型比较提供理论依据。

白肉火龙果染色体制片技术及核型分析

以白肉火龙果的实生根为制片材料，在去壁低渗法的基础上改进染色体制片技术，并进行核型分析。结果表明，以白肉火龙果种子在粗砂砾中萌发的实生根为材料，以等体积的0．2％秋水仙素与0．002mol／L8-羟基喹啉预处理1h，在1mol／L HCl中60℃下解离13min，制片效果最好。核型分析显示白肉火龙果的染色体数目为2n=2x=22，全部染色体都为中部染色体，核型公式为2n=2x=22=22m；染色体的相对长度变化范围为6．95％～12．97％，核型为1A型，核不对称系数为52．67％。

两种方法分析大鳞鲃染色体核型的比较研究

染色体核型分析是细胞遗传学研究的主要内容。为了获得准确、便捷的染色体核型分析方法,以引进耐盐碱品种大鳞鲃为实验材料,取头肾细胞冷滴片法制备染色体标本,采用E-ruler测量软件和Photoshop图像软件结合完成了染色体核型分析,并与常规方法的测量结果、核型分析进行了比较。结果显示,E-ruler软件与常规方法对伸展平直染色体的测量无显著差异,前者对弯曲形态染色体的测量结果更为准确;Photoshop图像软件能剔除染色体中期分裂相照片的背景,准确判断着丝粒的位置,快速、便捷地完成染色体核型图拼贴。研究表明,利用E-ruler软件和Photoshop软件相结合可获得准确、清晰的核型分析结果,本方法适用于其他鱼类和生物的染色体核型分析。染色体分析结果显示,大鳞鲃的染色体组为二倍体,未发现与性别有关的异型染色体,核型公式为2n=100=12m+38sm+38st+12t,NF=150。同鲃科其他鱼类的核型相比,大鳞鲃与国内几种倒刺鲃核型类似,具有鲃亚科进化核型特征。

朱顶红染色体核型分析及倍性鉴定

以朱顶红新生根尖为材料,采用常规压片法进行染色体制片,对朱顶红属品种进行了染色体核型分析及倍性鉴定。结果表明:0.002 mol/L 8-羟基喹啉水溶液4℃预处理朱顶红根尖9—24 h,1 mol/L HCl溶液60℃解离根尖9 min获得的染色体制片效果最好。首次对朱顶红品种'柠檬冰糕'进行核型分析,发现其为三倍体朱顶红,核型公式为K(2n)=3x=33=12 m+12 sm+9 st,核型不对称系数(As.K)为70.19%,核型类型为3B型。根据染色体制片结果对6个朱顶红品种进行倍性鉴定表明:'凤蝶'为二倍体朱顶红,'特伦蒂诺'为三倍体朱顶红,'粉色惊奇''快车''苹果花''樱桃妮芙'均为四倍体朱顶红。

多倍体西瓜染色体制片技术改良及其核型分析

【目的】改良多倍体西瓜染色体标本制片技术,比较多倍体西瓜常规核型分析与荧光核型分析结果,为西瓜细胞遗传学研究及辅助构建西瓜物理遗传图谱提供参考依据。【方法】以多倍体西瓜为材料,以传统染色体制片方法去壁—低渗火焰干燥法为基础,去掉其前低渗和后低渗两个步骤,合并其再固定与火焰涂片两个步骤,用吉姆萨染色剂和荧光染料DAPI分别对多倍体西瓜染色体进行常规染色和荧光染色,并进行核型分析。【结果】使用改良型酶解去壁火焰干燥法进行多倍体西瓜染色体制片,比传统去壁—低渗火焰干燥法简化了用KCl溶液前低渗、后低渗及用卡诺固定液再固定3个步骤,可缩短制片时间1.0~2.0 h,提高制片效率,获得的染色体样本数目齐全、分散良好、形态清晰。用DAPI染色比用吉姆萨染色更容易检测到细胞中期分裂相,每张玻片可缩短检测时间0.5~1.5 h;染色体的着丝点、长臂及短臂形态更清晰。【结论】采用改良染色体制片方法可提高多倍体西瓜染色体的制片效率,对该制片进行荧光核型分析比常规核型分析更准确,效率更高。

根尖压片法制备树莓染色体标本的研究

以红泡刺藤（R．niweus）、栽秧泡（R．ellipticus var．obcordatus）和插田泡（R．coreanus）绿枝或硬枝扦插生根的根尖为材料，通过取材时季与扦插环境气温，8-羟基喹啉、秋水仙素和对二氯苯3种药剂在不同的温度下预处理不同时间，混合酶液和盐酸在不同温度下解离，醋酸洋红、卡宝品红、席夫试剂和铁矾-苏木精各染色剂染色压片等的对比研究，并以细胞中有丝分裂中期分裂相的数目、染色体的清晰性、分散程度和聚缩程度以及染色体的形态为衡量指标，探索出适于树莓属植物核型分析的根尖压片方法是：当根尖长至1～2crn、扦插环境气温17～23℃时取材，卡诺氏固定液I低温固定24h，用0．002mo/L8-羟基喹啉在0～4℃下预处理24h，再用1mol/LUCt（60±1）℃恒温解离4～7min，最后用卡宝品红染色压片能获得效果好树莓染色体标本，该染色体标本完全适用于核型分析。

红肉火龙果气生根染色体制片优化及核型分析

以红肉火龙果的气生根为试材,研究气生根长度、采样时间、预处理方法、解离时间和染色方法等对红肉火龙果气生根根尖细胞染色体制片效果的影响,以优化的制片技术制片并进行核型分析。结果表明:10:30时段取长度5mm以下的幼嫩气生根,用0.1%秋水仙素常温预处理2h,应用双低渗法使染色体分散,常温下1mol/L HCl解离50min或60℃下解离20min,20%改良苯酚-品红染色液染色20min,可以得到最佳的制片效果,用中性树脂制成永久装片。染色体核型分析表明,红肉火龙果的染色体数目为11对,最长染色体/最短染色体为1.63,核型公式为2n=2x=22=22m,核型不对称系数为54.29%,核型属1A类型。

粗根鸢尾染色体制片技术及核型分析

以粗根鸢尾根尖为试材,研究取样时间、预处理液、解离时间等对其染色体制片的影响,并以此最佳条件进行粗根鸢尾核型分析,为其细胞学研究及开展杂交育种提供参考。结果表明,根尖取样以上午8:00—11:00从田间植株取材为佳;用2mmol/L8-羟基喹啉溶液预处理2.5h,经卡诺固定液固定2h后,在5mol/L盐酸常温下解离10min,卡宝品红溶液染色压片镜检,能取得良好的制片效果;粗根鸢尾的染色体数目为2n=18,核型公式为2n=2x=18=12m+6sm,核型属于2A型。

榕树传粉昆虫榕小蜂染色体制备方法研究

榕树与其传粉昆虫榕小蜂之间具有高度专一的互惠共生关系,榕小蜂为榕树传粉的同时又在榕果内营寄生生活,直至完成其整个生活史,因此一直以来对榕小蜂的染色体研究存在很大困难。本文以对叶榕Ficus hispida传粉榕小蜂Ceratosolen solmsi和鸡嗉子榕F.semicordata传粉榕小蜂C.gravelyi为材料,摸索出一套适合于榕树传粉昆虫榕小蜂染色体研究的详细、有效的技术和方法。应用该法对对叶榕传粉榕小蜂C.solmsi和鸡嗉子榕传粉榕小蜂C.gravelyi的染色体核型进行了研究,结果表明两种榕小蜂的染色体核型特征非常相似,具有相同的染色体数目2n(♀)=10,染色体类型全部为中着丝粒染色体,臂数NF=20。此外,在相对长度方面两者也没有明显的差异。最后与Imai等1988年研究蚂蚁染色体时提出的方法进行了比较。利用本文介绍的方法进行榕小蜂染色体制备,操作过程简单、重复性强,不仅能够得到大量的染色体分裂相,而且染色体细胞界限明确、形态清晰、分散良好。

六个金银花栽培品种的核型分析

以6个金银花栽培品种的茎尖组织为试材,采用常规压片法进行染色体制片和核型分析,为良种选育提供细胞学基础。结果表明:6个金银花品种的染色体基数均为x=9,其中"九丰1号"是经大毛花加倍而成的同源四倍体,其核型公式为2n=4x=36=4m+24sm+8st(3SAT),属3A型,其余品种均为二倍体。"小鸡爪"的核型公式为2n=2x=18=4m+8sm+6st(2SAT),属3A型;"鸡爪花"的核型公式为2n=2x=18=2m+8sm+8st(4SAT),属3B型;"大毛花"的核型公式为2n=2x=18=2m+14sm+2st,属3A型;"四季金银花"的核型公式为2n=2x=18=2m+10sm+6st(4SAT),属3A型;菰腺忍冬的核型公式为2n=2x=18=4m+14sm,属2A型。核型不对称系数表明菰腺忍冬在进化上较为原始。"小鸡爪""大毛花""九丰1号""四季金银花"都属3A类型,表明这4个品种在进化上亲缘关系最为密切。

广金钱草根尖染色体制片技术及核型分析

目的建立广金钱草根尖染色体制片方法,为广金钱草染色体数目鉴定提供参考。方法采用常规压片法制片,以广金钱草根尖为材料,探讨根尖长度、取材时间、预处理方法、解离方法以及染色时间等相关因素对广金钱草根尖染色体制片效果的影响,并进行核型分析。结果于上午9:00取0.5 cm根尖,0.05%秋水仙素预处理3 h,卡诺固定液固定24 h,1.0 mol/L HCl溶液60℃下解离10 min,改良卡宝品红染色20 min,所得根尖染色体制片效果最好。核型分析结果表明,细胞染色体数为2n=2x=22,中部着丝粒染色体(m)为7对,近中部着丝粒染色体(sm)为3对,近端部着丝粒染色体(st)为1对,核型属于2A型,核型不对称系数为60.61%。结论本研究获得了广金钱草根尖染色体制片最佳技术条件。

两种五加科园林植物染色体制片优化与核型分析

以五加科的掌叶梁王茶和八角金盘未展开幼叶叶尖为试材,采用常规压片法制片,研究了优化染色体制片条件和核型分析,以期为供试物种的育种工作开展提供依据。结果表明:掌叶梁王茶的最佳预处液为0.002 mol·L-18-羟基喹啉和0.04%放线菌酮混合液,八角金盘则为0.001 mol·L-18-羟基喹啉。2个物种其余的最佳制片方法相同,具体为09:00-09:30取样、V无水乙醇:V冰醋酸=3:1卡诺固定液处理12~24 h、V无水乙醇:V浓盐酸=1:1解离液处理13 min、改良苯酚品红染色液处理10 min。掌叶梁王茶染色体核型为2n=48=28m+18sm+2st,不对称系数61%,2B核型;八角金盘为2n=48=34m+14sm,不对称系数60%,2A核型。与已报道的五加科植物核型进行比较,2个物种进化程度不高,研究结果丰富了对供试物种遗传组成的认知。