蟾蜍毒素对S180小鼠移植瘤的抑制作用及其毒副作用的实验研究

目的探讨醇溶性蟾蜍毒素在小鼠体内对S180肿瘤细胞的抑制作用及其毒副作用。方法本研究用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆，采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化，获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物（ethanol extract of toad venom，EET），将其作用于S180荷瘤小鼠模型，计算肿瘤抑制率和生命延长率，同时通过血生化和病理等检测观察其对各脏器的毒副作用。结果5mg／kg和0．5mg／kg的EET对S180荷瘤小鼠实体瘤组织的抑瘤率分别是47．096和34．196（P〈0．05）；对腹水瘤小鼠的生命延长率分别是46．2％和36．5％（P〈0．05）；同时，0．5mg／kg的EET可明显升高白细胞达（11±4）×100／L（P〈0．05）。但EET在5mg／kg时可引起总胆红素升高达（30±5）μmol／L（P〈0．05）。结论0．5～5mg／kg的EET可以明显抑制荷瘤小鼠体内S180肿瘤细胞的生长，但EET的剂量达到5mg／kg时可以损伤肝脏。

薄层层析法分离鉴定蟾蜍毒素和毒鼠强

目的：建立用薄层层析法分离鉴定蟾蜍毒素和毒鼠强的方法。方法：用薄层层析法分离检测。结果：毒鼠强标准的Rf=0.59,显蓝紫色斑点,蟾蜍毒素在Rf=0.2-0.65,能得到至少8个以上的彩色斑点,毒鼠强的蓝紫色斑点不受干扰。结论：该方法操作简便,结果可靠。

蟾蜍毒素对P-gp阳性白血病K562细胞的杀伤作用

目的 :探讨蟾蜍毒素混合物对白血病K5 62敏感株和耐柔红霉素株细胞的杀伤作用。方法 :采用四甲基偶氮唑盐 (MTT )法检测细胞的生长率 ,流式细胞仪测定细胞的DNA含量 ,细胞涂片经Wright Giemsa染色观察细胞凋亡。结果 :蟾蜍毒素混合物 >0 0 2 μg/mL以上时 ,抑制K5 62 /S和K 5 62 /D细胞的增殖 ;在0 0 4μg/mL以上浓度时 ,K5 62 /D细胞的生长率明显降低 ,与K5 62 /S相比差异有统计学意义。当 0 0 4μg/mL的蟾蜍毒素混合物处理K5 62 /S和K5 62 /D细胞 2 4h ,仅K5 62 /D细胞发生明显的G2 /M期阻滞 ;处理 48h ,K5 62 /S和K5 62 /D均发生明显的G2 /M期阻滞。 0 4μg/mL的蟾蜍毒素混合物使K5 62 /D细胞在 2 4h就发生明显凋亡 ,而K 5 62 /S细胞未见凋亡。结论 :蟾蜍毒素混合物对K 5 62 /S和K 5 62 /D细胞均具有杀伤作用 ,与K5 62 /S相比 ,对K5 62 /D的杀伤作用明显增强 ,并且不受P gp影响。

蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡中对相关蛋白的影响

目的探讨蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡及其机制。方法 MTT检测蟾蜍毒素对结肠腺癌细胞HT-29增殖抑制;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞凋亡;Western-Blot检测livin、Bcl-2、Bax及Capase-3蛋白的表达。结果蟾蜍毒素抑制HT-29细胞增殖,呈时间、剂量依赖关系;蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡,形态学观察到典型的凋亡小体;流式细胞仪检测到明显亚二倍体凋亡峰;蟾蜍毒素诱导细胞凋亡过程中下调livin、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,并活化Caspase-3蛋白。结论蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡可能与下调livin、Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达并活化Caspase-3有关。

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠疗效及毒副作用的实验研究

目的:探讨醇溶性蟾蜍毒素在小鼠体内对H22肝癌细胞的抑制作用及其毒副作用,为进一步分离纯化蟾酥和开发抗肿瘤新药提供动物实验基础。方法:采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化乙醇溶解的蟾蜍分泌物原浆,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(ethanolextractofChinesetoadvenom,EET),分别将其作用于H22实体瘤和腹水瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率和生命延长率,判断疗效;同时通过血生化和病理等检测观察其对各脏器的毒副作用。结果:与对照组比较,5mg/kg和0.5mg/kg的EET对H22荷瘤小鼠实体瘤组织的抑瘤率分别是51.6%和41.2%,t=2.346,P=0.028;t=2.109,P=0.045。对腹水瘤小鼠的生命延长率分别是34.7%和27.7%,t=3.346,P=0.002;t=2.312,P=0.035。同时,0.5mg/kg的EET可明显升高白细胞达(11.6±2.3)×109L-1,t=3.326,P=0.002。但EET在5mg/kg时可引起总胆红素升高达(46.5±14.8)μmol/L,t=2.347,P=0.036。结论:0.5～5mg/kg的EET可以明显抑制荷瘤小鼠体内H22肿瘤细胞的生长,且远远低于华蟾素的有效剂量范围;但EET的剂量达到5mg/kg时可以损伤肝脏。

华蟾素配合立体定向放射治疗中晚期食管癌28例

目的观察华蟾素配合立体定向伽玛射线放射治疗中晚期食管癌的近期临床疗效。方法将56例患者随机均分为华蟾素联合伽玛刀治疗组(治疗组)和伽玛刀单独治疗组(对照组)。伽玛刀治疗总剂量40～50Gy,次数10～12次,边缘剂量300～420cGy,等剂量曲线55%～85%,每日治疗1次;治疗组加用华蟾素注射液20～30mL静脉滴注,1次/d,连续3～4周。结果 56例患者均顺利完成治疗,治疗组梗阻症状总缓解率、影像学总缓解率均显著高于对照组(P均小于0.05);治疗组不良反应如急性放射性食管炎、白细胞下降发生率虽低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论华蟾素注射液联合伽玛射线立体定向放射治疗中晚期食管癌患者,临床症状缓解率高,毒副作用小,患者耐受性好,近期疗效令人满意。

华蟾素分散片的溶出度测定

目的考察华蟾素分散片的溶出度及其体外释药性质。方法照溶出度测定法[2005年版《中国药典(二部)》附录XC溶出度试验法第三法(桨法)],以0.1 mol/L盐酸溶液100 mL为溶出介质,采用紫外分光光度法测定,检测波长为555 nm。结果线性范围为0.409～12.276μg/mL,r=0.999 7(n=7),平均回收率为98.4%～100.5%(n=9),RSD为1.2%～4.8%(n=9)。结论所采用的方法简便、准确、灵敏。该制剂具有良好的溶出度,符合规定。

大剂量华蟾素治疗中晚期肝癌疗效观察

１９９５年１－９月我科使用大剂量华蟾素治疗中晚期肝癌１０例，效果较好，临床症状改善明显。对于全身状况差、白细胞低、不能耐受手术、肝动脉插管化疗、全身化疗或局部放疗者，效果尤佳，治疗后ｋａｒｎｏｆｓｋｙ评分平均提高５分，有效７０％（Ⅰ级２０％、Ⅱ级５０％）。明显缓解临床症状，减轻痛苦，提高了生存质量，延长生长期。而且副作用小，是中晚期肝癌姑息治疗中一种值得探讨的抗癌药物。

蟾蜍毒素中毒导致恶性心律失常成功抢救案例及文献分析

目的探讨蟾蜍毒素中毒导致恶性心律失常的临床特点及治疗要点。方法回顾性分析威海市中心医院救治的5例蟾蜍毒素中毒导致恶性心律失常患者,总结患者的临床表现、心电图特点、诊断及救治经验。结果 (1)蟾蜍毒素是常见可导致恶性心律失常的动物毒素。(2)蟾蜍毒素常导致缓慢性心律失常。(3)5例患者经积极洗胃、导泻、补充钾镁、血液灌流、抗心律失常药物及安装临时起搏器等综合治疗均抢救成功。结论早期明确中毒毒素,动态监测心电图变化,正确抗心律失常,一般治疗联合血液净化是成功抢救急性动植物毒素中毒导致恶性心律失常患者的关键。

华蟾素辅助立体定向体部伽玛刀治疗原发性肝癌的临床研究

目的研究立体定向体部伽玛刀配合华蟾素注射液在原发性肝细胞癌综合治疗中的临床价值。方法选择诊断明确的60例原发性肝癌患者作为研究对象,将他们随机分为2组:对照组30例,给予立体定向体部伽玛刀治疗;联合组30例,在接受伽玛刀治疗的同时给予华蟾素注射液静滴,比较两组患者治疗后的临床疗效。结果治疗后联合组患者在疼痛缓解率、生活质量、生存时间、临床疗效等指标上均较对照组患者进一步改善和提高(P<0.05)。结论华蟾素能减轻放疗毒副反应,立体定向体部伽玛刀联合华蟾素能提高肝癌患者的临床疗效,不良反应轻,是一种安全有效的综合治疗方案。